pochodne wanadu jako zwi¥zki o istotnym znaczeniu biologicznym
Transkrypt
pochodne wanadu jako zwi¥zki o istotnym znaczeniu biologicznym
POCHODNE II. WP£YW NA KOMÓRKI NOWOTWOROWE 377 POSTÊPY BIOLOGII WANADU...CZ. KOMÓRKI TOM 36 2009 NR 3 (377394) POCHODNE WANADU JAKO ZWI¥ZKI O ISTOTNYM ZNACZENIU BIOLOGICZNYM. CZÊÆ II. WP£YW NA KOMÓRKI NOWOTWOROWE VANADIUM DERIVATIVES AS COMPOUNDS OF HIGH BIOLOGICAL SIGNIFICANCE. PART II. EFFECT ON NEOPLASTIC CELLS Przemys³aw HOLKO, Anna Maria KORDOWIAK Zak³ad Biochemii Ogólnej,Wydzia³ Biochemii, Biofizyki i Biotechnologii, Uniwersytet Jagielloñski, Kraków Streszczenie: Pochodne wanadu, prócz oddzia³ywania na wzrost, rozwój i ró¿nicowanie niektórych gatunków oraz w³asnoci przeciwcukrzycowych, mog¹ równie¿ wp³ywaæ na komórki i indukowaæ ich apoptozê, proliferacjê czy transformacjê nowotworow¹. Dzia³anie to zale¿y od modelu dowiadczenia oraz jego warunków. Zwi¹zki wanadu mog¹ dzia³aæ promuj¹co lub hamuj¹co jako czynniki pro- lub antynowotworowe, tj. wywo³ywaæ wzrost lub hamowaæ prze¿ywalnoæ i proliferacjê komórek neoplastycznych. Dzia³aj¹ na komórki zwierzêce i ludzkie, wp³ywaj¹c jednak nie tylko na komórki nowotworowe, ale równie¿ prawid³owe. Wyniki te zosta³y potwierdzone przez licznych badaczy, jak równie¿ w naszych wstêpnych dowiadczeniach. S³owa kluczowe: zwi¹zki wanadu, komórki nowotworowe, dzia³anie pro- i antynowotworowe. Summary: In addition to their effect on growth, development and differentiation of certain species and antidiabetic activity, vanadium derivatives may also affect cells and induce apoptosis, proliferation or neoplastic transformation. The activity depends on the model of experiments and their conditions. Vanadium compounds may exert a promoting or inhibitory effect as pro- or anticarcinogenous factors, i.e. induce growth or inhibit viability and proliferation of neoplastic cells. These compounds act upon animal and human cells, but their effect involves not only tumor cells, but also normal cells. These results have been confirmed by numerous investigators, as well as in our preliminary experiments. Key words: Vanadium derivatives, cancer cells, pro- and anticarcinogenic activity. Wykaz skrótów: Ahr receptor grup arylowo wêglowodanowych; ARNT bia³ko transportuj¹ce do j¹dra receptor arylowo wêglowodanowy; Cdc25A fosfataza zaanga¿owana w podzia³y komórkowe; COX-2 cyklooksygenaza 2; DMH 1,2-dimetylohydrazyna; DSB pêkniêcia podwójnej nici DNA; ERKs kinazy regulowane sygna³em zewn¹trzkomórkowym; H2O2 nadtlenek wodoru; HIF czynnik aktywowany stanem hypoksji; IL-1 interleukina 1; iNOS indukowana syntaza tlenku azotu; MAPKs kinazy bia³kowe aktywowane mitogenami; Na3VO4 ortowanadan sodu [V(V)]; NaVO3 metawanadan sodu [V(IV)]; NFAT czynnik transkrypcyjny zaktywowanych limfocytów T; NH4VO3 metawanadan amonu [V(V)]; 378 P. HOLKO, A. M. KORDOWIAK PGH2 prostaglandyna H2; ROS reaktywne formy tlenu; Rb bia³ko retinoblastomy; TNF-a czynnik martwicy nowotworu a; [V(IV)] zwi¹zek wanadu na +4 stopniu utlenienia; [V(V)] zwi¹zek wanadu na +5 stopniu utlenienia; V2O4 tlenek wanadu IV; V2O5 tlenek wanadu V; VEGF naczyniowy ródb³onkowy czynnik wzrostu; VL-30 30-elementowy czynnik wirusopodobny; VOSO4 siarczan wanadylu. 1. WSTÊP W czêci I artyku³u dotycz¹cego biologicznej roli wanadu [28] przedstawiono na podstawie badañ innych autorów [14,26,36,48] wystêpowanie w przyrodzie tego pierwiastka, jego wa¿niejsze fizyko-chemiczne w³asnoci, wp³yw na rozwój i ró¿nicowanie osobników niektórych gatunków. Omówiono zwi¹zki wanadu wystêpuj¹ce u ssaków (w tym cz³owieka), ich transport w organizmie i mo¿liwoæ wzajemnych przekszta³ceñ wanadu V(IV) i V(V) [32,35]. Ponadto podkrelono mo¿liwoæ toksycznego dzia³ania tego pierwiastka, zw³aszcza w przypadku ekspozycji pracowników przemys³owych, jak równie¿ podawania jego zwi¹zków w celach dowiadczalnych oraz leczniczych. Omówiono skutecznoæ dzia³ania organicznych i nieorganicznych pochodnych wanadu w cukrzycy modelowej, wywo³ywanej u zwierz¹t w celach dowiadczalnych, a tak¿e podawanych jako lek w insulino-zale¿nej i insulinoniezale¿nej postaci cukrzycy pacjentom chorym na t¹ chorobê metaboliczn¹. Pierwsza próba takiego zastosowania soli wanadu u cukrzyków mia³a miejsce w ostatnim roku XIX wieku, zdobywanie informacji dotycz¹cych tego zagadnienia trwa³o nieprzerwanie w ci¹gu XX wieku i nadal s¹ wykonywane dowiadczenia, które pozwol¹ precyzyjnie poznaæ mechanizm normalizuj¹cego dzia³ania pochodnych tego pierwiastka na kliniczne objawy cukrzycy. Mechanizm ten nadal nie jest do koñca jest okrelony [1,26,33,47,48]. W drugiej po³owie XX wieku okaza³o siê, ¿e zwi¹zki wanadu równie¿ dzia³aj¹ na komórki nowotworowe oraz prawid³owe i mog¹ promowaæ lub hamowaæ proces nowotworzenia. Nieuregulowany proces apoptozy jest wa¿nym czynnikiem w wielu schorzeniach, np. zatruciach w¹troby, niedokrwistoci, szoku, chorobie serca, nowotworach, AIDS, autoagresji czy chorobach degeneracyjnych uk³adu nerwowego. T³umienie apoptozy przez czynniki promuj¹ce nowotworzenie w preneoplastycznych komórkach jest istotne dla kancerogenezy Pierwsze dane o chemoprotekcyjnych w³asnociach wanadu (jako VOSO4) wobec nowotworu piersi wywo³anego przez metylo-1-nitrozomocznik u szczurów ukaza³y siê w 1984 r. [wg 40]. Podanie zwierzêtom w p³ynie do picia VOSO4 w stê¿eniu 25 mg/l doprowadzi³o do redukcji liczby guzów. Dzia³anie zwi¹zków wanadu na cykl ¿ycia komórek jest znacznie s³abiej poznane ni¿ w przypadku dzia³ania pochodnych wanadu w cukrzycy i tematowi temu powiêcono poni¿sze opracowanie. 2. WP£YW WANADU NA KOMÓRKI NOWOTWOROWE Jak wspomniano we wstêpie, zwi¹zki wanadu prócz roli w rozwoju i ró¿nicowaniu niektórych gatunków oraz dzia³ania przeciwcukrzycowego, oddzia³uj¹ na komórki POCHODNE WANADU...CZ. II. WP£YW NA KOMÓRKI NOWOTWOROWE 379 RYCINA 1. Odpowied komórek na dzia³anie zwi¹zków wanadu mechanizm dzia³ania bezporedniego oraz/lub poprzez generowanie reaktywnych form tlenu ROS (schemat opracowano na podstawie cytowanego pimiennictwa): TFs czynniki transkrypcyjne; MAPK kinazy aktywowane mitogenami; CDC25 fosfataza zaanga¿owana w podzia³y komórkowe; ERKs kinazy regulowane sygna³em zewn¹trzkomórkowym; p38 bia³ko 38; PI-3K 3-kinaza fosfatydyloinozytoli FIGURE 1. Answer of cell on vanadium compounds (direct action or/and through reactive oxygen size ROS generation): TFs transcription factors; MAPK mitogen activated protein kinases; CDC25 cell division cycle 25 homolog, ERKs Extracellular Regulated Kinase, PI-3K 3-phosphatidylinositol kinase. The scheme was elaborated from data cited in original papers by many authors (not shown in references of this abstract) 380 P. HOLKO, A. M. KORDOWIAK nowotworowe. W zale¿noci od badanego modelu, ró¿ni autorzy uzyskiwali czêsto przeciwstawne wyniki, poniewa¿ w ich dowiadczeniach pochodne wanadu mog¹ dzia³aæ promuj¹co lub hamuj¹co na proliferacjê i prze¿ywalnoæ komórek. Zale¿y to od kilku czynników, które starano siê przedstawiæ na podstawie pimiennictwa oraz w³asnych wstêpnych dowiadczeñ. Schemat dzia³ania wanadu w komórce przedstawiono na rycinie 1. 2.1. Dzia³anie kancerogenne wanadu Wanad, w pewnych warunkach dowiadczalnych mo¿e mieæ dzia³anie kancerogenne [2,3,12,13,20,22,31,37,43,44,49,51,53,54]. Szczególn¹ uwagê nale¿y zwróciæ na dzia³anie wanadu u pracowników ró¿nych ga³êzi przemys³u (petrochemiczny, stalowy, górniczy, czy chemiczny), nara¿onych na kontakt z ró¿nymi zwi¹zkami tego pierwiastka. Badania epidemiologiczne wykaza³y korelacjê miêdzy ekspozycj¹ pracowników na wanad a czêstoci¹ wystêpowania u nich nowotworu p³uc [2,3,12,50]. Wspomniano o tym w pierwszej czêci naszego opracowania [28]. Niniejszy artyku³ dotyczyæ bêdzie wy³¹cznie dzia³ania pro- i antynowotworowego w warunkach dowiadczalnych. Dzia³anie pochodnych wanadu na komórki prawid³owe oraz neoplastyczne zale¿y, jak siê wydaje, od rodzaju tych komórek, rodzaju u¿ytego w dowiadczeniu zwi¹zku wanadu, czasu ekspozycji na ten pierwiastek oraz od jego stê¿enia. Cortizo i wsp. [13] badali dwie linie osteoblastów szczurzych: nowotworow¹ UMR106 oraz nienowotworow¹ MC3T3E1. Stwierdzili stymulacjê wzrostu i dzia³anie antyapoptotyczne w osteoblastach szczurzych przez kompleks wanadu(IV) z askorbinianem w niskim stê¿eniu (<25 µM). W wy¿szych stê¿eniach (50100 µM) badany kompleks hamowa³ proliferacjê komórek oraz obni¿a³ aktywnoæ fosfatazy zasadowej, a zatem by³ cytotoksyczny dla osteoblastów w hodowli i efektywnie wzmaga³ apoptozê, dzia³aj¹c przeciwnowotworowo w badanych warunkach. Podobny efekt wykazano dla zwi¹zków wanadu z maltolem, aspiryn¹ czy trehaloz¹. Autorzy sugeruj¹, ¿e dzia³anie wanadu polega na zdolnoci do stymulowania fosforylacji reszt tyrozynowych w bia³kach poprzez hamowanie bia³kowych fosfataz tyrozynowych. Postulowany jest równie¿ wp³yw na kinazy bia³kowe stymulowane mitogenem (MAPK), przede