ILOŚCIOWE OZNACZANIE CUKRÓW REDUKUJĄCYCH 8.1. Wła

Transkrypt

ILOŚCIOWE OZNACZANIE CUKRÓW REDUKUJĄCYCH 8.1. Wła
Ilościowe oznaczanie cukrów redukujących
1
Ć WICZENIE 8
ILOŚCIOWE OZNACZANIE CUKRÓW REDUKUJĄCYCH
8.1. Właściwości funkcjonalne sacharydów
Smak odczuwa się za pomocą receptorów smakowych, które w postaci kubków smakowych
umiejscowione są w jamie ustnej, w największym stężeniu na języku. Liczba kubków smakowych
jest różna u poszczególnych ludzi, dlatego odczuwanie smaku jest właściwością osobniczą.
Sacharydy w większości przypadków charakteryzują się słodkim smakiem. Za wzorzec smaku
przyjmuje się 10% wodny roztwór sacharozy, dla takiego roztworu jednostka słodkości, tzw.
słodkość względna (ang. relative sweetness) wynosi 1,0. W tabeli 8.1. zamieszczono wartości RS dla
roztworów innych sacharydów.
Tabela 8.1. Względna słodkość (RS) 10% roztworów wodnych różnych związków („Chemia
żywności” WNT, Warszawa 2002)
Związek
RS
Sacharoza
β-D-fruktopiranoza
Cukier inwertowany
α-D-glukopiranoza
β-D-glukopiranoza
α-D-mannopiranoza
β-D-mannopiranoza
D-galaktopiranoza
Maltoza
α-D-laktoza
β-D-laktoza
1,00
1,80
1,30
0,70
0,80
0,30
Gorzka
0,32
0,32
0,20
0,30
Związek
D-galaktosacharoza
Rafinoza
Stachinoza
Ksylitol
Mannitol
Sorbitol
Miód
Melasa
Sacharyna
Apartam
Dihydrochalkon neohesperydyny
RS
Bez smaku
0,01
0,10
0,85-1,2
0,4
0,6
0,97
0,74
200-700
200
2000
Jak widać w tabeli, wraz ze wzrostem liczby jednostek monosacharydowych słodkość
sacharydów zanika. Wyjątkiem jest sacharoza, która zbudowana jest z dwóch reszt cukrowych, ale
tylko reszta glukozy oddziaływuje z receptorem na języku. Obecnie dostępne są także inne,
niesacharydowe
środki słodzące, jak monelina (naturalne białko) 1500-2000 razy słodsza od
sacharozy, talina (sól glinowa taumatyny, innego białka) 3500 razy słodsza od sacharozy, kwas
N-cykloheksyloaminosulfonowy, aspartam, sacharyna (rys. 8.1).
Ilościowe oznaczanie cukrów redukujących
2
Rys.8.1. Popularne substancje słodzące
W Polsce w użyciu są następujące naturalne, sacharydowe środki słodzące: D-glukoza,
D-fruktoza, laktoza, sacharoza, maltoza, syropy skrobiowe, ekstrakty słodowe, alkohole cukrowe,
miód i syrop klonowy.
D-glukoza – ze względu na szybkie wchłanianie jest źródłem energii dla chorych. Jest
popularnym dodatkiem słodzącym do piwa, napojów orzeźwiających i czekolady. Do jej
metabolizmy potrzebna jest insulina, dlatego nie jest wskazana dla diabetyków, sprzyja także
rozwojowi próchnicy.
D-fruktoza – najlepiej rozpuszczalna w wodzie spośród sacharydów, stosowana w słodzeniu
soków, ponieważ nie krystalizuje podczas przechowywania. Jest higroskopijna, więc zapobiega
utracie wilgoci w przechowywaniu produktów żywnościowych, np. owoców kandyzowanych.
