MONOLISA™ HBs Ag ULTRA 72408 CONFIRMATORY - Bio-Rad

MONOLISA™ HBs Ag ULTRA 72408 CONFIRMATORY - Bio-Rad

MONOLISA™ HBs Ag ULTRA
CONFIRMATORY
TEST DO POTWIERDZENIA OBECNOŚCI
LUDZKIEJ SUROWICY LUB OSOCZU
72408
25 testów
HBsAg
W
Kontrola jakości producenta
Wszystkie produkty wyprodukowane i wprowadzane do obrotu przez firmę Bio-Rad,
podlegają pełnemu systemowi kontroli jakości, od momentu otrzymania surowców aż do
chwili wprowadzenia produktu finalnego do sprzedaży.
Każda seria odczynników poddawana jest kontroli jakości i jest dopuszczona do sprzedaży,
po spełnieniu określonych kryteriów jakości.
Dane dotyczące procesu produkcji oraz kontroli jakości każdej serii produkcyjnej są przez
nas archiwizowane.
SPIS TREŚCI
1-
PRZEZNACZENIE
2-
ZASADA TESTU MONOLISA™ HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY
3-
SKŁAD ZESTAWU
4-
ZALECENIA DLA UŻYTKOWNIKA
5-
HIGIENA I BEZPIECZEŃSTWO PRACY
6-
INNE NIEZBĘDNE MATERIAŁY
7-
PRZECHOWYWANIE I TRWAŁOŚĆ ODCZYNNIKÓW
8-
PRÓBKI
9-
PROCEDURA BADANIA
10 -
OBLICZANIE I INTERPRETACJA WYNIKÓW
11 -
CHARAKTERYSTYKA TESTU
12 -
OGRANICZENIA TESTU
13 -
LITERATURA
1 – PRZEZNACZENIE
Test MONOLISA™ HBsAg ULTRA CONFIRMATORY przeznaczony jest do potwierdzenia
obecności antygenu powierzchniowego wirusa zapalenia wątroby typu B (HBsAg) w próbkach
ludzkiej surowicy lub osocza, które zostały uznane za reaktywne w teście przesiewowym
MONOLISA™ HBsAg ULTRA (nr kat. 72346/72348).
2 - ZASADA TESTU MONOLISA™ HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY
Test MONOLISA™ HBsAg ULTRA CONFIRMATORY wykorzystuje zasadę neutralizacji antygenu
HBsAg występującego w próbkach surowicy lub osocza krwi przez nadmiar przeciwciał anty-HBs
(rozcieńczalnik anty-HBs: czynnik neutralizujący).
Zalecane jest, aby próbki, które są powtarzalnie dodatnie w badaniu za pomocą testu
przesiewowego MONOLISA™ HBsAg ULTRA, przebadane zostały za pomocą odczynników
zestawu potwierdzającego MONOLISA™ HBsAg ULTRA CONFIRMATORY. Jeżeli próbka jest
pozytywna pod względem obecności antygenu HBs, przeciwciała anty-HBs wysycają determinanty
antygenowe, które nie mogą następnie związać się z przeciwciałami opłaszczonymi na fazie stałej.
Można zaobserwować zmniejszenie wartości gęstości optycznej podczas porównania gęstości
optycznej studzienki z dodanym odczynnikiem neutralizacyjnym, ze studzienką zawierającą
kontrolę ujemną - rozcieńczalnik bez przeciwciał anty-HBs. Analizuje się kilka rozcieńczeń próbki,
według potrzeby, aby uwzględnić zmienność stężenia HBsAg.
Wykonanie testu obejmuje następujące etapy:
1) Inkubacja surowicy kontrolnej i próbek dodatnich z odczynnikiem neutralizującym oraz
koniugatem w obecności przeciwciał anty-HBs opłaszczonych na fazie stałej. Dla każdej
surowicy wykonuje się kontrolę w studzience, w której odczynnik neutralizujący zastępuje się
kontrolą ujemną - rozcieńczalnikiem.
Dalsza część procedury jest identyczna jak dla zestawu MONLISA® HBsAg ULTRA:
2) Płukanie studzienek, przeprowadzenie reakcji enzymatycznej związanej z fazą stałą przez
dodanie substratu.
