Ocena stężenia całkowitego wolnego DNA we krwi matki przy

Ocena stężenia całkowitego wolnego DNA we krwi matki przy

Perinatologia, Neonatologia i Ginekologia, tom 5, zeszyt 1, 14-18, 2012
Ocena stężenia całkowitego wolnego DNA
we krwi matki przy użyciu genu $ -globiny
w predykcji nadciśnienia tętniczego w ciąży
TOMASZ GOŹDZIEWICZ, PRZEMYSŁAW WIRSTLEIN, JANA SKRZYPCZAK
Streszczenie
Wstęp: Celem pracy była ocena przydatności oznaczenia stężenia całkowitego wolnego DNA we krwi matki przy
użyciu genu β-globiny jako czynnika predykcyjnego nadciśnienia tętniczego w ciąży. Materiał i metody: Badaniami
objęto 102 ciężarne hospitalizowane w Klinice Rozrodczości Uniwersytetu Medycznego im. Karola Marcinkowskiego
w Poznaniu w latach 2006-2010. Ostateczne informacje co do przebiegu ciąży uzyskano od 53 pacjentek. Pacjentki,
u których podczas ciąży wystąpiło nadciśnienie tętnicze, stanowiły grupę badaną (n = 8), a ciężarne z prawidłowymi
wartościami ciśnienia tętniczego tworzyły grupę kontrolną (n = 41). U wszystkich pacjentek w 2. trymestrze ciąży
pobrano krew celem oznaczenia całkowitego wolnego DNA. Po izolacji wolnego DNA z surowicy matki oznaczono
stężenie całkowitego wolnego DNA przy użyciu genu β-globiny i metody RT-PCR. Wyniki: Stężenie całkowitego wolnego DNA w surowicy matki było istotnie wyższe w grupie badanej. Obliczona czułość wynosi 100% i specyficzność
88,2% dla stężenia ekwiwalentu całkowitego wolnego DNA w surowicy matki > 60 GE/ml jako czynnika ułatwiającego
przewidzenie wystąpienia nadciśnienia tętniczego w ciąży. Wnioski: Oznaczanie stężenia wolnego DNA w surowicy
matki może ułatwić przewidzenie wystąpienia nadciśnienia tętniczego w późniejszych tygodniach ciąży.
Słowa kluczowe: całkowite wolne DNA, nadciśnienie tętnicze, preeclampsia, gen $-globiny
Wstęp
Nadciśnienie tętnicze wikła 12%-22% wszystkich ciąż
i w znacznym stopniu wpływa na zachorowalność i umieralność matek i płodów. Dotyczy to szczególnie stanu
przedrzucawkowego, który występuje u 2% ciężarnych.
Najbardziej prawdopodobną przyczyną preeklampsji jest
nieprawidłowa inwazja trofoblastu i przemiana tętnic spiralnych. Kliniczne objawy nadciśnienia tętniczego w ciąży
nasilają się wraz z czasem jej trwania i jedyną skuteczną
metodą leczenia jest ukończenie ciąży [1].
Dotychczas nie odkryto pojedynczego wiarygodnego
czynnika, który mógłby wskazać ciężarne zagrożone rozwinięciem nadciśnienia tętniczego i stanu przedrzucawkowego. Plascencia i wsp. [2] oraz Duckitt i wsp. [3] wskazywali na pomiar indeksu pulsacji w tętnicach macicznych
między 11. a 13. tygodniem ciąży jako czynnika mogącego
typować kobiety obarczone ryzykiem wystąpienia stanu
przedrzucawkowego. Odkrycie wolnego płodowego DNA
we krwi matki przez Lo i wsp. [4] rozpoczęło nową erę
w diagnostyce prenatalnej. Wykorzystanie RT-PCR w oznaczaniu stężenia wolnego DNA rozszerzyło możliwości diagnostyczne. Jednak użycie komponenty płodowej całkowitego wolnego DNA, którą odróżniano, wykorzystując
geny zlokalizowane na chromosomie Y, ograniczało metodę wyłącznie do płodów płci męskiej. Farina i wsp. zaproponował wykorzystanie oznaczania całkowitego wolnego
DNA przy użyciu autosomalnego genu β-globiny jako nowej metody oceny stężenia wolnego DNA we krwi ciężarnej bez względu na płeć płodu [12].