Sacharyd ten metabolizowany jest do glikogenu, bez udziału insuliny, więc jest polecany dla
diabetyków. Dodatkowe pozytywne cechy D-fruktozy to przyspieszanie metabolizmu etanolu
i niewywoływanie próchnicy.
Laktoza, czyli cukier mlekowy (4,8-5,1% w mleku ssaków), jest słabo rozpuszczalna w wodzie.
Wydajnym źródłem laktozy jest serwatka, która zawiera 67-75% tego cukru w suchej masie.
Laktoza używana jest jako nośnik innych środków słodzących i dodatek polepszający smak
produktów mlecznych. Negatywną stroną stosowania laktozy jest fakt, że do jej metabolizowania
potrzeba jest β-D-galaktozydaza. U wielu ssaków enzym ten zanika z wiekiem, nie mają go także
niektóre dzieci w wyniku błędu genetycznego. Picie mleka i fermentowanych napojów mlecznych
u takich osób może wywoływać odczyny alergiczne.
Sacharoza jest najczęściej stosowanym środkiem słodzącym w racji dostępności i przyjemnego
smaku, szybko się wchłania i metabolizuje. Powoduje to duży okresowy nadmiar glukozy
w organizmie, która przekształcana jest wtedy w lipidy.
Syropy skrobiowe są produktami scukrzenia skrobi, w Polsce przede wszystkim ziemniaczanej.
W zależności od stopnia przemiany uzyskuje się różne syropy. Najpierw otrzymuje się syrop
Ilościowe oznaczanie cukrów redukujących
3
maltotetraozowy o słodkości 0,2 zawierający ok. 15% D-glukozy i ok. 10% maltozy. Dalsze
scukrzanie prowadzi do syropów maltozowych zawierających ok. 43% D-glukozy i 20% maltozy.
W końcu otrzymuje się syropy glukozowe zawierające 92% D-glukozy, 4% maltozy i ok. 2%
wyższych sacharydów. Syropy te można izomeryzować do syropów fruktozowych.
Ekstrakty słodowe, które są wodnymi ekstraktami słodu jęczmiennego oprócz 4-5% sacharozy,
śladów fruktozy, glukozy i maltozy, zawierają także białka, sole mineralne i enzymy.
Alkohole cukrowe są odporniejsze od sacharydów na niskie pH, ich słodki smak trwa przez
dłuższy czas i odczuwa się jednocześnie wrażenie chłodu. Są metabolizowane bez udziału
insuliny.
Miód ma skład zależny od czasu zbioru, położenia geograficznego i rodzaju kwiatów, z których
nektar został zebrany przez pszczoły. Oprócz D-fruktozy i maltozy miód zawiera wiele rzadkich
sacharydów np. kojibiozę (α-D-Glcp-(1→2)-α-D-Glcp); turanozę (α-D-Glcp-(1→3)-D-Fruf);
gentozę (α-D-Glcp-(1→4)-α-D-Glcp-(1→2)-D-Glcp) itp., a także wolne aminokwasy, barwniki,
woski, pyłek kwiatowy, enzymy i składniki mineralne. W miodzie znajduje się też ok. 120
związków aromatycznych i składniki toksyczne, jeżeli nektar był zbierany z roślin trujących,
chociaż wiele roślin trujących daje miód nietrujący.
Termiczne lub enzymatyczne przekształcenia sacharydów mogą prowadzić do otrzymania
związków zapachowych znanych jako wtórne aromaty żywności. Pochodzą one z obróbki zarówno
czystych sacharydów (wówczas za zapach odpowiadają pochodne furanu), jak i reakcji sacharydów
z aminokwasami lub hydroksykwasami.
