Nr kat. IR781

FLEX
Monoclonal Mouse
Anti-Human CD23
Clone DAK-CD23
Ready-to-Use
(Link)
Nr kat. IR781
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Przeciwciało FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human CD23, Clone DAK-CD23, Ready-to-Use (Link) jest przeznaczone do stosowania w
immunohistochemii w aparatach Autostainer Link. Przeciwciała przeciwko CD23 są przydatne w identyfikacji zarówno prawidłowych
limfocytów B, jak i chłoniaków złośliwych. Wraz z panelem przeciwciał, anty-CD23 jest szczególnie przydatne w róŜnicowaniu pomiędzy
przewlekłą białaczką limfocytową z komórek B/chłoniakiem limfocytarnym z małych komórek i chłoniakiem z komórek płaszcza (1).
Interpretacja kliniczna wystąpienia barwienia lub jego braku musi być uzupełniona o badania morfologiczne z wykorzystaniem odpowiednich
prób kontrolnych i powinna być przeprowadzana przez doświadczonego patologa z uwzględnieniem historii choroby pacjenta i innych badań
diagnostycznych.
Synonim antygenu
FcεRII, BLAST-2, receptor IgE o niskim powinowactwie (2, 3).
Podsumowanie
i wyjaśnienie
CD23 jest glikoproteiną błonową typu II o masie cząsteczkowej 45 kDa, naleŜącą do rodziny lektyn typu C i identyczną z receptorem IgE
o niskim powinowactwie (FcΣRII), odnajdowanym na komórkach B (4, 5). Ekspresję CD23 wykazują przede wszystkim komórki B i
monocyty; silna ekspresja ma miejsce w limfoblastach B zainfekowanych przez EBV (2, 3). Interleukina-4 oraz interleukina-13 stymulują
wzrost ekspresji CD23 w komórkach B (4). Na limfocytach B CD23 ulega wybiórczej ekspresji – jest obecny na komórkach produkujących
wydzielnicze sIgM i sIgD, lecz zanika po ich róŜnicowaniu do komórek wydzielających Ig (2). CD23 występuje równieŜ w wielu innych
rodzajach komórek, np. w limfocytach T, eozynofilach, płytkach krwi, komórkach Langerhansa i podzbiorze komórek nabłonka grasicy (2).
CD23 nie jest za to obecne w wielu prawidłowych, nielimfoidalnych tkankach ludzkich, takich jak kości, chrząstki, ośrodkowy układ nerwowy,
tkanka łączna, gruczoły wydzielania wewnętrznego, przewód pokarmowy, międzybłonek, mięśnie, łoŜysko, nerwy obwodowe, tkanki układu
oddechowego, skóra, maziówka, pępowina, układ moczowy, Ŝeński/męski układ rozrodczy i naczynia (6). CD23 jest zwykle wykrywane
w komórkach nowotworowych w przewlekłej białaczce limfocytowej/chłoniaku z komórek B (B-CLL), natomiast nie występuje w chłoniaku
z komórek płaszcza (1).
Patrz dokument: „Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych (IHC)” firmy Dako lub instrukcje systemu detekcji
procedur IHC.
Dostarczany odczynnik
Gotowe do uŜycia mysie przeciwciało monoklonalne jest dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym białko stabilizujące i azydek
sodu w stęŜeniu 0,015 mol/l.
Klon: DAK-CD23. Izotyp: IgG1, kappa.
Immunogen
Białko rekombinowane zawierające aminokwasy 48-248 ludzkiego CD23.
Swoistość
W testach Western blot przeciwciało znakuje prąŜek 45 kDa odpowiadający CD23.
Środki ostroŜności
1.
2.
3.
4.
5.
Przechowywanie
Skrócony przepis*
Do stosowania przez wyszkolony personel.