Całkowite wolne DNA krążące we krwi matki składa
się w 95% z matczynego wolnego DNA oraz w 5% z płodowego wolnego DNA [15]. Źródłem matczynego wolnego
DNA może być śródbłonek lub komórki krwi, z kolei źródłem wolnego płodowego DNA we krwi matki są komórki
łożyska, płodowe komórki krwi, a także bezpośredni transfer DNA przez błony płodowe. Za główne źródło płodowego DNA uważa się jednak trofoblast, gdzie dochodzi do
nadmiernej apoptozy komórek w patologiach związanych
z niewydolnością łożyska, takich jak nadciśnienie ciążowe
czy stan przedrzucawkowy [8].
Celem pracy była ocena przydatności oznaczenia stężenia całkowitego wolnego DNA we krwi matki przy użyciu genu β-globiny jako czynnika predykcyjnego nadciśnienia tętniczego w ciąży.
Materiał i metody
Badaniami objęto ciężarne hospitalizowane w Klinice
Rozrodczości Uniwersytetu Medycznego im. Karola Marcinkowskiego w Poznaniu w latach 2006-2010. Uzyskano
zgodę lokalnej Komisji Bioetycznej na przeprowadzenie
badań. Wszystkie pacjentki wyraziły pisemną zgodę na
udział w projekcie. Krew pobrano od 102 ciężarnych
kobiet w średnim 17 ± 1,93 tygodniu ciąży, hospitalizowanych celem wykonania inwazyjnych badań prenatalnych
lub oceny ultrasonograficznej płodu. Wszystkie pacjentki
były w pojedynczej ciąży, a 80% z nich miało przynajmniej
jeden czynnik ryzyka wystąpienia nadciśnienia tętniczego:
1) pierwsza ciąża, 2) nadciśnienie tętnicze w poprzednich
Klinika Rozrodczości, Uniwersytet Medyczny im. Karola Marcinkowskiego w Poznaniu
Ocena stężenia całkowitego wolnego DNA we krwi matki przy użyciu genu $-globiny w predykcji nadciśnienia...
1, max. 5) w grupie badanej i kontrolnej. W grupie badanej
mediana tygodnia ciąży, w którym pobierano pacjentkom
krew do badania wynosiła 16,5 (min. 15, max. 17), a w grupie kontrolnej 17 (min. 13, max. 22). Wszystkie wymienione różnice nie osiągnęły istotności statystycznej.
Stężenie całkowitego wolnego DNA w surowicy matki
było istotnie wyższe w grupie badanej. Mediana stężenia
ekwiwalentu genomowego w grupie badanej i kontrolnej
wynosiła odpowiednio 101 (min. 64, max. 223) oraz 27
(min. 5, max. 83) (p = 0,0000) (ryc. 1). Przy wykorzystaniu
krzywych ROC obliczono czułość 100% i specyficzność
88,2% dla stężenia ekwiwalentu całkowitego wolnego DNA
w surowicy matki > 60 GE/ml jako czynnika przepowiadającego wystąpienie nadciśnienia tętniczego w ciąży
(ryc. 2). Pole powierzchni pod krzywą ROC wynosiło 0,96.
całkowite wolne DNA wyrażone jako ilość GE/ml
ciążach lub 3) wiek > 35 lat. W żadnym przypadku nie
stwierdzono nieprawidłowości ultrasonograficznych u płodów oraz innych istotnych patologii ciąży.
Krew w ilości 5 ml pobierano do probówek zawierających EDTA (Strasted), a następnie w ciągu 15 minut
odwirowywano przy prędkości 3000 g przez 10 minut.
Uzyskaną w ten sposób surowicę przenoszono do
probówek typu Eppendorf i przechowywano w temperaturze !20EC celem dalszej analizy.
W trakcie trwania badania ostateczne informacje, co
do przebiegu ciąży, udało się uzyskać od 53 pacjentek.