Sacharydy wykorzystuje się także do produkcji barwników żywności. W wyniku tzw. palenia cukru,
w temp 200-240oC przez kilka godzin, powstaje brunatny produkt nazywany karmelem. Mimo swej
głębokiej brunatnej barwy, karmel ma małą siłę barwiącą i stosuje się go raczej jako dodatek
poprawiający aromat i smak. Karmel do celów barwiących otrzymuje się przez palenie cukru wobec
amoniaku w temperaturze 130-200oC (tzw. karmel amoniakalny). Ponieważ zawiera on niewielkie
ilości neurotoksycznego 4(5)-metyloimidazolu, dąży się do wyeliminowania karmelu amoniakalnego
z produkcji lub ograniczenia spożycia produktów barwionych karmelem. Karmel używany jako
dodatek podlega standaryzacji, dopuszcza się stosowanie 10 typów karmeli, które różnią się
sposobem produkcji, przede wszystkim rodzajem zastosowanego katalizatora.
W produktach spożywczych zidentyfikowano ponad 100 rodzajów cukrów. D-glukoza i D-fruktoza
znajdują się głównie w miodzie, owocach i warzywach, laktoza w mleku ssaków, sacharoza w
burakach cukrowych i trzcinie cukrowej, a skrobia w ziarnach zbóż, w przetworach zbożowych i w
Ilościowe oznaczanie cukrów redukujących
4
ziemniakach (Tabela 8.2.).
Tabela 8.2. Zawartość sacharydów w wybranych produktach spożywczych
Rodzaj produktu
Wieprzowina, wołowina
Ser gouda tłusty
Ogórek
Ser twarogowy tłusty
Pomidor
Mleko 2% tłuszczu
Marchew
Pomarańcza
Brzoskwinia
Jabłko
Banan
Chleb
Ziarno pszenicy
Ziarno żyta
Kasza jęczmienna
Łączna zawartość sacharydów [%]
0,0
0,1
2,9
3,5
3,6
4,9
8,7
11,3
11,9
12,1
23,5
56,2
70,5
74,2
74,9
8.2. METODY OZNACZANIA ZAWARTOŚCI SACHARYDÓW
Jak wykazano w ćwiczeniu 7 (reakcje Benedicta i Barfoeda), wszystkie monocukry
i
niektóre
disacharydy
monosacharydów
wykazują
odpowiedzialna
właściwości
jest
grupa
redukujące.
aldehydowa
Za
lub
właściwości
α-ketonowa
redukujące
występująca
w liniowej formie sacharydu. Właściwości te wykorzystuje się najczęściej w ilościowym oznaczaniu
zawartości cukrów, dodatkowo można wykorzystać także zdolność do skręcenia płaszczyzny światła
spolaryzowanego oraz zdolność do ulegania fermentacji. Metody oznaczania sacharydów można
podzielić na:
Metody fizyczne: densymetryczne, refraktometryczne, polarometryczne;
Metody wykorzystujące właściwości redukujące:
a) Miareczkowe (metoda Fehlinga, Lane-Eynona, Bertranda, Luffa-Schoorla);
b) Spektrofotometryczne (metoda antronowa, rezorcynowa, Nelsona, metoda DNS);
Metody enzymatyczne (metoda z oksydazą glukozową, metoda z dehydrogenazą glukozo6-fosforanu).
Ilościowe oznaczanie cukrów redukujących
5
8.2.1. Metody fizyczne
Metody fizyczne mogą być stosowane tylko do oznaczania cukrów rozpuszczalnych w wodzie.
Metody densytometryczne - polegają na pomiarze gęstości wodnych roztworów sacharydów za
pomocą areometru lub pikometru i odczytaniu z odpowiednich tablic odpowiadających im
zawartości sacharydów w próbce. W przypadku pomiarów w roztworach zawierających oprócz
sacharydów inne składniki rozpuszczalne w wodzie, uzyskany wynik odpowiada ekstraktowi
ogólnemu i ma charakter przybliżony.
Metody refraktometryczne – mierzy się w nich współczynnik załamania światła (refrakcji) przez
cząsteczki sacharydu rozpuszczonego w wodzie. W przypadku czystych roztworów sacharydów
uzyskuje się bardzo dokładne i powtarzalne wyniki, ale dla roztworów wieloskładnikowych,
w których pomiar współczynnika załamania jest wypadkową wszystkich rozpuszczonych w wodzie
substancji, wynik ten określa ekstrakt ogólny, analogicznie jak w metodach densymetrycznych.