3) Zatrzymanie reakcji i odczyt gęstości optycznej przy długości fali 450/620-700 nm.
3 - SKŁAD ZESTAWU
OZNACZENIE
RA
RB
SKŁAD ODCZYNNIKA
Odczynnik neutralizujący
Bufor Tris NaCl (pH 8,0), zawierający surowicę owczą oraz
surowicę ludzką ujemną pod względem antygenu HBs oraz
przeciwciał anty-HVC i anty-HIV1/2, z dodatkiem przeciwciał
anty-HBs.
Odczynnik gotowy do użycia.
Środek konserwujący: ProClin™ 300 (0,25%)
Rozcieńczalnik kontrolny ujemny
Bufor Tris NaCl (pH 8,0), zawierający surowicę owczą oraz
surowicę ludzką negatywną pod względem antygenu HBs oraz
przeciwciał anty-HVC i anty-HIV1/2.
RC
Odczynnik gotowy do użycia.
Środek konserwujący: ProClin™ 300 (0,25%)
Rozcieńczalnik próbki
Roztwór soli fizjologicznej 0,85%.
Odczynnik gotowy do użycia.
Środek konserwujący: ProClin™ 300 (0,1%)
OPAKOWANIE
1 fiolka
0,7 ml
1 fiolka
0,7 ml
1 fiolka
27 ml
4 – ZALECENIA DLA UŻYTKOWNIKA
Uzyskanie prawidłowego wyniku zależy od przestrzegania zasad Dobrej Praktyki Laboratoryjnej:
• Nie stosować odczynników po upływie daty przydatności do użytku.
• Podczas oznaczenia nie mieszać i nie łączyć odczynników zestawu MONOLISA™ HBs Ag
ULTRA CONFIRMATORY o różnych numerach serii.
• Przed użyciem, odczekać 30 minut, aby odczynniki uzyskały temperaturę otoczenia (1830°C).
• Stosować dokładnie umyte i wypłukane wodą destylowaną naczynia szklane lub najlepiej
materiały jednorazowego użytku.
• Zapoznać się z instrukcją obsługi do zestawu MONOLISA™ HBs Ag ULTRA.
5 – HIGIENA I BEZPIECZEŃSTWO PRACY
•
•
•
Wszystkie odczynniki zestawu przeznaczone są do diagnostyki in vitro.
Materiał pochodzenia ludzkiego, stosowany do przygotowania odczynników RA i RB został
przebadany i nie stwierdzono w nim obecności antygenu HBs oraz przeciwciał anty-HIV1,
anty-HIV2 i anty-HCV. Ponieważ nie ma metod gwarantujących brak obecności wirusów HIV,
HBV lub HCV oraz innych czynników zakaźnych, odczynniki te oraz próbki pacjenta należy
traktować jako potencjalnie zakaźne i należy postępować z należytą ostrożnością.
Ogólne instrukcje dotyczące higieny i bezpieczeństwa pracy podano w instrukcji do zestawu
MONOLISA™ HBsAg ULTRA.
Niektóre odczynniki zawierają ProClinTM 300 (0,04%, 0,1% i/lub 0,5%)
Xi Drażniący
R43: Może powodować uczulenie w kontakcie ze skórą
Xi - drażniący
S28-37: W razie kontaktu ze skórą natychmiast spłukać obficie wodą z mydłem.
Stosować odpowiednie ubranie ochronne.
6 – INNE NIEZBĘDNE MATERIAŁY
Zobacz w instrukcji obsługi do zestawu MONOLISA™ HBs Ag ULTRA.
7 – PRZECHOWYWANIE I TRWAŁOŚĆ ODCZYNNIKÓW
•
•
Przed użyciem przechowywać zestaw w temperaturze od +2 °C do +8 °C.
Po otwarciu, wszystkie odczynniki mogą być wykorzystywane do terminu ważności podanego
na opakowaniu, pod warunkiem, że są przechowywane w temperaturze od +2 °C do +8 °C.
8 - PRÓBKI
•
•
Sprawdź w instrukcji obsługi do zestawu MONOLISA™ HBs Ag ULTRA.
Próbki o bardzo wysokim stężeniu HBs Ag, mogą zostać niezneutralizowane przez odczynnik
neutralizujący jeżeli oznaczane są w formie nierozcieńczonej.