Osiem pacjentek, u których rozwinęło się nadciśnienie
tętnicze w ciąży, stanowiło grupę badaną. Według klasyfikacji National High Blood Pressure Education Program
Working Group [11] u jednej pacjentki wystąpiło nadciśnienie tętnicze przewlekłe, u 5 nadciśnienie ciążowe,
a u 2 stan przedrzucawkowy. Grupę kontrolną stanowiły
41 pacjentki, u których nie stwierdzono podwyższonych
wartości ciśnienia tętniczego podczas ciąży i połogu, ani
innych istotnych patologii ciąży. Z analizy wykluczono 4
pacjentki: jedna z nich doświadczyła utraty ciąży w 18.
tygodniu ciąży, druga w 24. tygodniu ciąży, a dwie kolejne
urodziły przedwcześnie.
Metoda pomiaru stężenia całkowitego wolnego DNA
przy użyciu ilości kopii wolnego genu β-globiny została
oparta o publikację Farina i wsp. [12]. Wolne DNA było
izolowane z 1,5 ml surowicy za pomocą zestawu Blood
Mini (A&A Biotechnology, Poland). Do reakcji qPCR zostały użyte zestawy odczynników Finnzymes DyNAmo™
HS SYBR® Green qPCR Kit (Thermo Scientific, Finland)
i termocykler RotorGene 3000 (Corbett Research, Australia). Do reakcji qPCR zostały wykorzystane następujące
sekwencje starterów: GLB-F (5'-GTG CAC CTG ACT
CCTGAG GAG A-3') i GLB-R (5'-CCT TGA TAC CAA CCT
GCC CAG-3'). Mieszanina reakcyjna zawierała: polymerase
master mix – 10 ul, startery 0,5 uM – 1 ul, matrycę – 8 ul
wyizolowanego DNA. Profil termiczny reakcji (50 Cykli)
był następujący: Hot start 95EC, 15 min 0 s, Template
melting 94EC, hold 15 s, Annealing 63EC, hold 20 s, Elongation 72EC, hold 30 s, acquiring to Cycling A(FAM/Sybr),
Finish 72EC, 10 min 0 secs. Reakcje przeprowadzono w
duplikacji dla każdej próbki oraz w obecności kontroli
negatywnej. Wyniki zanotowane dla każdej próby zostały
odniesione do krzywej kalibracyjnej skonstruowanej
w oparciu o ekwiwalent genomu (GE – 6,6 pg DNA) i ostatecznie wyrażone w GE/ml krwi.
Do analizy statystycznej wykorzystano program MedCalc. Użyto testów Shapiro-Wilka, Manna-Whitneya, dokładnego testu dwustronnego Fishera, a także krzywą ROC. Za
istotność statystyczną przyjęto P < 0,05.
15
240
220
mediana
200
25%-75%
180
min-max
160
140
120
100
80
60
40
20
0
grupa kontrolna
grupa badana
Ryc. 1. Całkowite wolne DNA w surowicy kobiet przed
wystąpieniem nadciśnienia tętniczego
GE/ml
100
czułość: 100,0
specyficzność: 88,2
punkt odcięcia: >60
80
60
40
20
0
0
20
40
60
100-swoistość
80
100
Ryc. 2. Krzywa ROC. Pole powierzchni pod krzywą 0,96
Wyniki
Średni wiek pacjentek w grupie badanej wynosił
37,8 ± 4,59, a w grupie kontrolnej 35,19 ± 5,45 lat. Mediana
rodności wynosiła odpowiednio 2 (min. 1, max. 7) i 2 (min.
Nadciśnienie tętnicze rozwijało się średnio w 28 ± 6,5
tygodniu ciąży (min. 17, max. 37). Maksymalne wartości
ciśnienia skurczowego wynosiły średnio 167 ± 23 mm Hg,
16
T. Goździewicz, P. Wirstlein, J. Skrzypczak
a rozkurczowego 103 ±1 2 mm Hg. Białkomocz powyżej
300 mg w dobowej zbiórce moczu stwierdzono u 2 (25%)
pacjentek, a obrzęki ciała u 7 (87%). Siedem pacjentek leczono wyłącznie Metyldopą, a w przypadku jednej pacjentki nie włączono leczenia hipotensyjnego ze względu
na utrzymywanie się ciśnienia tętniczego w granicach
140/90 mm Hg.