wszystkim kinazy regulowane przez sygna³ zewn¹trzkomórkowy (ERK). Ferrer i wsp. [19] testowali na tych samych dwu liniach komórkowych wp³yw kompleksu V(IV)/kwercetyna i wykazali podobne do kwercetyny dzia³anie na komórki prawid³owe i nowotworowe. Noutsopoulos i wsp. [37] poddawali komórki NIH3T3 dzia³aniu siarczanu wanadylu uzyskuj¹c wzrost poziomu retrotranspozycji 30-elementowego wirusopodobnego czynnika VL-30 (znanego czynnika mutagennoci). Poziom zmian by³ zale¿ny od czasu trwania dowiadczenia i stê¿enia u¿ytego zwi¹zku. W badaniu stwierdzono, ¿e najbardziej aktywny w potencjalnym dzia³aniu kancerogennym by³ V(IV). Wed³ug roboczej teorii autorów aktywacja retrotranspozycji VL-30 odbywa³aby siê poprzez stres oksydacyjny zwi¹zany ze zwiêkszon¹ produkcj¹ H2O2. Jest to prawdopodobnie mechanizm uszkodzeñ DNA prowadz¹cy do mutagenezy, niezale¿ny od uszkodzeñ podwójnej nici DNA, tak zwanych DSB (ang. Double Strain Breaks). POCHODNE WANADU...CZ. II. WP£YW NA KOMÓRKI NOWOTWOROWE 381 Natomiast Valko i wsp. [53] postuluj¹ dzia³anie metali, w tym wanadu, jako pewnego rodzaju katalizatora w produkcji wolnych rodników, które mo¿e w konsekwencji prowadziæ do uszkodzeñ DNA w komórkach prawid³owych i w efekcie wywo³aæ proces nowotworzenia. Z kolei badania Fritza i wsp. [20], dotycz¹ce szczurzej prostaty wykaza³y, ¿e organizm mo¿e mieæ pewne mechanizmy obronne przeciwdzia³aj¹ce potencjalnemu, proonkogennemu dzia³aniu pochodnych wanadu. Autorzy ci wykazali, ¿e wanad mo¿e zwiêkszaæ iloæ cz¹steczek naczyniowego ródb³onkowego czynnika wzrostu (VEGF) Zale¿noæ ta ma charakter liniowy pomiêdzy iloci¹ podawanego wanadu a poziomem wytworzonego VEGF. Dzia³anie takie mo¿e byæ uznane za niekorzystne dla organizmu, poniewa¿ zwiêkszone iloci VEGF mog¹ indukowaæ neowaskularyzacjê rosn¹cego nowotworu. Okaza³o siê, ¿e szczep szczurów maj¹cy bia³ko Ahr, które jest receptorem grup arylowo-wêglowodanowych, (ang. Aryl hydrocarbon receptor) wykazywa³ istotny statystycznie mniejszy wzrost guzów nowotworowych ni¿ szczep szczurów bez obecnoci analizowanego receptora. Proponowany mechanizm dzia³ania badanego bia³ka polega na jego po³¹czeniu (lub innej nieznanej jeszcze interakcji) z bia³kiem ARNT, transportuj¹cym receptor Ahr do j¹dra (ang. Aryl Hydrocarbon Receptor Nuclear Translocator). W normalnych warunkach w rozrastaj¹cym siê guzie raka szczurzej prostaty, bia³ko ARNT, jeden z wielu czynników transkrypcyjnych, dimeryzuje z czynnikiem indukowanym HIF 1 alfa (ang. Hypoxia inducible factor 1 alpha), wskutek czego nastêpuje równie¿ zwiêkszona ekspresja VEGF. Bia³ko Ahr poprzez po³¹czenie z ARNT blokuje powstawanie dimerów ARNT/HIF 1a, wskutek czego nie nastêpuje ekspresja i wzrost stê¿enia VEGF w pobli¿u guza i zostaje utrudniona lub uniemo¿liwiona waskularyzacja rosn¹cego nowotworu. Wykazano, ¿e w szczepie szczurów z zablokowanymi obydwoma allelami genu, odpowiedzialnego za wytworzenie bia³ka Ahr(-/-), poziom VEGF jest znacznie wy¿szy, a wiêc tworzenie nowych naczyñ krwiononych w guzie jest du¿o ³atwiejsze [20]. Rodriguez-Mercado i wsp. [44] wykazali cytotoksyczny i cytostatyczny wp³yw V2O4 na hodowle limfocytów i leukocytów ludzkich. Podczas gdy mitogenne dzia³anie wanadu na komórki dro¿d¿y by³o znane z pimiennictwa, jego wp³yw na komórki ssaków nie by³ oczywisty. W badaniach in vivo i in vitro V2O4 pogarsza wymianê miêdzy siostrzanymi chromatydami i strukturalne aberracje chromosomów. Powoduje wzrost czêstoci pojawiania siê mikroj¹der i komórek poliploidalnych, zmniejszenie indeksu mitotycznego oraz indukuje pêkniêcia w pojedynczych niciach DNA, podobnie jak krzy¿owe wi¹zania DNA-bia³ko. Autorzy ci potwierdzili w swej pracy wnioski innych badaczy i stwierdzili, ¿e V2O4 generuje tlen reaktywny, co mo¿e mieæ znacz¹c¹ rolê w toksycznym dzia³aniu tego pierwiastka i indukowaniu aberracji chromosomowych. Uszkodzenia DNA w zdrowych komórkach cz³owieka, które mog¹ potencjalnie zapocz¹tkowaæ procesy mutagenne i kancerogenne, s¹ powi¹zane z dzia³aniem telomerazy. W badaniach. Glaviano i wsp. [22] wykazano, ¿e dzia³anie wanadu na +5 stopniu utlenienia [V(V)] na prawid³owe ludzkie fibroblasty powoduje uszkodzenia DNA w postaci aneuplidii, ale bez powstania powa¿nych uszkodzeñ wewn¹trz 382 P. HOLKO, A. M. KORDOWIAK chromosomów. Dzia³anie genotoksyczne wanadu wi¹za³o siê tak¿e z tworzeniem chromosomów dicentrycznych, mostków nukleoplazmowych oraz du¿ych uszkodzeñ chromosomów, na skutek których powstaj¹ tzw. twory mikroj¹drowe. W strukturach tych czêæ chromosomu zostaje trwale ob³oniona i funkcjonuje w komórce jak dodatkowe j¹dro. Stwierdzono, ¿e takie uszkodzenia s¹ trwa³e, gdy¿ by³y wykrywane nawet po 30 dniach od podania badanego zwi¹zku i nie s¹ do koñca w sposób skuteczny naprawiane. Dzia³anie genotoksyczne wanadu by³o czêciowo kontrolowane i redukowane w komórkach fibroblastów z aktywn¹ telomeraz¹. Ponadto stwierdzono, ¿e uszkodzenia genomu zwi¹zane z dzia³aniem wanadu s¹ zró¿nicowane, w zale¿noci od sposobu hodowli komórek (w postaci kolonii rosn¹cej w pó³p³ynnym agarze lub trwale przyczepionej do p³ytki) [22]. Wozniak i B³asiak [55] badaj¹c prawid³owe limfocyty ludzkie i komórki nowotworowe HeLa, stwierdzili genotoksycznoæ siarczanu wanadylu (VOSO4) zarówno wobec nowotworowych (w stê¿eniu 0,051 mM), jak i nienowotworowych (w stê¿eniach 0,1; 0,5 i 1,0 mM) komórek. VOSO4 powodowa³ fragmentacjê DNA, pêkniêcia pojedynczych i podwójnych ³añcuchów oraz oksydacyjne modyfikacje, przy czym dzia³anie wobec komórek HeLa by³o znacznie silniejsze. Witaminy A, C i E znacznie wzmagaj¹ ten proces. Nale¿y zaznaczyæ, ¿e naprawa uszkodzeñ DNA jest równie¿ bardziej efektywna w komórkach nowotworowych ni¿ w badanych limfocytach. Autorzy stwierdzili utlenianie puryn pod wp³ywem VOSO4 i przypisuj¹ jego genotoksyczne dzia³anie stresowi oksydacyjnemu, generuj¹cemu aniony nadtlenkowe przez aktywacjê bia³ka p38 nale¿¹cego do kinaz MAPK. Leopardi i wsp. [31] stwierdzili statystycznie istotny wzrost mikroj¹der w szpiku kostnym samców myszy CD-1, którym podawano w wodzie do picia 0,751500 mg/l Na3VO4 przez 5 tygodni. Autorzy wskazuj¹, ¿e zwi¹zki V(V) wywieraj¹ efekt genotoksyczny w badaniach in vivo w stosunkowo du¿ych dawkach. Ress i wsp. [43] opisali poprzednio wzrost iloci powstawania guzów w uk³adzie oddechowym myszy i szczurów eksponowanych na oddychanie powietrzem z piêciotlenkiem wanadu (V2O5), wskutek czego tê pochodn¹ wanadu zakwalifikowano jako potencjalnie kancerogenn¹ dla ludzi. Dalsze badania Villani i wsp. [54] dotyczy³y weryfikacji dzia³ania V(IV), wykazuj¹cego kilka genotoksycznych efektów w dowiadczeniach in vitro, w przeciwieñstwie do dzia³ania in vivo, ocenionego w badaniach tego samego szczepu myszy, tj. samców CD-1, którym dodawano w wodzie do picia 21000 mg/l siarczan wanadylu w ci¹gu 5 tygodni. Badano g³ównie retikulocyty krwi i erytrocyty szpiku kostnego oraz po zabiciu zwierz¹t analizowano tkanki somatyczne i generatywne. W przypadku tej pochodnej wanadu nie stwierdzono jak poprzednio [31] podobnego do V(V) dzia³ania genotoksycznego ani w przypadku komórek szpiku, ani j¹der. Zaobserwowano natomiast indukcjê mikroj¹der w retikulocytach. Badania wykonane w pracowniach chiñskich [12,50] podkrelaj¹ rolê wp³ywu pochodnych wanadu na cyklooksygenazê-2 (COX-2) i t¹ drog¹ pro- lub antyapoptotyczne dzia³anie, a zatem w tym drugim przypadku promuj¹ kancerogenezê. Tang i wsp. [50] w badaniach linii ludzkich komórek nab³onkowych oskrzeli (Beas-2B) wykazali antyapoptotyczne dzia³anie piêciotlenku wanadu, który dzia³a³ przez aktywacjê POCHODNE WANADU...CZ. II. WP£YW NA KOMÓRKI NOWOTWOROWE 383 NFAT, czyli czynnika j¹drowego aktywuj¹cego komórki T oraz cyklooksygenazê-2 (COX-2). Enzym ten katalizuje przekszta³cenie kwasu arachidonowego na prostaglandynê H2 (PGH2), która z kolei jest substratem dla ca³ej kaskady syntezy prostaglandyn. W wiêkszoci prawid³owych tkanek nie wykazano aktywnoci izoenzymu COX-2. Jego aktywnoæ przejawia siê w stanach niedokrwis-toci, kancerogenezie, np. guzach jelita, trzustki, p³uc, g³owy oraz innych procesach chorobowych. COX-2 odpowiada za powstawanie bardzo aktywnych biologicznie zwi¹zków, wystêpuj¹cych w ró¿nych jednostkach chorobowych, miêdzy innymi w pierwotnym gruczolakoraku p³uc u ludzi. Autorzy ci wykazali, ¿e piêciotlenek wanadu indukuje aktywnoæ COX-2 w ludzkich komórkach nab³onkowych oskrzeli w sposób zale¿ny od czasu i dawki. Maksymalny efekt proporcjonalny w zakresie stê¿eñ do 400 mM wanadu uzyskali po 24 godz. Na podstawie wyników w³asnych oraz innych badaczy, Tang i wsp. [50] podkrelaj¹, ¿e efekt dzia³ania wanadu przez indukcjê COX-2 zale¿y od typu komórek, a wiêc mo¿e wykazywaæ anty- lub proapoptotyczne dzia³anie. Chien i wsp. [12] podkrelaj¹ rolê wanadu w syntezie cytokin (IL-1, TNF-a) czy PGE2 i sugeruj¹, ¿e przekazywanie sygna³u przez