pastorex™ meningitis - Bio-Rad

PASTOREX™ MENINGITIS
25 testów
61607
61608
61610
61611
61613
61614
61616
61618
61717
TESTY DO WYKRYWANIA ANTYGENÓW ROZPUSZCZALNYCH I DO
IDENTYFIKACJI NEISSERIA MENINGITIDIS A, C, Y/W135, B / E.COLI K1,
HAEMOPHILUS INFLUENZAE b , STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE,
STREPTOCOCCUS B
1
1- ZNACZENIE KLINICZNE
Głównymi czynnikami etiologicznymi bakteryjnego zapalenia opon mózgowych są: Neisseria
meningitidis, Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae typu b i paciorkowce betahemolizujące z grupy B.
Ostre, zagrażające życiu zakażenie, jakim jest bakteryjne zapalenie opon mózgowych,
wymaga szybkiego wykrycia czynnika etiologicznego i wdrożenia odpowiedniego leczenia.
Klasyczna metoda hodowli, mimo iż niezbędna dla oznaczenia wrażliwości na antybiotyki i
potwierdzenia identyfikacji, jest długotrwała a uzyskany wynik jest często fałszywie ujemny,
gdy materiał do badania był nie odpowiednio transportowany lub przechowywany, a także,
gdy przed pobraniem materiału został podany antybiotyk.
Szybszą identyfikację drobnoustrojów wywołujących zakażenie umożliwiają metody
immunologiczne, pozwalające na wykrywanie rozpuszczalnych antygenów bakterii,
występujących podczas zakażenia w płynach fizjologicznych, jak płyn mózgowo-rdzeniowy,
mocz, surowica. Niniejszy zestaw odczynników pozwala na wykrycie polisacharydowych
antygenów niektórych, szczególnie chorobotwórczych grup serologicznych lub serotypów
następujących gatunków bakterii: Streptococcus pneumoniae (83 typy); Haemophilus
influenzae typu b, Neisseria meningitidis z grupy A, z grupy B / E.coli K1, z grupy C, z grupy
Y/W135 i Streptococcus sp. z grupy B.
Polisacharyd otoczki dwoinki Neisseria meningitidis z grupy serologicznej B ma słabe
właściwości antygenowe i trudno jest otrzymać przeciwciała królicze w sposób powtarzalny
reagujące ze swoistym antygenem. Dlatego w teście zastosowano mysie monoklonalne
przeciwciała, dające swoistą i powtarzalna reakcję z antygenem polisacharydowym
meningokoków z grupy serologicznej B.
Antygen Neisseria meningitidis z grupy serologicznej B jest identyczny z polisacharydowym
antygenem E.coli K1. Homologia antygenowa pomiędzy Neisseria meningitidis z grupy B i
E.coli K1 umożliwia diagnostykę zapalenia opon mózgowych o etiologii E.coli u noworodków,
gdyż czynnikiem etiologicznym w około 80% przypadków jest szczep K1.
Należy pamiętać, że za zapalenie opon mózgowych u noworodków i wcześniaków są
głównie odpowiedzialne E.coli i paciorkowce z grupy B, natomiast zakażenia
meningokokowe występują w tej grupie wiekowej bardzo rzadko.
2- ZASADA METODY
Antygen obecny w badanym materiale klinicznym jest wykrywany za pomocą cząstek
lateksowych opłaszczonych swoistymi homologicznymi przeciwciałami. Występujący w
próbce antygen reaguje z przeciwciałami, powodując aglutynację cząstek lateksu. Przy braku
swoistego antygenu, zawiesina lateksu pozostaje jednorodna.
3- SKŁAD ZESTAWU
1. PASTOREX™ MENINGITIS 25 testów, nr kat. 61607 zawiera:
•
Odczynnik 1 (R1): Lateks N.meningitidis B/E.coli K1
1 fiolka zawierająca 0,4 ml czerwonego lateksu opłaszczonego mysimi przeciwciałami
monoklonalnymi swoistymi dla Neisseria meningitidis z grupy B/E.coli K1.