W tabeli 1 porównano wyniki położnicze obu grup.
W grupie badanej ciąża kończyła się średnio w 37,2 ± 2,9
tygodniu ciąży, a w grupie kontrolnej w 39,0 ± 1,6 tygodniu
ciąży. Zarówno w przypadku kobiet z nadciśnieniem tętniczym, jak i bez nadciśnienia, częściej rodziły się dzieci płci
męskiej niż żeńskiej, odpowiednio 87% vs. 73%.
Tabela 1. Porównanie wyników położniczych
w grupie badanej i kontrolnej
Grupa
badana
N=8
Grupa
kontrolna
N = 41
P
Tydz. ukończenia ciąży;
średnia ± SD
37,2 ± 2,9
39,0 ± 1,6
NS
Poród drogami natury;
liczba pacjentek (%)
2; 25,00%
18; 43,90%
NS
Cięcie cesarskie;
liczba pacjentek (%)
6; 75,00%
21; 51,22%
NS
0; 0%
2; 4,88%
NS
Masa urodzeniowa
średnia ± SD
3081 ± 1028 g
3463 ± 611 g
NS
Apgar w 5. min.;
mediana; min-max.
10; 8-10
10; 1-10
NS
7; 87,50%
30; 73,17%
NS
Wyciągacz próżniowy;
liczba pacjentek (%)
Płeć męska;
liczba noworodków (%)
Średnia masa urodzeniowa płodów w grupie badanej wynosiła 3081 g ± 1028, i była niższa, chociaż nieistotnie, od
średniej masy (3537 g ± 478) w grupie kontrolnej. Mediana
punktacji w skali Apgar w 5. minucie wynosiła 10 zarówno
w grupie badanej (min. 8, max. 10), jak i w grupie kontrolnej (min. 1, max. 10). Siedemdziesiąt pięć procent kobiet
z nadciśnieniem tętniczym urodziło na drodze cięcia cesarskiego, głównie ze względu na wysokie wartości ciśnienia tętniczego, niepoddające się leczeniu. W grupie
kontrolnej odsetek cięć cesarskich był niższy i wynosił
51%. Nie stwierdzono istotnych statystycznie różnic w wymienionych wynikach położniczych obu grup.
Dyskusja
W naszych badaniach całkowite wolne DNA krążące
we krwi matki było istotnie wyższe na początku drugiego
trymestru ciąży u kobiet, u których rozwinęło się nadciśnienie tętnicze w późniejszych tygodniach ciąży. Warto
podkreślić wysoką czułość i specyficzność, jaką uzyskaliśmy. Całkowite wolne DNA składa się z komponenty mat-
czynej i płodowej. Źródłem matczynego wolnego DNA
może być śródbłonek. Apoptoza komórek trofoblastu może generować mikrocząsteczki indukujące dysfunkcję
śródbłonka. Dodatkowo te mikrocząsteczki mogą aktywować neutrofile do uwalniania pozakomórkowych cząsteczek zawierających duże ilości DNA. Nieprawidłowości
w funkcjonowaniu łożyska mogą pośrednio wpływać na
funkcjonowanie śródbłonka matki, a w efekcie prowadzić
do zwiększonego stężenia matczynego komponentu wolnego DNA w surowicy [16-20]. Z kolei głównym źródłem
wolnego płodowego DNA jest łożysko. Płodowe DNA stanowi jednak znikomą ilość całkowitego wolnego DNA
krążącego we krwi ciężarnej, którego źródłem jest sama
matka [14].
Wyżej opisane źródła wolnego DNA w surowicy matki,
a zwłaszcza potwierdzenie wyższych jego stężeń u kobiet,
u których rozwija się nadciśnienie tętnicze w ciąży, dodatkowo wyjaśniają patogenezę łożyskowej postaci stanu
przedrzucawkowego. Przyjmuje się, że zmniejszenie przepływu łożyskowego jest pierwszym etapem rozwoju choroby, a drugim uogólnione uszkodzenie śródbłonka ciężarnej [21].
Metaanaliza obejmująca 15 prac wykazała, że u pacjentek ze stanem przedrzucawkowym stężenie wolnego płodowego DNA we krwi matki jest 2-15 krotnie wyższe niż
u pacjentek z prawidłowym ciśnieniem tętniczym w ciąży.