Opisywany produkt zawiera azydek sodu (NaN3), który w czystej postaci jest silnie toksyczny. StęŜenie NaN3 występujące w produkcie
nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub miedzią, wchodzącymi w skład instalacji
kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali. Po usunięciu spłukać duŜą ilością wody, aby zapobiec
nagromadzeniu się azydku metalu w kanalizacji.
Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych, naleŜy stosować właściwe procedury
postępowania.
W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą naleŜy nosić odpowiednie osobiste wyposaŜenie ochronne.
Niewykorzystany roztwór utylizować zgodnie z lokalnymi, wojewódzkimi i krajowymi rozporządzeniami.
Przechowywać w temperaturze 2-8 °C. Nie stosowa ć po upływie terminu waŜności podanego na opakowaniu. Jeśli odczynniki są
przechowywane w warunkach innych niŜ podane powyŜej, uŜytkownik musi zweryfikować takie warunki. Nie ma jednoznacznych oznak
świadczących o niestabilności tego produktu. Dlatego, równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów, naleŜy
wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w
procedurach laboratoryjnych, oraz gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem wsparcia technicznego
firmy Dako.
Krok
Utrwalanie
Obróbka wstępna
Rozcieńczenie
Bufor do rozcieńczania
Kontrola ujemna
Wizualizacja
Barwienie kontrastowe
Tkanka kontrolna
Szkiełka podstawowe/
montowanie
Oprzyrządowanie
Komentarze
Formalina
EnVision™ FLEX, Low pH (nr kat. K8005)
Gotowy do uŜycia
Rozcieńczony fabrycznie
FLEX Negative Control, Mouse (Link)
(nr kat. IR750)
EnVision™ FLEX+ (Link) (nr kat. K8002)
EnVision™ FLEX Hematoxylin (Link)
(nr kat. K8008)
Migdałki
FLEX IHC Microscope Slides
(nr kat. K8020)
Autostainer Link 48
20 min HIER, 3 w 1
Inkubacja 20 min
Nie rozcieńczać przeciwciała
Inkubacja 20 min
Inkubacja 20 min, inkubacja w odczynniku
Mouse (LINKER) 15 min, inkubacja w odczynniku
DAB+ 2x5 min
Inkubacja 5 min
Odczyn błonowy
Zalecane dla uzyskania lepszego przylegania
materiału. Wymagane trwałe nakrywanie preparatów
NaleŜy stosować fiolki dostosowane do aparatu
(nr kat. SK200-SK203)
*UŜytkownik jest zobowiązany przeczytać ulotki dostarczane do opakowań, które zawierają dokładne instrukcje przeprowadzania procedury
barwienia i postępowania z produktem.
(122143-001)
P01740PL_002_IR781/2011.10 s. 1/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Przygotowanie próbek
Skrawki zatapiane w parafinie: Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w
parafinie. Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o grubości około 4 µm.
Obróbka wstępna Wymagane jest poddanie utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków tkankowych cieplnemu
odmaskowaniu antygenu (HIER). Optymalne wyniki uzyskuje po przeprowadzeniu na tkankach HIER przy uŜyciu EnVision™ FLEX Target
Retrieval Solution, Low pH (50x) (nr kat. K8005). Odparafinowanie, nawodnienie i cieplne odmaskowanie antygenu (HIER) moŜna
przeprowadzić z uŜyciem Dako PT Link (nr kat. PT100/PT101). Szczegółowe informacje zawiera Instrukcja uŜytkownika aparatu PT Link.
W aparatach PT Link naleŜy stosować następujące parametry: Temperatura wstępnego ogrzewania: 65 °C; temperatura i czas
odmaskowania antygenu: 97 °C przez 20 (±1) minut, n astępnie ochłodzić do 65 °C. Usun ąć statywy na szkiełka ze zbiornika aparatu PT
Link i natychmiast zanurzyć szkiełka w słoju/zbiorniku (np. PT Link Rinse Station, nr kat. PT109) wypełnionym rozcieńczonym buforem
EnVision™ FLEX Wash Buffer (20x) (nr kat. K8007) o temperaturze pokojowej. Zostawić szkiełka w buforze Wash Buffer na 1-5 minut.