Metoda ta znalazła szerokie zastosowanie w badaniach produktów spożywczych z uwagi na prostotę
i szybkość analizy oraz możliwość wykonywania oznaczeń seryjnych.
Metody
polarymetryczne
–
polegają
na
pomiarze
kąta
skręcania
płaszczyzny
światła
spolaryzowanego, przechodzącego przez badany roztwór sacharydu. Analizy wykonuje się za
pomocą specjalnych polarymetrów zwanych sacharymetrami; badany roztwór musi być bezbarwny,
klarowny i bez zawiesin koloidalnych.
8.2.2. Metody oparte na właściwościach redukujących
Oligosacharydy i polisacharydy zbudowane są z odpowiednich monosacharydów połączonych
wiązaniami glikozydowymi. Wiązania te powstają w wyniku reakcji hemiacetalowej grupy OH (tzn. grupy
OH przy anomerycznym atomie węgla) jednego monosacharydu z dowolną grupą OH drugiego
monosacharydu. Właściwości redukujące zależą więc od tego, czy w disacharydzie znajduje się wolna
hemiacetalowa grupa OH. W przypadku maltozy, celobiozy i laktozy wytworzenie wiązania
glikozydowego zachodzi z udziałem hemicetalowej grupy OH tylko jednej reszty cukrowej.
Hemiacetalowa grupa OH drugiej reszty cukrowej pozostaje wolna. Disacharydy te wykazują zatem
właściwości redukujące i ulegają mutarotacji. W przypadku sacharozy hemiacetalowe grupy OH obu reszt
cukrowych biorą udział w utworzeniu wiązania glikozydowego. Z tego względu cukier ten nie wykazuje
właściwości redukujących i zdolności do mutarotacji (rysunek 8.2.). W takim przypadku przeprowadza się
hydrolizę do monosacharydów i oznacza jako tzw. „cukry ogółem”.
Ilościowe oznaczanie cukrów redukujących
6
CH2OH
O H
H
CH2OH O
H
HO
H
OH
H
O
HO
H
OH
H
CH2OH
OH
H
Rys. 8.2. Sacharoza (β-D-fruktofuranozylo-(2→1)-α-D-glukopiranozyd)
Metody oparte na właściwościach redukujących nie są specyficzne tylko dla sacharydów, gdyż inne
substancje np. niektóre kwasy organiczne (kwas askorbowy), zasady purynowe, niektóre aldehydy
i aminokwasy (np. Cys), także wykazują właściwości redukujące. Aby uniknąć podwyższenia wyników,
usuwa się je w procesie odbiałczania i/lub klarowania.
Jedną z najlepszych metod odbiałczania i klarowania jest metoda Correza. Stosuje się dwa
roztwory: heksacyjanożelazian(II) potasu i siarczan(VI) cynku(II), które dodaje się w jednakowej objętości.
W trakcie klarowania zachodzi reakcja:
2 ZnSO4 + K4Fe(CN)6 → Zn2Fe(CN)6↓ + K2SO4
Powstający koloidalny heksacyjanożelazian(II) cynku(II) opadając w formie osadu współstrąca ze
sobą związki wielkocząsteczkowe.
Największe znaczenie w ilościowym oznaczaniu sacharydów w produktach spożywczych
mają metody oparte na redukcji soli miedzi(II) w środowisku alkalicznym. Odczynniki miedziowe
stosowane w metodach miareczkowych to zasadowe roztwory siarczanu(VI) miedzi(II), zawierające
winian sodowo-potasowy lub cytrynian sodu, glicerynę lub inny związek tworzący rozpuszczalny
kompleks z jonami miedzi. W środowisku zasadowym w podwyższonej temperaturze następuje
przeprowadzenie sacharydów w formę łańcuchową, która ulega enolizacji. Powstałe endiolowe
formy sacharydów utleniają się do kwasów (np. z glukozy powstaje kwas glukonowy); jednocześnie
następuje redukcja jonów Cu2+ do jonów Cu1+, które łącząc się z jonami wodorotlenkowymi, dają
czerwony osad tlenku miedzi(I).