W dziesięciu badaniach wolne płodowe DNA oznaczano
u kobiet z rozpoznanym stanem przedrzucawkowym,
a w 5 przed wystąpieniem nadciśnienia ciążowego. Stężenie wolnego płodowego DNA we krwi matki było tym
większe, im cięższy był późniejszy przebieg stanu przedrzucawkowego oraz im wcześniej się on pojawiał w przebiegu ciąży. Ograniczeniem badań było wykorzystanie genów znajdujących się na chromosomie Y celem odróżnienia wolnego DNA matki i płodu [9, 10]. Zniesienie ograniczenia tej metody zarezerwowanej dotychczas dla płodów
męskich stanowiłoby rozszerzenie screeningu wystąpienia
nadciśnienia tętniczego w ciąży na wszystkie pacjentki,
dlatego opracowana przez Farina i wsp. metoda oznaczania całkowitego wolnego DNA przy użyciu genu β-globiny
pozwala badać każdą ciężarną, bez względu na płeć płodu [12].
Do oznaczenia stężenia wolnego całkowitego DNA wykorzystaliśmy gen β-globiny. W pracy Sekizawa i wsp. [22]
wykorzystano zarówno gen β-globiny, jak i gen GAPDH.
Wadą zastosowanej przez nas metody oznaczania stężenia
DNA genu β-globiny jest mało wydajna izolacja DNA z surowicy kobiety ciężarnej.
Wyższe stężenia wolnego całkowitego DNA, jakie uzyskaliśmy w przypadku kobiet, u których rozwinęło się nadciśnienie tętnicze w ciąży, potwierdzają wyniki Farina
i wsp. [12]. Grupę badaną również stanowiło 8 kobiet,
u których w 3. trymestrze ciąży wystąpił stan przedrzucawkowy. Jednakże autorzy do obliczeń wolnego całkowitego DNA wykorzystali model matematyczny w postaci
Ocena stężenia całkowitego wolnego DNA we krwi matki przy użyciu genu $-globiny w predykcji nadciśnienia...
logarytmicznej regresji liniowej, a wyniki przedstawili jako
wielokrotności median. W przypadku kobiet zagrożonych
wystąpieniem stanu przedrzucawkowego uzyskali dwukrotnie wyższe stężenia wolnego całkowitego DNA w surowicy ciężarnej, w porównaniu do grupy kontrolnej.
Al Nakib i wsp. [23] oznaczali stężenie wolnego całkowitego DNA jako markera wystąpienia ograniczania wzrastania wewnątrzmacicznego płodu (IUGR) zależnego od
niewydolności łożyska. Wykorzystali do tego celu również
gen $-globiny. Uzyskali czułość 78,95% oraz swoistość
61,29% w predykcji wystąpienia IUGR dla samego podwyższonego stężenia wolnego całkowitego DNA, a gdy dodatkowo do analizy dołączyli nieprawidłowe wyniki przepływów dopplerowskich w tętnicach macicznych wskaźnik czułości wzrósł do 97%, a specyficzności do 63%.
Alternatywną metodą predykcji wystąpienia nadciśnienia tętniczego w ciąży jest pomiar stężenia płodowego/
łożyskowego RNA w surowicy ciężarnej, który także znosi
ograniczenie badania do ciężarnej z męskim płodem.
Dotychczas badacze udowodnili wyższe stężenie łożyskowego mRNA kodującego hormon uwalniający kortykotropinę (CRH) nawet 10-krotnie, u kobiet z rozpoznanym stanem przedrzucawkowym [24, 25]. Jednakże tylko Galbini
i wsp. [25] analizowali stężenia mRNA CRH przed wystąpieniem choroby; wykazali oni istotnie wyższe stężenia
mRNA w surowicy ciężarnych kilka tygodni przed pierwszymi objawami stanu przedrzucawkowego.