•
Odczynnik 2 (R2): Kontrola ujemna Neisseria meningitidis grupy B/E.coli K1
1 fiolka zawierająca 0,4 ml czerwonego lateksu opłaszczonego mysimi przeciwciałami
monoklonalnymi skierowanymi przeciwko toksynie tężcowej.
2
•
Odczynnik 3 (R3): H.influenzae b
1 fiolka zawierająca 0.4 ml białego lateksu opłaszczonego króliczymi przeciwciałami
swoistymi dla Haemophilus influenzae typu b.
•
Odczynnik 4 (R4): S.pneumoniae
1 fiolka zawierająca 0.4 ml zielonego lateksu opłaszczonego
przeciwciałami swoistymi dla Streptococcus pneumoniae.
•
króliczymi
Odczynnik 5 (R5): Streptococcus B:
1 fiolka zawierająca 0.4 ml żółtego lateksu opłaszczonego króliczymi przeciwciałami
swoistymi dla Streptococcus z grupy B.
•
Odczynnik 6 (R6): N.meningitidis A
1 fiolka zawierająca 0.4 ml niebieskiego lateksu opłaszczonego króliczymi
przeciwciałami swoistymi dla Neisseria meningitidis z grupy A.
•
Odczynnik 7 (R7): N.meningitidis C
1 fiolka zawierająca 0.4 ml czerwonego lateksu opłaszczonego króliczymi
przeciwciałami swoistymi dla Neisseria meningitidis z grupy C.
•
Odczynnik 8 (R8): N.meningitidis Y/W135
1 fiolka zawierająca 0.4 ml różowego lateksu opłaszczonego
przeciwciałami swoistymi dla Neisseria meningitidis z grupy Y/W135.
•
króliczymi
Odczynnik 9 (R9): Poliwalentna kontrola ujemna
1 fiolka zawierająca 0.4 ml śliwkowego lateksu opłaszczonego immunoglobulinami
IgG pochodzącymi od nie immunizowanych królików.
•
Odczynnik 10 (R10): Poliwalentna kontrola dodatnia
Kontrolę dodatnią stanowi liofilizowany ekstrakt antygenowy, rekonstytuowany za
pomocą 1 ml jałowej wody. Zawiera on antygeny polisacharydowe N.meningitidis A,
C, B, Y/W135, H.influenzae b, Streptococcus B i S.pneumoniae. Objętość odczynnika
wystarcza na 20 reakcji.
Wszystkie odczynniki zawierają jako konserwant 0.02% tiomersalu.
Odczynniki: R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8 i R9 zawierają azydek sodu w stężeniu
poniżej 0.1%.
•
Jednorazowe karty do aglutynacji
•
Jednorazowe patyczki do aglutynacji.
2. PASTOREX™ MENINGITIS INDIVIDUAL LATEX TESTS (25 testów każdy)
•
Pojedyncze testy lateksowe (nie zawierają kontroli)
- N.meningitidis A (R6)
nr kat. 61608
- N.meningitidis C (R7)
nr kat. 61610
- N. meningitidis B/ E.coli K1 (R1)
nr kat. 61611
- Streptococcus B (R5)
nr kat. 61613
- Streptococcus pneumoniae (R4)
nr kat. 61614
3
•
- Haemophilus influenzae typu b (R3)
nr kat. 61616
PASTOREX™ MENINGITIS Control
nr kat. 61616
Kontrole dla pojedynczych odczynników lateksowych (2 x 25 testów)
-
2 fiolki z kroplomierzem zawierające 0.4 ml kontroli ujemnej (R9).
-
2 fiolki z liofilizowaną kontrolą dodatnią, rekonstytuowaną za pomocą 1 ml jałowej
wody (R10).
-
2 fiolki z kroplomierzem zawierające 0,4 ml kontroli ujemnej dla N.m.B/E.coli K1
(R2).
-
Jednorazowe karty do aglutynacji.
-
Jednorazowe patyczki do aglutynacji.