Metoda Fehlinga - polega ona na miareczkowym oznaczaniu ilości redukujących sacharydów w
roztworze, odpowiadających całkowitej redukcji miedzi zawartej w roztworze odczynników
Fehlinga I (CuSO4 x 5H2O) i Fehlinga II (winian sodowo-potasowy NaKC4H4O6 x 4H2O)
wprowadzonych w jednakowej objętości. Winian sodowo-potasowy tworzy z jonami Cu2+
ciemnoniebieski, rozpuszczalny w wodzie kompleks; koniec miareczkowania rozpoznaje się po
zaniku barwy niebieskiej, świadczącej o braku jonów Cu2+.
Metoda Bertranda – stosuje się ją do oznaczania sacharydów w roztworach silnie zabarwionych.
Oznaczanie sacharydów przeprowadza się metodą pośrednią na podstawie ilości roztworu
Ilościowe oznaczanie cukrów redukujących
manganianu(VII)
potasu
zużytego
7
na
miareczkowanie
jonów
Fe2+
odpowiadających
stechiometrycznie ilości sacharydów redukujących zawartych w badanym roztworze. Oznaczenie
polega na ilościowej redukcji jonów Cu2+ do Cu+ przez sacharydy zawierające w cząsteczce wolne
grupy redukujące, która zachodzi w środowisku silnie alkalicznym (pH ok. 12) i w temp. wrzenia
roztworu. Wytworzone jony miedzi(I) ulegają utlenieniu w reakcji z trzecim płynem Bertranda do
jonów Cu2+, a jony Fe3+ redukcji do jonów Fe2+. Ilość jonów Fe2+ oznacza się przez miareczkowanie
mianowanym roztworem manganianu(VII) potasu.
Metoda Luffa – Schoorla – zasada oznaczenia opiera się na reakcji redukcji jonów Cu2+ zawartych
w płynie Luffa przez sacharydy redukujące obecne w badanym roztworze. Reakcja zachodzi
w środowisku zasadowym (pH ok. 9,5) w temperaturze wrzenia. W skład płynu Luffa wchodzi:
siarczan(VI) miedzi(II), węglan sodu, kwas cytrynowy. W środowisku zasadowym sacharydy
redukują siarczan(VI) miedzi(II) do tlenku miedzi(I). Wprowadzenie do roztworu jodku potasu (KI) i
kwasu siarkowego(VI) powoduje wydzielenie jodowodoru (HI). Reaguje on z niezredukowanym
przez sacharydy siarczanem (VI) miedzi(II) i powstaje jodek miedzi(I). Nadmiar jodu (z dodatku KI)
odmiareczkowuje się tiosiarczanem(VI) sodu.
Do metod spektrofotometrycznych zalicza się metody:
Metoda z wykorzystaniem kwasu 3,5-dinitrosalicylowego (DNS) - w środowisku zasadowym grupy
nitrowe kwasu 3,5-dinitrosalicylowego redukowane są do grup aminowych, a jednocześnie cukry
ulegają utlenieniu do odpowiednich kwasów onowych. Powstające pochodne aminowe mają barwę
pomarańczową, a pomiar intensywności zabarwienia oznacza się przy λ = 550 nm.
Metoda antronowa – polega ona na odwodnieniu sacharydów przez ogrzewanie ze stężonymi
kwasami (octowym, siarkowym(VI), solnym). Powstały z pentoz - furfural i z heksoz - 5-hydroksymetylofurfural tworzą z antronem barwny roztwór. Pomiar intensywności zabarwienia wykonuje się
przy długości fali λ = 620 nm.