Dokładna ocena ryzyka wystąpienia nadciśnienia tętniczego w ciąży może wskazać kobiety, które należy częściej i dokładniej monitorować w kierunku podwyższonych
wartości ciśnienia tętniczego. Wcześnie wdrożone odpowiednie postępowanie może ustrzec ciężarną przed takimi
powikłaniami jak przedwczesne oddzielenie łożyska, niewydolność nerek czy zespół HELLP. U kobiet, z dużym
ryzykiem wystąpienia stanu przedrzucawkowego, możnaby zastosować niskodawkową aspirynę celem prewencji
albo zmniejszenia nasilenia choroby w późniejszych tygodniach ciąży [26].
Wnioski
17
[4] Lo Y.M., Corbetta N., Chamberlain P.R. i wsp. (1997) Presence of fetal DNA in maternal plasma and serum. Lancet 350:
485-487.
[5] Hyett J.A., Gardener G., Stojilkovic-Mikic T. i wsp. (2005) Re-
duction in diagnostic and therapeutic interventions by noninvasive determination of fetal sex in early pregnancy. Pre-
nat. Diagn. 25(12): 1111-6.
[6] Finning K., Martin P., Daniels G. (2004) A clinical service in
the UK to predict fetal Rh (Rhesus) D blood group using free
fetal DNA in maternal plasma. Ann. NY Acad. Sci. 1022:
119-23.
[7] Daniels G., Finning K., Martin P. i wsp. (2009) Noninvasive
prenatal diagnosis of fetal blood group phenotypes: current
practice and future prospects. Prenat. Diagn. 29(2): 101-107.
[8] Alberry M.S., Soothill P.W. (2008) Non-invasive prenatal
diagnosis: implications for antenatal diagnosis and management of high-risk pregnancies. Semin. Fetal Neonatal Med.
13(2): 84-90.
[9] Goździewicz T., Gruca-Stryjak K., Wirstlein P. i wsp. (2009)
Free fetal DNA maternal plasma concentration as predictive
factor of hypertensive disorders in pregnancy. Arch. Perinat.
Med. 15(1): 17-20.
[10] Sifakis S., Zaravinos A., Maiz N. i wsp. (2009) First-trimester
maternal plasma cell-free fetal DNA and preeclampsia. Am.
J. Obstet. Gynecol. 201: 472.e1-7.
[11] Report of the National High Blood Pressure Education Pro-
gram Working Group on High Blood Pressure in Pregnancy.
(2000) Am. J. Obstet. Gynecol. 183(1): S1-S22.
[12] Farina A., Sekizawa A., Iwasaki M. i wsp. (2004) Total cell-
free DNA ($-globin gene) distribution in maternal plasma at
the second trimester: a new prospective for preeclampsia
screening. Prenat. Diagn. 24: 722-726.
[13] Wataganara T., Bianchi D.W. (2004) Fetal cell-free nucleic
acids in the maternal circulation: new clinical applications.
Ann N Y Acad Sci, 1022: 90-99.
[14] Lo Y.M., Tein M.S., Lau T.K. i wsp. (1998) Quantitative ana-
lysis of fetal DNA in maternal plasma and serum: implications for noninvasive prenatal diagnosis. Am. J. Hum. Genet.
62: 768-775.
[15] Bischoff F.Z., Lewis D.E., Simpson J.L. (2005) Cell-free fetal
DNA in maternal blood: kinetics, source and structure. Hum.
Reprod. Update 11: 59-67.
[16] Farina A., LeShane E.S., Lambert-Messerlian G.M. i wsp.
(2003) Evaluation of cell-free fetal DNA as a second-trimester
maternal serum marker of Down syndrome pregnancy. Clin.
Chem. 49: 239-242.
[17] Gupta A., Hasler P., Gebhardt S. i wsp. (2006) Occurrence of
neutrophil extracellular DNA traps (NETs) in pre-eclampsia:
a link with elevated levels of cell-free DNA? Ann. NY Acad.
1) Stężenie całkowitego wolnego DNA w surowicy matki,
może ułatwić przewidzenie wystąpienia nadciśnienia
tętniczego w późniejszych tygodniach ciąży.
2) Dalszych badań wymaga dopracowanie wydajności
metody izolacji wolnego DNA z surowicy matki.
Sci. 1075: 118-122.
[18] Tjoa M.L., Cindrova-Davies T., Spasis-Boskovic O. i wsp.