3. PASTOREX™ MENINGITIS Diluent
1 butelka zawierająca 40 ml rozcieńczalnika do surowicy nr kat. 61717
4- PRZECHOWYWANIE
Wszystkie odczynniki zachowują trwałość do daty ważności wskazanej na opakowaniu, jeżeli
przechowywane są w temp. +2-8°C i nie są zanieczyszczone mikrobiologicznie (także po
otwarciu).
Zrekonstytuowana poliwalentna kontrola dodatnia (R10) jest trwała przez 1 miesiąc w temp.
+2-8°C (nie zanieczyszczona mikrobiologicznie) lub dłużej po rozporcjowaniu i zamrożeniu w
temp. -20°C.
Fiolki z odczynnikami lateksowymi należy przechowywać pionowo.
ODCZYNNIKÓW LATEKSOWYCH NIE MOŻNA ZAMRAŻAĆ.
5- INNE NIEZBĘDNE MATERIAŁY
•
Pipety pobierające objętość 1 kropli (40-50 μl) do nanoszenia badanego materiału.
•
Probówki serologiczne lub probówki Eppendorfa.
•
Blok grzewczy lub łaźnia wodna o temp. 100°C.
•
Wirówka do probówek.
•
Pojemnik z płynem dezynfekcyjnym.
•
Jałowa woda destylowana, jałowa sól fizjologiczna lub rozcieńczalnik (61717).
6- ZALECENIA DLA UŻYTKOWNIKA
Uzyskanie prawidłowego wyniku zależy od przestrzegania Dobrej Praktyki Laboratoryjnej:
•
Odczynniki oraz próbki podczas testu powinny mieć temperaturę pokojową (+1825°C).
•
Nie dotykać pól reakcyjnych na karcie do aglutynacji.
•
Do każdej badanej próbki zmieniać pipetę lub końcówkę pipety.
•
Przed użyciem wstrząsnąć fiolkę z lateksem.
•
Wycierać końcówkę zakraplacza, aby uzyskać wykalibrowane krople.
4
•
Nanosząc odczynnik, pionowo trzymać fiolkę.
•
Do każdej reakcji używać nowego patyczka.
•
Zużyte materiały jednorazowe zinaktywować przez autoklawowanie lub dezynfekcję.
•
Poliwalentną kontrolę dodatnią należy zrekonstytuować za pomocą jałowej wody
destylowanej, unikając zanieczyszczenia.
HIGIENA I BEZPIECZEŃSTWO PRACY
Należy zapoznać się z najnowszymi metodami i zaleceniami dotyczącymi ochrony przed
zakażeniem podczas pracy z materiałem biologicznym.
•
Próbki materiałów klinicznych należy traktować jako potencjalnie zakaźne.
•
Odczynniki lateksowe zawierają azydek sodu. Należy unikać kontaktu z oczami, ze
skórą i błonami śluzowymi.
•
Azydek sodu może reagować z miedzią i ołowiem, tworząc wybuchowe azydki metali.
Aby zapobiec akumulacji azydków, po wylaniu odczynników spłukać zlew dużą ilością
wody.
7- PROCEDURA: PMR, surowica, mocz
PRÓBKI
Test należy wykonać jak najszybciej po pobraniu materiału. Jeśli materiał trzeba
przechować, można pozostawić go na kilka godzin w temp. +2-8°C lub na dłużej
zamrozić w temp. -20°C (w tym przypadku zachować tylko supernatant po odwirowaniu
próbek). Unikać rozmrażania i ponownego zamrażania próbek. Badanie mikrobiologiczne
(posiew) powinno zostać wykonane jako pierwsze aby uniknąć ryzyka zanieczyszczenia
próbki. Minimalna objętość próbki potrzebna do testu lateksowego to 0.5 ml.
A- Przygotowanie próbek klinicznych.
UWAGA: Do łaźni wodnej należy wstawiać próbówki wodoszczelne tak aby
podczas inkubacji nie dostała się do nich woda. W miarę możliwości używać bloku
grzewczego.
a) PŁYN MÓZGOWO-RDZENIOWY (PMR)
Bardzo mętny lub zawierający krwinki czerwone płyn mózgowo-rdzeniowy należy
odwirować przez 5 minut przy 350g (2000 obrotów/min.) i zebrać supernatant.