Metoda Nelsona polega na redukcji w środowisku alkalicznym jonów Cu2+ do Cu+ przez cukier
redukujący. Powstałe jony Cu+ redukują następnie kwas arsenomolibdenowy, a utworzone w tej
reakcji niebieskie tlenki molibdenu oznacza się przy długości fali λ = 520 nm.
Metoda rezorcynowa – pozwala oznaczyć ketosacharydy, a także wyznaczyć zawartość ketopentoz
i ketoheksoz obok siebie. Metoda ta polega na odwodnieniu ketosacharydów przez ogrzewanie
z kwasem solnym, a następnie reakcji powstałych produktów z rezorcyną, w wyniku której tworzą
się barwne kompleksy. Pomiar intensywności zabarwienia wykonuje się: dla ketoheksoz, przy
długości fali λ = 520 nm, dla ketopentoz, przy długości fali λ = 620 nm.
Ilościowe oznaczanie cukrów redukujących
8
Metody enzymatyczne stosuje się głównie do oznaczania glukozy i fruktozy, przy czym
w przypadku glukozy korzysta się najczęściej z oksydazy glukozowej lub dehydrogenazy glukozo6-fosforanowej.
Metoda z oksydazą glukozową – w obecności tlenu oksydaza glukozowa katalizuje utlenianie β-Dglukozy do D-glukono-δ-laktonu. Jednocześnie następuje redukcja koenzymu FAD do FADH2
i ponowne utlenienie do FAD, któremu towarzyszy przeniesienie atomów wodoru na tlen
cząsteczkowy i powstanie nadtlenku wodoru (H2O2). Powstały H2O2, w obecności związku będącego
donorem atomów wodoru np. di-o-anizydyny, jest rozkładany przez peroksydazę, a odwodorowany
związek staje się barwny (np. żółty w przypadku di-o-anizydyny).
Metoda z dehydrogenazą glukozo-6-fosforanowej – glukozo-6-fosforan reaguje z NADP+, który
w obecności dehydrogenazy fosforoglukonianowej jest przekształcany w NADPH. Ilość powstałego
NADPH jest proporcjonalna do ilości glukozy i oznaczana spektrofotometrycznie. Metody
enzymatyczne stosuje się przede wszystkim do oznaczania glukozy we krwi oraz innych płynach
ustrojowych, a także w miodzie.
8.3. WYKONANIE ĆWICZENIA
Celem ćwiczenia jest ilościowe oznaczenie cukrów redukujących w produktach
żywnościowych metodą opartą na kwasie 3,5-dinitrosalicylowym.
Odczynniki i aparatura
1. wzorcowy roztwór glukozy (3,6 mg/ml)
2. odczynnik A: 250mM ZnSO4
3. odczynnik B: 1% roztwór DNS (rozpuścić 10g kwasu 3,5-dinitrosalicylowego w 500ml wody,
dodać 200ml 2M NaOH, 300g winianu sodowo-potasowego i uzupełnić wodą do objętości
1000ml)
4. odczynnik C: 85mM K4[Fe(CN)6]
5. 3M NaOH
6. 6M NaOH
7. 6M HCl
8. probówki chemiczne (20 szt.)
9. pipeta automatyczna
10. szkło: pipety serologiczne o pojemności: 1, 2, 5 i 10 ml, kolbki miarowe 10 ml i 25 ml (4 szt.),
kolbka stożkowa, lejek, zlewki (2 szt.)
11. łaźnia wodna 100°C
12. spektrofotometr
13. sok jabłkowy jednodniowy i w kartonie
14. piwo jasne
Ilościowe oznaczanie cukrów redukujących
9
Wykonanie
Przygotowanie soków: Do 25 ml klarownego soku w zlewce dodać 1,25 ml odczynnika A oraz
1,25 ml odczynnika C i dokładnie wymieszać. Przy pomocy 3M NaOH doprowadzić pH do ok. 8 (wobec
papierka wskaźnikowego). Zanotować całkowitą objętość użytego NaOH. Całość przesączyć przez sączek
karbowany. Następnie w probówkach przygotować po 5 ml rozcieńczeń 20-, 40- i 80-krotnych w wodzie
destylowanej.
Przygotowanie piwa: Do zlewki odmierzyć 50 ml piwa i mieszać na mieszadle magnetycznym
przez 15 min w celu odgazowania. Następnie w probówkach przygotować po 5ml rozcieńczeń 5-, 10- i 20krotnych w wodzie destylowanej.
Przygotowanie krzywej wzorcowej: Ponumerować 11 probówek od 0 do 10. Odpipetować kolejno
roztwory zgodnie z tabelą 8.3, następnie do wszystkich probówek dodać po 1 ml odczynnika B
i po 5 ml wody destylowanej. Zawartość wszystkich próbówek dokładnie wymieszać, każdą przykryć
kawałkiem folii aluminiowej i wstawić na 5 min do wrzącej łaźni wodnej. Następnie probówki ochłodzić pod
strumieniem zimnej wody i zmierzyć absorbancję przy długości fali 550 nm, stosując jako próbę odniesienia
probówkę 0. Wykreślić krzywa wzorcową A=f(c[mg/ml]).
Oznaczenie zawartości cukrów redukujących w sokach i piwie: Ponumerować 19 probówek od 0
do 18. Do próbki 0 odpipetować 1 ml wody, do probówek 1-6 po 1 ml trzech rozcieńczeń soku 1 w dwóch
powtórzeniach, do probówek 7-12 po 1 ml trzech rozcieńczeń soku 2 w dwóch powtórzeniach, a do
probówek 13-18 po 1ml trzech rozcieńczeń piwa w dwóch powtórzeniach. Do wszystkich probówek dodać
po 1ml odczynnika B i po 5 ml wody destylowanej. Zawartość wszystkich probówek dokładnie wymieszać,
każdą przykryć kawałkiem folii aluminiowej i wstawić na 5 min do wrzącej łaźni wodnej. Następnie
probówki ochłodzić pod strumieniem zimnej wody i zmierzyć absorbancję przy długości fali 550 nm,
stosując jako próbę odniesienia probówkę 0. Na podstawie uzyskanych absorbancji obliczyć zawartość
cukrów w produktach spożywczych (pamiętać o rozcieńczeniach) w g/100ml.
Tabela 8.3. Przygotowanie krzywej wzorcowej
Nr próby
0
1;2
3;4
5;6
7;8
9;10
Wzorzec
glukozy [ml]
0,125
0,250
0,500
0,750
1,000
Woda
[ml]
1,000
0,875
0,750
0,500
0,250
-
Zawartość
glukozy [mg]
Odczynnik B
[m]
Woda
[ml]
0,45
0,90
1,80
2,70
3,60
1,0
1,0
1,0
1,0
1,0
1,0
5,0
5,0
5,0
5,0
5,0
5,0
Ilościowe oznaczanie cukrów redukujących
10
8.3. PYTANIA I ZADANIA
1. Wyjaśnij na czym polegają i do czego służą reakcje Benedicta i Barfoeda.
2. Wyjaśnij, dlaczego ketozy przejawiają właściwości redukujące.
3. Uzasadnij dlaczego sacharoza nie jest cukrem redukującym.
4. Wyjaśnij na czym polega metoda oznaczania cukrów z DNS i do czego się ją wykorzystuje.
5. Krótko scharakteryzuj metody oznaczania zawartości sacharydów.
6. Jakie substancje słodzące mogą zastępować sacharydy w produktach spożywczych?
7. Jakie sacharydy najczęściej stosuje się w produktach spożywczych jako substancje słodzące?
8. Wyjaśnij czym różni się forma α- od β-D-glukopiranozy.
9. Narysuj schemat reakcji glukozy z jonami miedzi.

Podobne dokumenty