W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie mogą wyschnąć. W celu uzyskania
lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych zaleca się stosowanie szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020).
Po barwieniu szkiełka naleŜy nakryć za pomocą środka do trwałego zatapiania.
Wykonanie odczynu
Wizualizacja: Zalecanym system wizualizacji jest EnVision FLEX+, Mouse, High pH, (Link) (nr kat. K8002).
Uwaga: Do HIER naleŜy stosować rozcieńczony (50x) odczynnik EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low pH (nr kat. K8005).
Program: W systemie Autostainer Link wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji. Zalecana objętość stosowanego
odczynnika to 1 x 200 µl lub 2 x 150 µl na preparat. Szczegółowe informacje dotyczące wkładania szkiełek mikroskopowych i odczynników
przedstawiono w Instrukcji uŜytkownika aparatu Autostainer Link. Jeśli protokoły nie są dostępne w uŜywanym systemie Autostainer Link,
naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Plik instalacyjny do aktualizacji oprogramowania DakoLink
z protokołem i informacją o odczynniku Anti-CD23, Clone DAK-CD23 do oprogramowania Autostainer Link moŜna znaleźć na stronie
www.dako.com/installer. Wszystkie procedury inkubacji naleŜy równieŜ przeprowadzać w temperaturze pokojowej.
Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału i sposobów jego przygotowania i powinny być określone
indywidualnie w kaŜdym laboratorium. JeŜeli patolog oceniający preparat Ŝyczy sobie wybarwienia o innym natęŜeniu, czasy inkubacji oraz
uŜycie szablonów wizualizacji EnVision FLEX/EnVision FLEX+ mogą zostać zmienione. W celu uzyskania informacji dotyczącej zmiany
programowania protokołu naleŜy skontaktować się z działem obsługi/obsługą techniczną firmy Dako. NaleŜy upewnić się, Ŝe działanie
zmodyfikowanego protokołu jest prawidłowe – w tym celu naleŜy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w części „Charakterystyka
wydajnościowa”.
Barwienie kontrastowe: Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną za pomocą EnVision FLEX Hematoxylin (Link) (nr kat.
K8008). Zaleca się stosowanie bezwodnego, trwałego środka do zatapiania.
Kontrole: Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne z
uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować migdałki, a komórki/struktury we wszystkich dodatnich
preparatach powinny wykazywać odczyn reakcji, opisany dla danej tkanki w części „Charakterystyka działania”. Zalecana kontrola ujemna to
FLEX Negative Control, Mouse (Link) (nr kat. IR750).
Interpretacja wybarwienia
Komórki znakowane przez przeciwciała wykazują odczyn błonowy.
Charakterystyka działania
Tkanki prawidłowe (7): Limfocyty B w migdałku, w strefie płaszcza, wykazują odczyn słaby, do umiarkowanego, natomiast komórki
dendrytyczne grudek chłonnych w ośrodkach rozmnaŜania wykazują odczyn umiarkowany, do silnego.