receptor EGF, p38 i MAPK mo¿e byæ istotne dla indukcji COX-2 w ludzkiej linii komórek nowotworowych p³uc (A549). Autorzy ci, u¿ywaj¹c swoistych inhibitorów udowadniaj¹ istnienie dwóch dróg dzia³ania Na3VO4: jedna prowadzi do aktywacji COX-2 przez receptor epidermalnego czynnika wzrostu (EGFR) i bia³ka p38, druga za przez aktywacjê kinaz ró¿nych od MAPK do ekspresji ERKs, czyli kinaz regulowanych czynnikami pozakomórkowymi. Pierwsza droga przewa¿a w dzia³aniu wanadanu na liniê A549. Suzuki i wsp. [49] badaj¹c t¹ sam¹ liniê komórkow¹, stwierdzili po ekspozycji na NaVO3, wzrost fosforylacji Ser15 bia³ka p53 oraz wzrost jego iloci, w sposób zale¿ny od czasu (848 godz.) oraz dawki (10200 mM). Podobny efekt obserwowano po dzia³aniu NH4VO3 lub Na3VO4. Inne reszty serynowe bia³ka p53 w pozycjach 6, 9, 20, 37, 46 i 392 ulega³y tylko nieznacznej fosforylacji lub nie wykazano jej wcale, co zdaniem autorów wiadczy o unikatowej roli reszty seryny w pozycji 15 w nagromadzaniu tego bia³ka w komórkach linii A549. Taniguchi i wsp. [51] stwierdzili aktywacjê przez ortowanadan równie¿ cytozolowej fosfolipazy A2a w linii L929 fibroblastów mysich. Prowadzi to do uwalniania arachidonianu z fosfolipidów i szlaku aktywacji ERKs przez Src i kinazy bia³kowe C nale¿¹ce do rodziny kinaz Ser/Thr. Podobny efekt uwalniania przez Na3VO4 arachidonianu i stymulacji syntezy prostaglandyn stwierdzi³ poprzednio ten sam zespó³ w szczurzych liniach neuronów PC12 i GH3 oraz inni autorzy w szczurzych komórkach tarczycy FRTL-5 i mysich makrofagach RAW. 2.2. Dzia³anie przeciwnowotworowe wanadu Wiele pochodnych wanadu zosta³o przebadane jako potencjalne zwi¹zki mog¹ce oddzia³ywaæ na prawid³owe komórki zarówno Pro- i Eukaryota, jak i nowotworowe komórki zwierzêce i ludzkie [16,17,29,30,39,46,55]. Proponowane mechanizmy oddzia³ywania ró¿nych zwi¹zków wanadu na te komórki nowotworowe przedstawiono w dalszej czêci artyku³u. 384 P. HOLKO, A. M. KORDOWIAK 2.2.1. Dzia³anie zwi¹zków wanadu w modelach zwierzêcych Antyproliferacyjne dzia³anie ró¿nych zwi¹zków wanadu na komórki nowotworowe zarówno zwierzêce, jak i ludzkie potwierdzi³y dowiadczenia wykonane w wielu zespo³ach badawczych [411,1619,2025,2729,34,3642,45,46,52,55,56]. Chakraborty i wsp. [10], a w³aciwie zespó³ kierowany przez Chatterjee [5,6,810,25,41,45] cytuj¹ na podstawie literatury oraz badañ w³asnych, efektywnoæ dzia³ania wanadu wobec leukemii mysiej, guzów Ehrlicha, mysiego gruczolakoraku piersi, ludzkiej linii nowotworowych komórek epidermoidalnych HEP-2 oraz ludzkich, nowotworowych linii p³uc, piersi i ¿o³¹dkowo-jelitowych. W badaniach tych badaczy wykazano skutecznoæ zwi¹zków wanadu w przeciwdzia³aniu ró¿nym nowotworom wywo³ywanym sztucznie u zwierz¹t. Dalsze badania w tym zespole w XXI wieku wykaza³y cytoprotekcyjne w³asnoci wanadu wobec nowotworów indukowanych przez inne kancerogeny, np. 7,12-dimetylobenzantracen (DMBA) czy dietylonitrozoaminê, i powstaj¹cych w innych organach, np. w w¹trobie [5,6,810,25,41,45]. Szczegó³y podano w tabeli 1. Autorzy uwa¿aj¹, ¿e przeciwnowotworowe dzia³anie wanadu polega na indukcji i/lub regulacji aktywnoci enzymów w¹trobowych, hamowaniu aktywnoci g-glutamylotranspeptydazy i ³o¿yskowej S-transferazy glutationu. Ray i wsp. [39] podaj¹c szczurom V(V) w postaci wodnego roztworu metawanadanu amonu, w stê¿eniu 0,5 ppm (ang. parts per milion iloæ cz¹steczek danego zwi¹zku lub pierwiastka na milion cz¹steczek), uzyskali istotne statystycznie zmniejszenie iloci powsta³ych skupisk komórek nowotworowych, ni¿sz¹ czêstoæ powstawania przerzutów oraz mniejsz¹ wielkoæ guzów w porównaniu z grup¹ szczurów, które nie otrzymywa³y zwi¹zku wanadu [39]. Scrivens i wsp. [46] wykazali przeciwnowotworowe dzia³anie bisperoksowanadu badaj¹c myszy z rozwiniêtym modelem nowotworu raka sutka. Podobne antynowotworowe dzia³anie na wczesny etap rozwoju raka sutka wykazano u szczurów szczepu Sprague-Dawley, które traktowano 7,12-dimetylobenz-a-antracenem w celu wywo³ania nowotworu. Monowanadanu amonu, powodowa³ istotne statystycznie zmniejszenie iloci powsta³ych guzów oraz redukcjê ich wielkoci. Badany zwi¹zek powodowa³ fragmentacjê DNA komórek nowotworowych w guzie, co prowadzi³o do zwiêkszenia czêstoci wystêpowania procesu programowanej mierci komórki, czyli apoptozy [42]. Wykazano, ¿e siarczan wanadylu wykazuje antynowotworow¹ aktywnoæ wobec leukemii mysiej L-1210, dzia³a antyneoplastycznie w guzach