(2006) Trophoblasitc oxidative stress and the release of cellfree feto-placental DNA. Am. J. Pathol. 169: 400-404.
[19] Gupta A.K., Holzgreve W., Huppertz B. i wsp. (2004) Detec-
Piśmiennictwo
2187-2190.
[20] Goswani D., Tannetta D.S., Magee L.A. i wsp. (2006) Excess
[1] James D., Steer P., Weiner C. i wsp. (2005) High Risk Pregnancy: Management Options, W.B. Saunders Company, Philadelphia.
[2] Plascencia W., Maiz N., Bonino S. (2007) Uterine artery Dop-
pler at 11+0 to 13+6 weeks in the prediction of preeclampsia
Ultrasound Obstet. Gynecol. 30: 742-9.
[3] Duckitt K., Harrington D. (2005) Risk factors for preeclam-
psia at antenatal booking:systematic review of controlled
studies BMJ 330: 565-72.
tion of fetal DNA and RNA in placenta-derived syncytiotrophoblast microparticles generated in vitro. Clin. Chem. 50:
syncytiotrophoblast microparticle shedding is a feature of
early-onset pre-eclampsia, but not normotensive intrauterine
growth restriction. Placenta, 27: 56-61.
[21] Kornacki J., Skrzypczak J. (2008) Preeclampsia – two manifestations of the same disease. Ginekol. Pol. 79(6): 432-7.
[22] Sekizawa A., Jimbo M., Saito H. i wsp. (2003) Cell free fetal
DNA in the plasma of pregnant women with severe fetal
growth restriction. Am. J. Obstet. Gynecol. 188: 480-484.
18
T. Goździewicz, P. Wirstlein, J. Skrzypczak
[23] Al Nakib M., Desbriere R., Bonello N. i wsp. (2009) Total and
Fetal Cell-Free DNA analysis in maternal blood as markers
of placental insufficiency in intrauterine growth restriction.
[26] Duley L., Henderson-Smart D.J., Meher S. i wsp. (2007) Anti-
platelet agents for preventing preeclampsia and its complications. Cochrane Database Syst. Rev. 2: CD004659.
Fetal Diagn. Ther. 26: 24-28.
[24] Ng E.K., Leung T.N., Tsui N.B. i wsp. (2003) The concentra-
tion of circulating corticotropin-releasing hormone mRNA in
maternal plasma is increased in preeclampsia. Clin. Chem.
49(5): 727-731.
[25] Galbiati S., Causarano V., Pinzani P. i wsp. (2010) Evaluation
of a panel of circulating DNA, RNA and protein potential
markers for pathogenesis of pregnancy. Clin. Chem. Lab.
J
Tomasz Goździewicz
Klinika Rozrodczości
Uniwersytet Medyczny im. Karola Marcinkowskiego
60-535 Poznań, ul. Polna 33
e-mail: [email protected]
Med. 48: 791-794.
Evaluation of total free DNA maternal plasma concentration using β-globin gene
in the prediction of hypertensive disorders in pregnancy
Introduction: The aim of this study was to evaluate plasma total free DNA in maternal blood using β-globin gene as
a predictive factor of hypertension in pregnancy. Material and methods: The study included 102 pregnant women
hospitalized at the Division of Reproduction Poznan University of Medical Sciences in the years 2006-2010. Definitive
information about the course of pregnancy were obtained from 53 patients. Pregnancies complicated by the occurrence of hypertension were included to the study group (n = 8) and patients with normal blood pressure to control
one (n = 41). All patients in the second trimester had blood samples to evaluate total free DNA. After isolation of free
DNA from maternal serum there were total free DNA concentration determinate by β-globin gene and RT-PCR method.
Results: The concentration of total free DNA in maternal plasma was significantly higher in the study group. The total
genome equivalent concentration of free DNA in maternal plasma higher than 60 GE/ml was calculated to be 100%
sensitive and 88.2% specific as a factor facilitating the prediction of hypertension in pregnancy. Conclusions: We confirmed the usefulness of determining the concentration of total free DNA in maternal plasma as a factor facilitating the
prediction of hypertension in pregnancy.
Key words: total free DNA, hypertension, preeclampsia, β-globin gene