Zobacz rozdział 10 "OBLICZANIE I INTERPRETACJA WYNIKÓW", podrozdział "Kryteria
walidacji testu".
Uwaga: próbki o wysokim stężeniu HBs Ag, o gęstości optycznej większej niż 3.000 w teście
MONOLISA™ HBs Ag ULTRA, można oznaczać bezpośrednio jeżeli zostaną rozcieńczone
1/100 za pomocą rozcieńczalnika próbek.
9 - PROCEDURA BADANIA
Postępować według poniższych etapów, stosując odczynniki zestawu MONOLISA™ HBs Ag
ULTRA.
1. Przygotować roztwór płuczący (R2) oraz roboczy roztwór koniugatu (R6+R7): patrz rozdział 8
"PRZYGOTOWANIE ODCZYNNIKÓW", podrozdział "Odczynniki do rekonstytucji" w instrukcji
obsługi do zestawu MONOLISA™ HBs Ag ULTRA.
2. Wyjąć ramkę mikropłytki oraz wymaganą liczbą pasków (odczynnik R1) z opakowania
ochronnego.
3. Nanieść odczynniki do studzienek w następującej kolejności:
• Studzienki A1, A2: 100 µl kontroli ujemnej (R3) zestawu MONOLISA™ HBs Ag ULTRA.
• Studzienki B1, B2: 100 µl kontroli dodatniej (R4) zestawu MONOLISA™ HBs Ag ULTRA.
• Studzienki C1, C2, D1, D2: 100 µl pierwszej próbki do potwierdzenia.
• Studzienki E1, E2, F1, F2: 100 µl drugiej próbki do potwierdzenia.
• Studzienki G1, G2, H1, H2: 100 µl trzeciej próbki do potwierdzenia i tak dalej...
Zależnie od wymagań stosowanego systemu, możliwa jest zmiana położenia kontroli a także
kolejności dystrybucji odczynników.
4. Dodać 20 μl rozcieńczalnika kontrolnego ujemnego (RB) do studzienek A1, B1, C1, D1, E1, F1,
G1, H1 oraz 20 μl odczynnika neutralizującego (RA) do studzienek A2, B2, C2, D2, E2, F2, G2,
H2, itd...
5. Nanieść po 50 µl roboczego roztworu koniugatu (R6+R7) do wszystkich studzienek. Wymieszać
zawartość wszystkich studzienek za wykonując co najmniej 3 aspiracje.
6. Przejść do etapu 7 i kolejnych etapów opisanych w rozdziale 11 "PROCEDURA" instrukcji
obsługi do zestawu MONOLISA™ HBs Ag ULTRA.
10 - OBLICZANIE I INTERPRETACJA WYNIKÓW
1) Współczynnik reaktywności kontroli i próbek
1. Dla kontroli dodatniej (R4) i ujemnej (R3) zestawu MONOLISA™ HBs Ag ULTRA, obliczyć:
Współczynnik reaktywności =
średnia OD kontroli z RB
[(OD R3 z RB + OD R3 z RA)/2] + 0,050
2. Dla każdej próbki obliczyć:
Współczynnik reaktywności =
średnia OD próbki z RB
[(OD R3 z RB + OD R3 z RA)/2] + 0,050
2) Procent hamowania
1. Obliczyć procent hamowania dla gęstości optycznych odnotowanych dla kontroli dodatnich (R4)
i ujemnych (R3) po dodaniu odczynnika neutralizującego (RA) oraz rozcieńczalnika kontroli
negatywnej (RB).
Procent zahamowania =
(OD kontroli z RB) – (OD kontroli z RA)
OD kontroli z RB
x 100
2. Obliczyć procent hamowania dla gęstości optycznych odnotowanych dla próbek po dodaniu
odczynnika neutralizującego (RA) oraz rozcieńczalnika kontrolnego ujemnego (RB).
Procent zahamowania =
3) Kryteria walidacji testu
(średnie OD próbek z RB) - (średnie OD próbek z RA)
średnie OD próbek z RB
x 100
1. Wartości gęstości optycznej dla kontroli ujemnej (R3) z dodatkiem rozcieńczalnika kontrolnego
ujemnego (RB) lub odczynnika neutralizującego (RA) muszą być niższe lub równe 0.080
jednostek OD.