w¹troby szczura, guzach Ehrlicha i gruczolakoraku mysiego TA3Ha [36,45]. Dzia³anie przeciwnowo-tworowe wanadu zosta³o wykazane w modelu szczurzego guza jelita grubego i okrê¿nicy [45]. Podawanie szczurom zwi¹zku wanadu w stê¿eniu 4,27 mM by³o statystycznie skuteczne w zahamowaniu rozwoju guza wywo³anego podaniem 1,2-dimetylohydrazyny (DMH), zwi¹zku powoduj¹cego tworzenie w reakcji z guanin¹ O-6-metyloguaniny, odpowiedzialnej za efekt mutagenny w komórkach szczurzego jelita grubego. Suplementacja szczurów wanadem powodowa³a zmniejszenie iloci tej pochodnej guaniny. Autorzy sugeruj¹, ¿e zmniejszenie powsta³ych iloci mutacji w komórkach, mo¿e daæ korzystny efekt w postaci zdolnoci komórek do wejcia na no wo twó r w¹ tr o b y szc zuró w 2 - a c e tyla mino fluo re n [ 2 - AAF ] / 0 , 0 5 % p o k a rmu d ie tylo nitro zo a mina [DEN ] / 2 0 0 mg/k g ma sy c ia ³a 1 , 2 - d ime tylo hyd ra zyna no wo twó r [ 1 , 2 - DM H] / je lita 2 0 mg/k g ma sy c ia ³a szc zuró w Me ta wa na d a n a mo nu N H4VO 3 N H4VO 3 Me ta wa na d a n a mo nu N H4VO 3 2 5 3 5 0 mM N H4VO 3 p rze z 4 8 go d z 9 25 41 Lite ra tura 40 S a mc e S p ra gue - Da wle y z ind uk o wa n¹ d o o trze wno wymi za strzyk a mi 1 , 2 - DMH p rze z 1 6 45 tygo d ni k a nc e ro ge ne z¹ je lit. P o wsta j¹ c a O 6- me tylo gua nina (O 6- Me G) je st g³ó wnym c zynnik ie m p ro k a nc e ro ge nnym i muta ge nnym. W tk a nk a c h no wo two ro wyc h ina k tywa c ja b ia ³k a p 5 3 o ra z ind uk o wa na synta za tle nk u a zo tu (iN O S ) s¹ je d nym z g³ó wnyc h c zynnik ó w a ntya p o p to tyc znyc h, p ro muj¹ c yc h ro zwó j guzó w je lita . P ³yn d o p ic ia za wie ra j¹ c y 4 , 2 7 m mo l/L N H4VO 3 p o wo d uje ha mo wa nie te go p ro c e su w 7 0 %, zmnie jsza wystê p o wa nie guzó w i re d uk uje ic h p o wie la nie , b e z wid o c znyc h e fe k tó w to k syc znyc h. d zia ³a nie wa na d u p o le ga na o gra nic ze niu two rze nia (O 6- Me G) i re gula c jê a k tywno c i iN O S , p 5 3 i a p o p to zy S a mc e S p ra gue - Da wle y z ind uk o wa n¹ p o je d ync zym, d o o trze wno wym za strzyk ie m DEN 6,8,10 p o wo d uje mo d yfik a c jê za sa d DN A, p ê k a nie nic i i je st d o b rym mo d e le m b a d a ñ sta nó w p rze d no wo two ro wyc h o ra z me c ha nizmó w wzro stu, ró ¿nic o wa nia i mie rc i k o mó re k . Auto rzy wyk a za li w DN A zmo d yfik o wa n¹ za sa d ê , tj. 8 - hyd ro k sy- 2 ,- d e zo k sygua nid ynê (8 - O Hd G), k tó ra za k ³ó c a me c ha nizm na p ra wc zy DN A i p ro wa d zi d o uszk o d ze ñ, np . p ê k niê æ nic i DN A. Wa na d re d uk uje p o wsta wa nie te j nie p ra wid ³o we j p o c ho d ne j. Auto rzy stwie rd za j¹ e fe k tywno æ d zia ³a nia wa na d u ró wnie ¿ wo b e c le uk e mii mysie j, guzó w Ehrlic ha , mysie j a d e no k a rc yno my p ie rsi, He p - 2 lud zk ie j linii no wo two ro wyc h k o mó re k e p id e rmo id a lnyc h o ra z lud zk ic h no wo two ro wyc h linii p ³uc , p ie rsi i ¿o ³¹ d k o wo - je lito wyc h Wa na d w stê ¿e niu 4 , 2 7 m mo l/L p o d a wa ny w p ³ynie d o p ic ia w zró ¿nic o wa ny sp o só b w k ilk u grup a c h d o 2 0 tygo d ni. O gra nic za p ro life ra c jê k o mó re k o ra z re d uk uje a b e rra c je c hro mo so mo we p o wsta j¹ c e w wynik u d zia ³a nia k a nc e ro ge nu MC F 7 linia P o d a nie N H4VO 3 d o me d ium k o mó re k MC F 7 p o wo d uje a p o p to zê . Da wk a nie to k syc zna , wg no wo two ru a uto ró w d o 2 5 0 m M, o d p o wia d a d zie nne j d a wc e 1 9 5 m g u lud zi. Re a k tywne fo rmy tle nu p ie rsi u (RO S ) ge ne ro wa ne p rze z wa na d a k tywuj¹ b ia ³k o p 5 3 i uszk a d za j¹ mito c ho nd ria , c o p ro wa d zi lud zi d o a p o p to zy. METVAN [b is (4 , 7 - d ime tyl- 1 , 1 0 - fe na ntro lino )sulfa to o k so wa na d (I V)] ind uk uje a p o p to zê w k o mó rk a c h le uk e mic znyc h p a c je ntó w. Ap o p to zê wzma ga d o d a tk o wo ha mo wa nie k o mó rk o we j k ina zy tyro zyno we j no wo twó r w¹ tr o b y szc zuró w ra k je lita 1 , 2 - DMH d zia ³a p rze z ge ne ra c jê wo lnyc h ro d nik ó w i o b ni¿a a k tywno æ tra nsfe ra zy gluta tio nu u szc zuró w o ra z c yto c hro mu P - 4 5 0 . Wa na d w nie to k syc zne j d a wc e 4 , 2 7 m mo l/L, c hro ni p rze d uszk o d ze nia mi, d zia ³a j¹ c a ntyk a nc e ro ge nnie . Do k ³a d ny me c ha nizm d zia ³a nia wyma ga d a lszyc h b a d a ñ 1 , 2 - d ime tylo hyd ra zyna [ 1 , 2 - DM H] / 2 0 mg/k g ma sy c ia ³a Me ta wa na d a n a mo nu N H4VO 3 S a mic e szc zuró w S p ra gue - Da wle y. N o wo twó r ind uk o wa ny je d no ra zo w¹ inie k c j¹ k a nc e ro ge nu d o ¿y³y d o o go no we j. Mo no wa na d a n a mo nu w stê ¿. 