plik pdf

„Lokalizacja i kodowanie chemiczne zwojowych neuronów współczulnych
zaopatrujących strefę przedodźwiernikową żołądka świni domowej w stanie
fizjologicznym i wybranych stanach patologicznych”.
Celem
niniejszego
eksperymentu
było
ustalenie
lokalizacji
oraz neurochemicznego fenotypu neuronów współczulnych, unerwiających okolicę
przedodźwiernikową żołądka świni w warunkach fizjologicznych, podczas stanu
zapalnego żołądka wywołanego długotrwałą suplementacją kwasu acetylosalicylowego
(ASA), po częściowej resekcji ściany żołądka oraz podczas eksperymentalnie
wywołanej nadkwasoty żołądka.
Badania przeprowadzone zostały na 20 niedojrzałych płciowo loszkach rasy
Wielka Biała Polska. Zwierzęta podzielono na 4 grupy: 1) kontrolną, 2) zwierzęta
otrzymujące kwas acetylosalicylowy (grupa ASA), 3) zwierzęta, u których wykonano
częściową resekcję ściany żołądka (grupa RES), oraz 4) zwierzęta, u których dokonano
dożołądkowego wlewu kwasu solnego (grupa HCl). W celu zlokalizowania neuronów
współczulnych unerwiających badaną okolicę, zwierzętom z wszystkich grup
wstrzyknięto wsteczny znacznik neuronalny Fast Blue (FB) w przednią ścianę okolicy
przedodźwiernikowej żołądka. Zwierzęta stanowiące grupę ASA, od 7 dnia
po iniekcji znacznika FB, otrzymywały doustnie, godzinę przed jedzeniem, kwas
acetylosalicylowy. U zwierząt grupy RES, 22 dnia po iniekcji FB, podczas laparotomii
wykonano częściową resekcję ściany żołądka uprzednio nastrzykaną znacznikiem FB.
Natomiast, 23 dnia eksperymentu zwierzęta z grupy HCL wprowadzono w stan narkozy
ogólnej i dokonano dożołądkowego wlewu 0.25 M wodnego roztworu kwasu solnego
w dawce 5 ml/kg masy ciała. 28 dnia eksperymentu wszystkie zwierzęta poddano
eutanazji, poprzez przedawkowanie anestetyku. Bezpośrednio po perfuzji pobrano
do dalszych badań następujące tkanki: kompleks zwoju trzewnego i krezkowego
przedniego (CSMG), obustronne piersiowe, lędźwiowe i krzyżowe zwoje pni
sympatycznych (SChG), zwój szyjny przedni i środkowy, obustronne nerwy
międzykrezkowe
z
leżącymi
w
ich
przebiegu
zwojami
aortowo-nerkowymi
oraz jajnikowymi, obustronne zwoje krezkowe tylne (IMG).
Następnie skrawki kriostatowe (14 µm grubości) poddano podwójnym
barwieniom immunofluorescencyjnym z użyciem przeciwciał skierowanych przeciwko
hydroksylazie tyrozyny (TH), β- hydroksylazie dopaminy (DβH), neuropeptydowi Y
(NPY), galaninie (GAL), neuronalnej izoformie syntetazy tlenku azotu (nNOS), leu5enkefalinie (LENK), transkryptowi kodowanemu kokainą i amfetaminą (CART),
peptydowi
kodowanemu
genem
kalcytoniny
(CGRP),
substancji
P
(SP),
oraz wazoaktywnemu peptydowi jelitowemu (VIP).
Wyniki uzyskane w tym eksperymencie ujawniły, iż źródłem zazwojowych
włókien sympatycznych, unerwiających okolicę przedodźwiernikową żołądka świni,
jest kompleks zwoju trzewnego i krezkowego przedniego (CSMG). W grupie kontrolnej
neurony FB-pozytywne wykazywały immunoreaktywność względem TH (94,85
± 1,01%), DβH (97,10 ± 0,97%), NPY (46,88 ± 2,53%) i GAL (8,40 ± 0,53%).
W grupie ASA populacja neuronów TH-IR, oraz DβH-IR była zmniejszona
(odpowiednio 85,78 ± 2,65% i 88,82 ± 1,63%). Ponadto, stan zapalny żołądka
wywołany długotrwałą suplementacją kwasu acetylosalicylowego wywołał wzrost
ekspresji NPY (76,59 ± 3,02%) i GAL (26,45 ± 2,75%), jak również de novo syntezę
nNOS (6,13 ± 1,11%) i LENK (4,77 ± 0,42%) w wyznakowanych neuronach CSMG.
Częściowa
resekcja
ściany
żołądka
spowodowała
zmniejszenie
populacji
FB-pozytywnych neuronów kodujących TH (84,56 ± 2,56 %) i DβH (88,30 ± 1,62 %).
Dodatkowo w badanych neuronach zaobserwowano znaczący wzrost ekspresji NPY
(64,93 ± 2,32 %) i GAL (31,13 ± 1,64 %), oraz de novo syntezę nNOS (7,29 ± 0,65 %)
i LENK (3,92 ± 0,45 %). Eksperymentalnie wywołana nadkwasota żołądka
spowodowała indukcję ekspresji GAL (22,52 ± 1,18 %) i NPY (57,83 ± 2,04 %),
de novo syntezę nNOS (8,18 ± 0,75 %) i LENK (5,57 ± 0,43 %), oraz zmniejszenie
ekspresji TH (86,00 ± 2,42 %) i DβH (89,88 ± 1,84 %) w perykarionach unerwiających
badaną okolicę żołądka. Ponadto, u wszystkich badanych zwierząt zaobserwowano sieć
CART-, CGRP-, SP-, VIP, LENK-, nNOS- immunoreaktywnych włókien otaczających
FB-pozytywne neurony. Gęstość włókien obserwowanych u zwierząt z grup
eksperymentalnych nie różniła się istotnie od obserwowanych u zwierząt z grupy
kontrolnej.
Uzyskane wyniki wskazują, iż neurony współczulne zaopatrujące żołądek świni
przystosowując się do stanów zapalnych i urazowych syntetyzują substancje
regulacyjne wspierające przeżywalność neuronów i lokalne procesy regeneracji.