Dla tej samej kontroli negatywnej (R3), współczynnik reaktywności musi wynosić mniej niż 0.8.
Dla kontroli dodatniej (R4) z dodatkiem rozcieńczalnika kontrolnego ujemnego (RB), gęstość
optyczna musi być większa niż 0.800.
Dla tej samej kontroli pozytywnej (R4), procent hamowania musi być równy lub większy niż
50%.
2. W przypadku próbek, których procent hamowania < 50%, a współczynnik reaktywności ≥ 0.8,
konieczne jest ich ponowne przebadanie po rozcieńczeniu w rozcieńczalniku próbki (1/100;
1/10 000; 1/1 000 000; itd., rozcieńczenie 100x), aby uzyskać współczynnik reaktywności < 0,8
(w tym przypadku próbka nie jest potwierdzona) lub potwierdzenie neutralizacji badanej próbki
(procent hamowania ≥ 50%).
4) Interpretacja wyników
Próbka jest potwierdzona jako dodatnia pod względem obecności HBs Ag, jeżeli współczynnik
reaktywności jest równy lub większy niż 0.8, a procent hamowania jest równy lub większy niż
50%.
Współczynnik reaktywności
próbki
Procent hamowania
Interpretacja
≥ 0,8
≥ 50%
Potwierdzenie
≥ 0,8
< 50%
Brak potwierdzenia; próbka do
rozcieńczenia
< 0,8
Jakikolwiek wynik
* Brak potwierdzenia dla próbek rozcieńczonych
Próbka niereaktywna*
Przykłady:
Test
Wartości
OD z RA
Wartości
OD z RB
Współczynnik
reaktywności
próbki
Procent
hamowania
Interpretacja
Kontrola dodatnia
(R4)
0,095
2,025
32,66
95%
Potwierdzenie
Kontrola ujemna (R3)
0,011
0,013
0,21
15%
Niereaktywna
Próbka 1
0,009
0,027
0,40
68%
Niereaktywna
0,007
0,023
2,585
3,906
63,00
34%
2,570
3,880
Brak potwierdzenia;
próbka do
rozcieńczenia
Próbka 2
0,049
2,079
33,36
98%
Potwierdzenie
Rozcieńczenie 1/100
0,045
2,058
Próbka 3
0,132
0,151
2,52
13%
0,140
0,161
Brak potwierdzenia;
próbka do
rozcieńczenia
Próbka 3
0,032
0,036
0,55
12%
Brak potwierdzenia
Rozcieńczenie 1/100
0,028
0,032
Próbka 2
11 - CHARAKTERYSTYKA TESTU
Właściwości testu MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY w połączeniu z MONOLISA ® HBs
Ag ULTRA oceniono, oznaczając próbki od losowo wybranych dawców krwi, pacjentów z ostrym lub
przewlekłym zapaleniem wątroby typu B oraz z innymi chorobami, nie związanymi z zapaleniem
wątroby typu B, a także na komercyjnych próbkach i panelach serokonwersyjnych.
Ponadto, granica czułości testu została określona przy użyciu surowic z panelu HB Francuskiej Służby
Krwi (EFS) oraz satndardów WHO (NIBSC kod 00/588).
Czułość analityczna
Wszystkie rozcieńczone próbki o stężeniach od 0.06 ng/ml do 2.2 ng/ml pochodzące z panelu czułości
HB EFS oraz wszystkie dodatnie próbki z panelu WHO NIBSC zostały potwierdzone za pomocą testu
MONOLISA™ HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY.
Stężenie większe niż 10 mg/ml HBs Ag zneutralizowano po rozcieńczeniu próbki.
Czułość
Czułość testu określono na podstawie badań wykonanych dla 337 próbek dodatnich, pochodzących
od monitorowanych pacjentów z przewlekłym lub ostrym wirusowym zapaleniem wątroby typu B.
Wszystkie próbki dodatnie zostały potwierdzone za pomocą testu MONOLISA™ HBs Ag ULTRA
CONFIRMATORY.