4 , 2 7 m mo l/L p o d a ny ja k o p ³yn d o p ic ia . Wa na d wp ³ywa na p re ne o p la styc zne sta d ium k o mó re k i p ro gra mo wa n¹ mie ræ k o mó re k (a p o p to zê ) p rze z re gula c jê b ia ³k a p 5 3 i/lub ha mo wa nie fo sfa ta zy tyro zyno we j ra k p ie rsi u szc zuró w 7 , 1 2 d ime tylo b e nzo a ntra c e n [DMBA] / 0 , 5 mg/1 0 0 g ma sy c ia ³a Uwa gi Me ta wa na d a n a mo nu N H4VO 3 Ro d za j no wo two ru K a nc e ro ge n/d a wk a Zwi¹ ze k wa na d u TABELA 1 P rzyk ³a d y d zia ³a nia me ta wa na d a nu a mo nu na nie k tó re no wo two ry ind uk o wa ne u szc zuró w lub na lud zk ¹ liniê k o mó re k no wo two ro wyc h MC F 7 POCHODNE WANADU...CZ. II. WP£YW NA KOMÓRKI NOWOTWOROWE 385 386 P. HOLKO, A. M. KORDOWIAK drogê apoptozy, co w efekcie nie doprowadza³o do rozwoju nowego guza [45]. Mechanizm dzia³ania wanadu nie jest do koñca poznany, jednak wykazano, ¿e zwi¹zek ten powoduje wzrost tak zwanego indeksu apoptotycznego w komórkach nowotworowych (tj. odsetka komórek, które wesz³y na drogê apoptozy). Ponadto wykazano, ¿e badana pochodna wanadu mo¿e w jaki sposób przyczyniaæ siê do zwiêkszenia ekspresji bia³ka p53, które jest odpowiedzialne za kontrolê spójnoci DNA w komórkach, a w razie pêkniêtych nici lub zaistnia³ych mutacji w DNA, bia³ko to jest skutecznym induktorem komórkowej apoptozy. Innym dzia³aniem ochronnym wanadu by³o zmniejszenie ekspresji syntazy tlenku azotu (iNOS), co przyczynia siê do zmniejszenia uszkodzeñ genotoksycznych i kancerogenezy mediowanej przez tlenek azotu oraz pochodne w postaci wytworzonych wolnych rodników [45]. W innych badaniach [5,7] wykazano, ¿e podawanie metawanadanu amonu szczurom Sprague-Dawley z rozwiniêtym sztucznie (po chronicznym podawaniu 2-acetyloaminofluoru) nowotworem w¹troby, powodowa³o istotne statystycznie zmniejszenie iloci guzów i ich wielkoci. Dodawanie do pokarmu tej pochodnej wanadu, skutkowa³o zmniejszeniem wielkoci i wagi w¹troby oraz powodowa³o przywrócenie jej normalnego funkcjonowania. Funkcje w¹troby by³y monitorowane przez oznaczanie aktywnoci enzymów: w¹trobowej transferazy difosforan urydyny:glukuronozyl oraz dehydrogenazy glukozowej. Stosowanie wanadu zmniejsza³o ponadto uszkodzenia DNA, wykrywanego za pomoc¹ metody elektroforezy kometowej w komórkach szczurzej w¹troby potencjalnie nara¿onych na transformacjê nowotworow¹ [7]. Obecnie próbuje siê chemicznie syntetyzowaæ pochodne wanadu z innymi zwi¹zkami o dzia³aniu przeciwnowotworowym i bada siê takie kompleksy zarówno na modelach zwierzêcych, jak i ludzkich. Przebadano zsyntetyzowany kompleks wanadu (III) z kurkumin¹ (flawonoidem znanym z antynowotworowych w³aciwoci). Obserwowano antyproliferacyjne w³aciwoci kompleksu na komórki mysiej bia³aczki. Zwi¹zek kompleksowy by³ ponad dwukrotnie bardziej skuteczny w oddzia³ywaniu na komórki nowotworowe ni¿ sama kurkumina [52]. W modelowych uk³adach zwierzêcych próbuje siê tak¿e stosowaæ wanad i jego pochodne jako element suplementacyjny w po³¹czeniu z innymi zwi¹zkami, bez tworzenia sztucznych, chimerycznych kompleksów. W badaniach Chattopadhyay i wsp. [11] wykazano, ¿e wzbogacenie wanadem oraz beta karotenem pokarmu dla szczurów ze sztucznie wywo³anym rakiem w¹troby jest bardziej skuteczne ni¿ ka¿dy ze zwi¹zków podawanych osobno, w zapobieganiu powstawania nowych ognisk nowotworów oraz zmniejszeniu wielkoci powsta³ych guzów. Badania przeprowadzone w naszym zespole [15,29] wykaza³y antyproliferacyjny charakter soli wanadu VOSO4 [V(IV)], Na3VO4 oraz NaVO3 [V(V) w dwu ostatnich zwi¹zkach], w stê¿eniach 0,520-mikromolowych wobec komórek szczurzej hepatomy (H35-19). Najbardziej skuteczny, ale jednoczenie najbardziej toksyczny, okaza³ siê Na3VO4, podczas gdy VOSO4 by³ najmniej toksyczny. Porównanie dzia³ania wy¿ej wymienionych zwi¹zków pozwoli³o stwierdziæ, ¿e ortowanadan sodu wykazuje zale¿ne od stê¿enia dzia³anie na komórki nowotworowe. W niskim stê¿eniu (<2,5 µM) sole wanadu nie powoduj¹ uszkodzeñ komórek, natomiast w wy¿szych POCHODNE WANADU...CZ. II. WP£YW NA KOMÓRKI NOWOTWOROWE 387 stê¿eniach (>2,5 µM) komórki i organelle komórkowe zostaj¹ uszkodzone. Streptozotocyna, zwi¹zek stosowany powszechnie do wywo³ywania cukrzycy modelowej u zwierz¹t dzia³a w zupe³nie odmienny od pochodnych wanadu sposób [15], a zatem efekty uzyskiwane przez nas w dowiadczeniach [29] s¹ charakterystyczne i swoiste dla u¿ytych soli wanadu. 