•
Ogrzać próbkę w temp. 100°C przez 3 minuty (blok grzewczy lub łaźnia wodna), a
następnie odwirować przez 5 minut przy 3000g lub przefiltrować przez filtr o porach
0.45 μm.
b) SUROWICA
•
Do jednej objętości surowicy (0.5 ml) dodać 3 objętości (1.5 ml) rozcieńczalnika (nr
kat 61717).
•
Ogrzać próbkę w temp. 100°C przez 3 minuty w bloku grzewczym lub w łaźni wodnej.
•
Odwirować przez 5 minut przy 3000g.
5
UWAGA: Nie wykonywać badania na próbkach osocza. Nie badano wpływu na
wynik testu dużej ilości albuminy, lipidów, hemoglobiny i bilirubiny. Najlepsze
wyniki uzyskuje się dla świeżej surowicy.
c) MOCZ
Aby zwiększyć stężenie antygenu, należy przed oznaczeniem zagęścić próbkę do 25x,
stosując membranę typu Amicon B15 (Amicon, Francja).
•
Ogrzać próbkę w temp. 100°C przez 3 minuty w bloku grzewczym lub w łaźni wodnej.
•
Odwirować przez 5 minut przy 3000g lub przefiltrować przez filtr o porach 0.45 μm.
B- Procedura testowa.
•
•
•
•
•
Umieść kroplę (40 do 50 µl) wstępnie podgrzanej próbki supernatantu w każdym
dołku płytki aglutynacyjnej
Delikatnie wstrząśnij butelkami z odczynnikiem lateksowym.
Przytrzymując butelkę w pionie, umieść jedną kroplę każdego odczynnika
lateksowego na płytce jednorazowego użytku zgodnie ze wskazanym wzorem
rozprowadzenia: R9, R6, R7, R1 i R2 w białych dołkach i R8, R3, R4 i R5 w czarnych
dołkach.
Zmieszaj odczynniki lateksowe i próbkę za pomocą pręcika; zmień pręcik dla
każdego odczynnika.
Obracaj delikatnie płytkę (~120 obr/min.) przez 10 minut i obserwuj proces aglutynacji
w ciągu 10 minut (mieszadło typu orbitalnego można używać z prędkością ~120
obr/min.).
8- PROCEDURA: POSIEW KRWI
W celu uzyskania wstępnej orientacji, sprawdź morfologię i barwienie według metody Grama
• Pobierz 1 do 2 ml dodatniego posiewu krwi.
• Wiruj przez 5 minut w 2000 g
• Umieść jedną kroplę (40 do 50 µl) supernatantu w każdym dołku na płytce
jednorazowego użytku zgodnie z testowanymi odczynnikami lateksowymi i według
barwienia Grama.
• Delikatnie wstrząśnij butelkami z odczynnikami lateksowymi wybranymi do
przeprowadzenia testu.
• Przytrzymując butelkę w pionie, umieść jedną kroplę każdego wybranego odczynnika
lateksowego na obrzeżach kropli supernatantu.
• Zmieszaj odczynniki lateksowe i próbkę za pomocą pręcika, zmieniając pręcik dla
każdego odczynnika.
• Obracaj płytkę z prędkością ~120 obr./min. przez 5 minut. W ciągu tych 5 minut,
obserwuj pod kątem pojawienia się aglutynacji.
Niektóre media do posiewu krwi mogą wywoływać określone reakcje lub problemy z
odczytywalnością. W przypadku kontroli ujemnej, użyj posiewu krwi zaszczepionego ze
sterylną krwią lub z innym organizmem, innym niż te wykryte przez test PASTOREXTM w
kierunku zapalenia opon mózgowych.
6
9- INTERPRETACJA WYNIKÓW
REAKCJA DODATNIA
Reakcja dodatnia jest wskazywana doskonałą aglutynacją widoczną gołym okiem w
przeciwieństwie do kontroli ujemnej.