Przebadano ponadto próbki z 15 dobrze udokumentowanych dostępnych komercyjnie paneli
serokonwersyjnych HBV (45 próbek): wszystkie próbki pozytywne zostały zneutralizowane.
Swoistość i reakcje krzyżowe
Przebadany został zestaw firmowy składający się z 16 próbek fałszywie dodatnich w teście
MONOLISA™ HBs Ag ULTRA i żadna z nich nie została potwierdzona w teście MONOLISA™ HBs Ag
ULTRA CONFIRMATORY.
Z użyciem testu MONOLISA™ HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY przebadano również 102 próbki
pobrane od pacjentów, u których występowały różne patologie lub stany niezwiązane z wirusowym
zapaleniem wątroby typu B (kobiety ciężarne, czynnik reumatoidalny, przeciwciała przeciwjądrowe,
przeciwciała skierowane przeciwko białkom mysim oraz inne zakażenia wirusowe i bakteryjne) i
zostały one potwierdzone jako negatywne.
Dodatkowo, za pomocą testu MONOLISA™ HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY przebadano 37 próbek
dodatnich zarówno w kierunku HBs Ag jak i wobec innych markerów (czynnik reumatoidalny,
przeciwciała przeciwjądrowe, przeciwciała skierowane przeciwko białkom mysim lub inne zakażenia
wirusowe) i zostały one potwierdzone jako pozytywne.
Ponadto, 23 próbki z panelu BBI PCA 201 z współistniejącymi zakażeniami (HBV, HIV, HCV i/lub
HTLV) potwierdzono jako dodatnie w teście MONOLISA™ HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY
bezpośrednio lub po rozcieńczeniu.
Powtarzalność
Powtarzalność dla testu MONOLISA™ HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY określono przy
zastosowaniu 4 próbek: 1 próbka ujemna (próbka 1), 2 próbki dodatnie (próbki 2 i 3) oraz jedna
próbka silnie dodatnia (próbka 4).
Powtarzalność wewnątrz-testową oznaczono badając ww. 4 próbki 30 razy w jednym teście.
Powtarzalność między-testową (odtwarzalność) oznaczono badając ww. 4 próbki w duplikatach,
wykonując 2 różne badania dziennie przez okres 20 dni.
Wyniki przedstawiono w poniższych tabelach:
Tabela 1: Powtarzalność wewnątrz-testowa
n = 30
Średni %
hamowania
Odchylenie
standardowe (SD)
CV (%)
Próbka 1
(współczynnik = 0,37)
Próbka 2
(współczynnik = 1,32)
Próbka 3
(współczynnik = 3,39)
Próbka 4
(współczynnik = 18,39)
4
85,37
94,89
98,38
12,6
1,59
0,66
0,21
Nie dotyczy
1,86%
0,69%
0,22%
Tabela 2: Odtwarzalność
n = 40
Próbka 1
(współczynnik = 0,37)
Próbka 2
(współczynnik = 1,32)
Próbka 3
(współczynnik = 3,39)
Próbka 4
(współczynnik = 18,39)
3,74
81,46
92,76
98,08
15,84
7,07
3,43
0,75
Nie dotyczy
8,68%
3,70%
0,76%
Średni %
hamowania
Odchylenie
standardowe (SD)
CV (%)
Wyniki uzyskane podczas tych badań były zgodne z oczekiwaniami.
12 - OGRANICZENIA TESTU
Zastosowanie testu potwierdzającego MONOLISA™ HBS Ag ULTRA CONFIRMATORY jest ściśle
ograniczone do potwierdzania obecności antygenu powierzchniowego wirusa zapalenia wątroby
typu B (HBs Ag) w ludzkiej surowicy i osoczu krwi.
Próbki, które w sposób powtarzalny dają wynik słabo dodatni (indeks próbki mniejszy niż 2) w
teście MONOLISA™ HBs Ag ULTRA i które nierozcieńczone określane są jako niereaktywne w
teście MONOLISA™ HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY (współczynnik reaktywności mniejszy niż
0,8) należy interpretować z ostrożnością. Zalecane jest ponowne przebadanie tych pacjentów z
zastosowaniem innej metody lub pobranie drugiej próbki do badania w późniejszym czasie.