Rodzaj tkanki
(liczba badanych
przypadków)
Adrenal (3)
Bone marrow (3)
Breast (3)
Cerebellum (3)
Cerebrum (3)
Cervix (3)
Colon (3)
Esophagus (3)
Składniki tkankowe dające
dodatni odczyn
Rodzaj tkanki
(liczba badanych
przypadków)
Ovary (3)
Pancreas (3)
Parathyroid (3)
Pituitary (3)
Prostate (3)
Salivary gland (3)
Skin (3)
Small intestine (2)
Spleen (3)
0/3
0/3
0/3
0/3
0/3
0/3
0/3
0/3
Kidney (3)
Liver (3)
Lung (3)
Mesothelial cells (2)
0/3
0/3
3/3 Macrophages
0/2
Stomach (2)
Testis (3)
Thymus (3)
Muscle, cardiac (3)
Muscle, skeletal (3)
Nerve, peripheral (3)
0/3
0/3
0/3
Thyroid (3)
Tonsil (3)
Uterus (3)
Składniki tkankowe dające dodatni
odczyn
0/3
0/3
0/3
0/3
0/3
1/3 Ductal epithelial cells
0/3
2/2 Lymphoid tissue (10%), membrane
1/3 Lymphoid tissue (15%), membrane
2/3 Lymphoid tissue (50%), membrane
0/2
0/3
3/3 Scattered cells, medulla,
cytoplasmic
1/3 Follicular epithelial cells
3/3
0/3
Tkanki nieprawidłowe (7): Dzięki przeciwciału moŜliwe było wyznakowanie 8/9 przypadków przewlekłej białaczki limfocytowej z komórek B
(B-CLL) i 3/3 chłoniaka typu grudkowego. Nie stwierdzono odczynu w 3 chłoniakach z komórek płaszcza.
(122143-001)
P01740PL_002_IR781/2011.10 s. 2/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Piśmiennictwo
1.
Rossi S, Laurino L, Furlanetto A, Chinellato S, Orvieto E, Canal F, et al. Rabbit monoclonal antibodies: a comparative study between a novel category of
immunoreagents and the corresponding mouse monoclonal antibodies. Am J Clin Pathol 2005;124:295-302.
2.
Sarfati M. BC7. CD23 Workshop Panel report. In: Kishimoto T, Kikutani H, von dem Borne AEG, Goyert SM, Mason DY, Miyasaka M, et al., editors. Leucocyte typing
VI. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 6th International Workshop and Conference; 1996 Nov 10-14; Kobe, Japan. New York, London: Garland
PublishingInc.; 1997. p.144-7.
3.
Kikutani H, Suemura M, Owaki H, Yamasaki K, Barsumian EL, Nakamura H, et al. B3.3. CD23 is a low-affinity Fce receptor (FceR): regulation of FceR expression. In:
McMichael AJ, Beverley PCL, Cobbold S, Crumpton MJ, Gilks W, Gotch FM, et al., editors. Leucocyte typing III. White cell differentiation antigens. Proceedings of the
3rd International Workshop and Conference; 1986 Sep 21-26; Oxford, England. Oxford, New York, Tokyo: Oxford University Press; 1987. p. 419-22.
4.
Aubry JP, Bonnefoy JY, De Vries JE, Banchereau J. B3.2. The CD23 antigen is the human lymphocyte receptor for IgE. In: McMichael AJ, Beverley PCL, Cobbold S,
Crumpton MJ, Gilks W, Gotch FM, et al., editors. Leucocyte typing III. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 3rd International Workshop and
Conference; 1986 Sep 21-26; Oxford, England. Oxford, New York, Tokyo: Oxford University Press; 1987. p. 417-9.
5.
Sarfati M, Ishihara H, Delespesse G. B7. CD23 Workshop Panel report. In: Schlossman SF, Boumsell L, Gilks W, Harlan JM, Kishimoto T, Morimoto C, et al., editors.
Leucocyte typing V. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 5th International Workshop and Conference; 1993 Nov 3-7; Boston, USA. Oxford, New York,
Tokyo: Oxford University Press; 1995. p. 530-3.
6.
Pallesen G. B2.5. The distribution of CD23 in normal human tissues and in malignant lymphomas. In McMichael AJ, Beverley PCL, Cobbold S, Crumpton MJ, Gilks W,
Gotch FM, et al., editors. Leucocyte typing III. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 3rd International Workshop and Conference; 1986 Sep 21-26;
Oxford, England. Oxford, New York, Tokyo: Oxford University Press; 1987. p. 383-6.
7.
M7312. Document D04962. Report on file.
Objaśnienie symboli
(122143-001)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
ZuŜyć przed
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Zawartość wystarcza na <n>
testów
Producent
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Numer serii
P01740PL_002_IR781/2011.10 s. 3/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17