Intensywność aglutynacji i czas pojawienia się zależy od stężenia antygenu w testowanej
próbce.
Niezgodność pomiędzy testem dodatniego antygenu i posiewem ujemnym można wyjaśnić
nieobecnością żywych bakterii w próbce posiewu (leczenie antybiotykami rozpoczęło się
przed pobraniem próbki lub warunki transportowe uniemożliwiły przetrwanie delikatnych
bakterii).
W większości przypadków, reakcja dodatnia z anty-N. meningitidis B/E.coli K1 u
noworodków lub wcześniaków wskazuje na infekcję E.coli K1. U osób starszych
prawdopodobniejszy jest Meningococcus B. Posiew z próbki musi potwierdzić diagnozę.
REAKCJA UJEMNA
Jednorodna zawiesina, bez zlepiania.
WYNIKI NIEMOŻLIWE DO ZINTERPRETOWANIA
Reakcja jest niemożliwa do zinterpretowania, jeżeli próbki zlepiają się z ujemnymi kontrolami
lateksowymi (R2 lub R9) i/lub z więcej niż jednym odczynnikiem lateksowym w zestawie. W
takim przypadku, zalecamy powtórzenie testu na innej próbce i odczekanie do momentu
uzyskania wyników z posiewu. (Bardzo rzadko, infekcja może być spowodowana dwoma
różnymi rodzajami bakterii).
10- PROCEDURA: GRUPOWANIE SZCZEPÓW BAKTERII ODOSOBNIONYCH NA
AGARZE (kolonie ze świeżego i czystego posiewu)
Do grupowania szczepów bakterii można wykorzystać odczynnika lateksowego
Y/W135. W celu określenia tych grup zalecamy użycie tradycyjnej przeciwsurowicy (zestaw
Y,W135, 29E: nr ref. 58704, 3 x 1 mL)
W celu uzyskania wstępnej orientacji przed wykonaniem testu:
• Sprawdź morfologię i barwienie według Grama.
• W przypadku bakterii gramoujemnych, przetestuj pod kątem oksydazy (dodatni dla N.
meningitidis, ujemny dla E.coli K1).
• W przypadku bakterii gramododatnich przeprowadź test katalazy. (Nie testuj
szczepów katalazo dodatnich).
Za pomocą tej techniki nie można zidentyfikować szczepów nie hermetyzowanych
S.pneumonia i Haemophilus influenzae.
a) Grupowanie : N. meningitides(tylko A, B, C), H. influenzae, E. coli, S. pneumoniae
• Umieść kroplę 30 µl sterylnego roztworu soli w dołku na płytce jednorazowego
użytku.
• Próbka:
- W przypadku Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzea i Escherichia coli,
odpowiednik pętli 1 µl to maks. 2 do 3 kolonii.
- W przypadku Streptococcus pneumoniae, odpowiednik pętli 5 µl, to minimum 10
do 12 kolonii.
• Ostrożnie zemulguj kolonie z próbki w sposób pozwalający na uzyskanie jednorodnej
zawiesiny.
7
•
•
•
•
•
Delikatnie wstrząśnij butelką z odczynnikiem lateksowym wybranym do identyfikacji;
przytrzymując butelkę pionowo, umieść jedną kroplę tego odczynnika lateksowego na
obrzeżach zawiesiny bakteryjnej.
Zmieszaj odczynnik lateksowy i zawiesinę za pomocą pręcika.
Obróć płytkę (~120 obr./min.).
Obserwuj pojawienie się wyraźnej aglutynacji przez okres około 2 minut,
Zatwierdź identyfikację gatunków za pomocą konwencjonalnego testu
biochemicznego.
b) Grupowanie: Steptococcus B (kolonie ß-haemolytic)
• Umieść 5 kolonii w bulionie bakteryjnym Todd Hewitt 2 ml.
• Inkubuj w kąpieli wodnej w temperaturze 37°C przez 2 do 3 godzin.
• Wiruj przez 5 minut w 3 000 g.