Przeciwciała heterofilne oraz HAMA obecne w surowicy lub osoczu mogą interferować w
niniejszym oznaczeniu. Przeciwciała te mogą być obecne w próbkach pochodzących od osób
mających regularny kontakt ze zwierzętami lub poddanych terapii z użyciem produktów
pochodzenia zwierzęcego. Wyniki niezgodne z objawami klinicznymi wymagają przeprowadzenia
badań dodatkowych.
13 - LITERATURA
COUROUCE A.M., LEE H., DROUET J., CANAVAGGIO M. and SOULIER J.P. (1983) - Monoclonal
antibodies to HBs Ag : a study of their specificities for eight different HBs subtypes. Developments in
Biological Standardization, 54, 527-534.
2. COUROUCE A.M., PLANCON A. and SOULIER J.P. (1983) - Distribution of HBs Ag subtypes in the
world. Vox Sang. 44, 197-211.
3. DAVID G.S., PRESENT W., MARTINIS J., WANG R., BATHOLOMEW R., DESMOND W. and SEVIER
E.D., (1981) - Monoclonal antibodies in the detection of hepatitis infection. Medical Laboratory Sciences,
38, 341-.348.
4. DROUET J., COUROUCE A.M., KALIL J., LEE H., and FELLOUS M. (1981) - Monoclonal antibodies to
HBs Ag produced by murine hybridomas. In viral hepatitis, edited by Szmuness W. Alter H.J., Maynard
J.E. The Franklin Institute Press, 706.
5. FIELDS H.A., DAVID C.L., BRADLEY D.W. and MAYNARD J.E. (1983) - Experimental conditions
affecting the sensitivity of enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for detection of hepatitis B
surface antigen (HBs Ag) - Bulletin of the World Health Organization, 61, 1, 135-142.
6. LEE H.H., COUROUCE A.M., PERE M., CANAVAGGIO M., DROUET J. and SOULIER J.P. (1983) Monoclonal antibodies to HBs Ag; a study of their specificities against HBs Ag subtypes and their
utilization in ELISA. International Association of Biological Standardization. International Symposium on
Monoclonal Antibodies : Paris, France.
7. SOULIER J.P., COUROUCE A.M., LEE H. DROUET J., MULLER A. and CANAVAGGIO M. (1983) Monoclonal antibodies against HBs antigen. Bulletin Biotest (vol. 4, 353-358).
8. WANDS J.P., CARLSON R.L., SCHOEMAKER H., ISSELBACHER K.J. and ZURAWSKI V.R. (1981) Immunodiagnosis of hepatitis B with high-affinity IgM monoclonal antibodies. Proc. Nat. Acad. Sci., 78, 2,
1214-1218.
9. M. CANAVAGGIO, A.M. COUROUCE, M. PERE, H. LEE - Spécificité d'anticorps monoclonaux dirigés
contre le déterminant a de l'Ag HBs (1985). Nouvelle Revue Française d'Immunohématologie (Springer
International), 27, 2, 134.
10. J. DROUET, G. CHARRIER, A.M. COUROUCE, M. PERE, J.F. DELAGNEAU, J. ROISIN (1985) Nouveaux réactifs de dépistage de l'Ag HBs et de dosage de l'anticorps anti-HBs. Nouvelle Revue
Française d'Immunohématologie (Springer International), 27, 2, 134
1.
• CE marking (European directive 98/79/CE on in vitro diagnostic medical devices)
• Znak CE (Dyrektywa Parlamentu Europejskiego 98/79/CE o wyrobach do diagnostyki medycznej in vitro)
• For in vitro diagnostic use
• Wyrób dodiagnostyki in vitro
• Catalogue number
• Numer katalogowy
• Manufacturer
• Wytwórca
• Authorised Representative
• Autoryzowany Przedstawiciel
• Batch code
• Kod partii
• Expiry date YYYY/MM/DD
• Użyć przed RRRR/MM/DD
• Storage temperature limitation
• Przestrzegać zakresu temperatur
• Consult Instruction for use
• Sprawdź w instrukcji obsługi
Bio-Rad
3, Bd Raymond Poincaré
92430 MARNES LA COQUETTE - FRANCE
Tél. : + 33 (0) 1 47 95 60 00
Fax.: + 33 (0) 1 47 41 91 33
0459
01/2010
Kod: 883588