• Umieść jedną kroplę (40 do 50 µl) supernatantu w dołku na płytce jednorazowego
użytku.
• Delikatnie wstrząśnij butelką z odczynnikiem lateksowym; przytrzymując butelkę
pionowo, umieść jedną kroplę tego odczynnika lateksowego na obrzeżach
supernatantu.
• Zmieszaj odczynnik lateksowy i próbkę za pomocą pręcika.
• Obróć płytkę (~120 obr./min.).
• Obserwuj pojawianie się wyraźnej aglutynacji przez okres około 1 minuty.
• Zatwierdź identyfikację gatunków za pomocą konwencjonalnego testu
biochemicznego.
W celu bezpośredniego wydobywania z odizolowanych kolonii, użyj zestawu PASTOREXTM
STREP (kod 61721)
11- KONTROLA JAKOŚCI TESTU
Odczynniki lateksowe powinny być jednolite po zakończeniu wstrząsania.
Dodatnia kontrola wielowartościowa R10 jest używana do weryfikacji każdej
immunoreaktywności odczynnika lateksowego.
• W celu przeprowadzenia testu kontroli jakości, umieść kroplę (40 µl) kontroli dodatniej
(R10) w każdym dołku na płytce jednorazowego użytku.
• Delikatnie wstrząśnij butelkami z odczynnikiem lateksowym.
• Przytrzymując butelkę w pionie, umieść jedną kroplę każdego odczynnika
lateksowego na płytce jednorazowego użytku zgodnie ze wskazanym wzorem
rozprowadzenia: R9, R6, R7, R1 i R2 w białych dołkach i R8, R3, R4 i R5 w czarnych
dołkach.
• Zmieszaj odczynniki lateksowe i kontrolę dodatnią za pomocą pręcika, zmieniając
pręcik dla każdego odczynnika lateksowego.
• Obracaj płytkę z prędkością ~120 obr./min. przez 10 minut. W czasie tych 10 minut
obserwuj pod kątem pojawienia się aglutynacji (porównaj reakcje testowe lateksu z
tymi z kontroli ujemnych lateksu).
Intensywność aglutynacji i szybkość pojawienia się zależy od awidności
antygenu/przeciwciała. Reakcje obserwowane przy każdym teście lateksowym mogą
być różne. Te z NmB/Coli K1 są dokładniejsze od innych.
• Roztwór soli lub rozcieńczalnik (kod 61717) kontrolują nieobecność nieokreślonej
aglutynacji każdego testu lateksowego.
• Do przeprowadzenia tego testu kontroli jakości, używany jest roztwór soli
fizjologicznej lub rozcieńczalnik R11 (kod 61717) zgodnie z protokołem
wielowartościowej kontroli dodatniej (patrz poprzednia procedura).
8
•
Odczynniki lateksowe nie powinny być używane wtedy kiedy nie zlepiają się z
wielowartościową kontrolą dodatnią (R10) lub kiedy w nieokreślony sposób zlepiają
się z roztworem soli lub rozcieńczalnikiem (kod 61717) (może się zdarzyć z powodu
nieprawidłowych warunków przechowywania zestawu lub zanieczyszczenia
odczynnika lateksowego)
12- KONTROLA JAKOŚCI PRODUCENTA
Odczynniki zostały przygotowane zgodnie z naszym systemem jakości, poczynając od
materiałów wyjściowych, aż do ostatecznego produktu komercyjnego. Odczynniki każdej
serii podlegają oznaczeniu kontrolnemu i są dopuszczane do użytkowania, jeśli spełniają
wymagane kryteria.
Bio-Rad posiada protokoły produkcji i kontroli jakości każdej serii.
13- CHARAKTERYSTYKA TESTU
CZUŁOŚĆ
Czułość każdego z odczynników zestawu określano, badając:
•
Oczyszczony antygen rozpuszczony w soli
•
Próbki kliniczne płynu mózgowo-rdzeniowego, oznaczone jako dodatnie metodą
klasyczną (hodowla, preparat mikroskopowy)
•
Szczepy bakterii wyizolowane na podłożu agarowym
czekoladowy z PVS, Columbia z 5% krwią baranią.
Antygen lub bakterie
w próbce
Rozcieńczony
antygen
Mueller-Hinton,
PMR
agar
Szczepy
(NaCl 9 ‰)
Dolna granica
wykrywania
Liczba
badanych
próbek
Liczba
dodatnich
próbek
Liczba
badanych
próbek
Liczba
dodatnich
próbek
N.meningitidis gr.A
2.5 ng/ml
12
12
22
22
N.meningitidis gr. B
62.5 ng/ml
10
10
1
1
16
16
ND
E.coli K1
N.meningitidis gr.C
2.5 ng/ml
3
3
N.meningitidis gr.Y
5 ng/ml
ND
-
-
N.meningitidis gr.W
2.5 μg /ml
ND
-
-
S.pneumoniae
95 ng/ml
24
22
15
15
Streptococcus gr. B
20 ng/ml
1
1
15
15
H.influenzae typu B
0.1 ng/ml
34
33
17
17
9
SWOISTOŚĆ
Swoistość każdego z odczynników zestawu określano, badając:
•
Jałowy PMR (a) lub PMR zawierający bakterie wywołujące zapalenie opon
mózgowych oraz inne bakterie, nie wykrywane za pomocą odczynników lateksowych
(b).
•
Szczepy należące do gatunków: Neisseria, Branhamella, Moraxella, Acinetobacter,
Kingella, Streptococcus, Haemophilus, oznaczano za pomocą heterologicznych
odczynników lateksowych (c).
Latex test
Jałowy PMR (a)
Zanieczyszczony PMR
(b)
Liczba
badanych
próbek
Liczba
ujemnych
próbek
52
52
25
25
N.meningitidis gr.C
52
52
56
S.pneumoniae
60
60
Streptococcus gr. B
49
H.influenzae typu B
61
N.meningitidis gr. A
N.meningitidis gr. B
E.coli K1
Liczba
Liczba
ujemnych
Szczepy (c)
Liczba
badanych
próbek
Liczba
ujemnych
próbek
122
122
41
40*
56
127
127
39
39
33
33
49
58
58
17
17
61
32
32
31
31
-
-
badanych
próbek
próbek
50
50
ND
Losowo wybrany PMR
N.meningitidis gr.Y/W
Liczba badanych
próbek
Liczba ujemnych
40
40
próbek
* 1 Szczep Klebsiella pneumoniae dał reakcję niespecyficzną.
HODOWLA KRWI
W teście Pastorex™ Meningitis oznaczono 44 hodowle krwi. Uzyskano następujące wyniki:
•
Czułość: 100% (4/4; hodowle zawierały 2 szczepy S.pneumoniae, 2 szczepy
Streptococcus z grupy B).
•
Swoistość: 100% (37/37). Dla odczynników R3, R4, R5, R6, R7 i R8.
•
Swoistość: 98.2% (54*/55). Dla odczynnika R1. *Wśród 19 szczepów gronkowców
koagulazo-ujemnych, dla 1 szczepu uzyskano nie swoistą reakcję dodatnią; wynik nie
potwierdził się w badaniu próbki z hodowli na podłożu agarowym.
10
14- OGRANICZENIA METODY
•
Immunologiczna technika lateksowa w wielu wypadkach umożliwia wstępną
identyfikację patogenu. Jednakże możliwe jest, że stężenie antygenów w badanej
próbce jest niższe od progu detekcji dla lateksu i uzyskiwany jest wynik ujemny. W
takiej sytuacji przydanym jest powtórzenie badania po pewnym czasie.
•
Technika ta nie może zastępować hodowli bakteryjnej, która sama z siebie umożliwia
wykonanie oznaczenia lekowrażliwości.
•
Na rynku dostępnych jest wiele podłoży do hodowli krwi, czułość i swoistość
oznaczenia nie jest gwarantowana dla wszystkich z tych podłoży (punkt 7D).
•
Aktualnie dostępna jest jedynie niewielka liczba danych klinicznych i literaturowych
dotyczących identyfikacji antygenów w surowicy i moczu metodą lateksową.
•
Zidentyfikowano kilka nie spokrewnionych bakterii posiadających antygeny
identyczne z badanymi.
Możliwość reakcji krzyżowej powinna być zawsze
rozważona (1, 4, 5).
•
Wynik ostateczny, jak w przypadku każdego badania laboratoryjnego nie może być
wydany w oparciu o pojedynczy test, ale zawsze w zestawieniu z danymi klinicznymi i
wynikami badań biochemicznych, cytologicznych oraz immunologicznych.
•
Wykrycie antygenów rozpuszczalnych w hodowli krwi, tak samo jak wyniki oznaczeń
dla kolonii bakteryjnych izolowanych na podłożu agarowym, powinny być uzupełnione
identyfikację gatunku szczepu bakteryjnego.
15- LITERATURA
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
BRADSHAW M.W., CHNEERSON R., PARKE J.C. Jr., ROBBINS J.B. Bacterial
antigens cross-reactive with the capsular polysaccharide of Haemophilus
influenzae, type b. Lancet, 1971, i (May 29), 1095-1097
DENIS F. et MOUNIER M. Le diagnostic rapide des méningites cérébrospinales:
techniques, résultats, limites et perspectives. Méd. Mal. Infect.,1984, 14, 27-36
DENIS F., SAULNIER M. et CHIRON J.P. Diagnostic étiologique rapide des
méningites purulentes par agglutination passive indirecte de particules de latex et
par contre- immunoéléctrophorèse : expérience et perspectives. Bull. O.M.S.,
1981, 59, 143-151
KASPER D.L., WINKELHAKE J.L., ZOLLINGER W.D., BRANDT B.L., and
ARTENSTEIN M.S. Immunochemical similarity between polysaccharide antigens
of Escherichia coli 07:K1 (L) : NM and group B Neisseria meningitidis. J.
Immunol., 1973, 110, 262-268. 25
LEE P.C. and WETHERALL B.L. Cross-reaction between Streptococcus
pneumoniae and group C streptococcal latex reagent. J. Clin. Microbiol., 1987,
25, 152-153
LEINONEN M. and HERVA E. The latex agglutination test for the diagnosis of
meningococcal and Haemophilus influenzae meningitis. Scand. J. Infect.,1977,
9,187-191
LUND E. and HENRICHSEN J. Laboratory diagnosis, serology and epidemiology
of Streptococcus pneumoniae. In Methods in Microbiology, T. Bergan and J.R.
Norris edit., 1978, 12, chap. XI, 241-262 (Academic press, London, New-York,
San Francisco)
TESSIER F. Dépistage et identification des streptocoques du groupe B. Intérêt en
périnatologie. Extrait de LABORAMA n°14, oct. 1982, Institut Pasteur Production
edit.
11
9. NEWMAN R.B., STEVENS R.W. and GAAFAR H.A. Latex agglutination test for
the diagnosis of Haemophilus influenzae meningitis. J. Lab. Clin. Med., 1970, 76,
107-113
10. ROBBINS J.B., Mc CRACKEN G.H. Jr., GOTSCHLICH G.C., ORSKOV F.,
ORSKOV I., HANSON L.A. Escherichia coli K1 capsular polysaccharide
associated with neonatal meningitis. New Engl. J. Med. 1974, 290, 1216-1220
11. P. GESLIN et coll., Centre National de Référence des Pneumocoques: Rapport
d'activité 1997.
12. ASUNCIÓN FENOLL, ISABEL JADO, DOLORES VICIOSO, AMALIA PÉREZ,
and JULIO CASAL. Evolution of Streptococcus pneumoniae Serotypes and
Antibiotic Resistance in Spain : Update (1990 to 1996). J. Clin. Microbiol.,1998,
36, 3447-3454
Bio-Rad
3, boulevard Raymond Poincaré
92430 Marnes-la-Coquette France
Tel. : +33 (0) 1 47 95 60 00
Fax : +33 (0) 1 47 41 91 33
06/2008
881019
12