2.2.2. Mechanizmy dzia³ania zwi¹zków wanadu na hodowle ludzkich komórek nowotworowych Pochodne wanadu s¹ intensywnie badane pod k¹tem przydatnoci ich zastosowania w przysz³oci w terapii antynowotworowej u ludzi. Dzia³anie wanadu na ludzkie komórki nowotworowe w hodowli nie zosta³o jednak dotychczas w pe³ni wyjanione. Uwa¿a siê, ¿e zwi¹zki wanadu po wprowadzeniu do komórek oddzia³uj¹ na DNA j¹drowe w sposób podobny do cis-platyny, to znaczy wywo³uj¹c wi¹zania krzy¿owe pomiêdzy niæmi DNA utrudniaj¹ lub nawet uniemo¿liwiaj¹ replikacjê DNA, co kieruje komórki na drogê apoptozy. Transport wanadu i jego pochodnych do komórek równie¿ nie jest do koñca poznany. Jedna z teorii mówi o potencjalnym wi¹zaniu pochodnych wanadu do transferyny ludzkiego osocza, tworz¹c kompleks przejciowy, co u³atwia transport cz¹steczek zwi¹zanych z bia³kiem do wnêtrza komórki [17]. Pochodna wanadu tzw. Metvan [(4,7-dimethyl-1,10-phenanthroline) sulfatooksowanadium(IV)], ma zdolnoæ do hamowania wielu rodzajów nowotworów. Wykazano, ¿e w stê¿eniu >1 mM Metvan jest skuteczny w hamowaniu adhezji i proliferacji komórek nowotworowych miêdzy innymi raka piersi, komórek bia³aczkowych, bia³aczek mielocytarnych. W dowiadczeniach na zwierzêtach nie wykazano du¿ej cytotoksycznoci zwi¹zku nawet w stê¿eniach 100 mg/kg masy cia³a [16]. Badania komórek leukemicznych K562 wykaza³y ró¿ny sposób dzia³ania kompleksów wanadu [V(IV)] oraz [V(V)]. Stê¿enie zwi¹zku powoduj¹ce apoptozê 50% komórek (IC 50) waha³o siê od 3,5 mikromoli dla dekawanadanu, a¿ do 150 mikromoli dla pochodnej VO(OH2)(HHida)Ch3OH. Autorzy sugeruj¹, ¿e ró¿ne zwi¹zki wanadu mog¹ oddzia³ywaæ w ten sam sposób: mianowicie utrudniaæ wzajemne oddzia³ywanie DNA i czynników transkrypcyjnych [30]. Ró¿nica w dzia³aniu polega na interakcji z ró¿nymi czynnikami transkrypcyjnymi (na przyk³ad NF-kB lub GATA-1).Wydaje siê, ¿e jony wanadu na +5 stopniu utlenienia mog¹ byæ odpowiedzialne za oddzia³ywania z poszczególnymi niæmi DNA, natomiast jony zwi¹zków kompleksowych wanadu na +4 stopniu utlenienia odpowiadaj¹ za poredniczenie i/lub utrudnianie po³¹czenia czynników transkrypcyjnych z DNA [30]. Siarczan wanadylu oraz inne niskocz¹steczkowe zwi¹zki wanadu, np. piêciotlenek wanadu (V2O5), wykazuj¹ dzia³anie antyproliferacyjne na komórki nowotworowe [23,24,55]. Badania wykonane w naszym zespole [23] wykaza³y zdolnoæ siarczanu wanadylu (VOSO4) do oddzia³ywania na zdolnoæ prze¿ywania i proliferacji komórek linii nowotworowej A549 (linia modelowa ludzkiego niedrobnokomórkowego nowotworu p³uc) oraz linii nowotworowej DU145 (linia komórkowa s³u¿¹ca jako model raka prostaty). U¿ycie stosunkowo prostych metod, takich jak: barwienie przy¿yciowe komórek przy u¿yciu MTT (ang. bromide 3 (4,5 dimethyltioazo 2) 2,5 diphenyltetrazole), fioletu krystalicznego czy barwnika Hoechst 33258, pozwoli³o 388 P. HOLKO, A. M. KORDOWIAK wykazaæ hamowanie wzrostu badanych komórek, lecz siarczan wanadylu mo¿e byæ tak¿e toksyczny dla linii komórkowych nienowotworowych. W dowiadczeniu z u¿yciem linii BEAS 2B oraz PNT2 (nienowotworowe ludzkie linie komórkowe p³uc oraz prostaty) wykazano, ¿e siarczan wanadylu obni¿a proliferacjê prawid³owych komórek w organizmie cz³owieka. Badaj¹c ortowanadan sodu [V(V)], wykazalimy równie¿ [27] znamiennie wy¿szy cytostatyczny oraz/lub cytotoksyczny efekt dzia³ania tej pochodnej wanadu na linie ludzkich komórek nowotworowych p³uc (A549), nerek (HTB-44) i prostaty (DU145) ni¿ w przypadku stosowania V(IV) w postaci VOSO4 [23]. Sugeruje to istotny wp³yw stopnia utlenienia pochodnej wanadu na efekt cytostatyczny, jednak¿e wnioski nale¿y potwierdziæ dalszymi badaniami. Wspomniane wczeniej dzia³anie cytotoksyczne zwi¹zków wanadu na prawid³owe ludzkie komórki pozwala stwierdziæ, i¿ zastosowanie wanadu i jego soli w leczeniu nowotworów wymaga du¿ej ostro¿noci ze wzglêdu na liczne skutki uboczne stosowania zwi¹zku. Badania z u¿yciem metody elektroforezy kometowej udowodni³y, ¿e poziom uszkodzeñ DNA jest podobny jak w komórkach zdrowych ludzkich limfocytów, natomiast komórki nowotworowe s¹ bardziej wra¿liwe ni¿ prawid³owe na dzia³anie zwi¹zków wanadu [55]. Stwierdzono g³ównie uszkodzenia oksydacyjne pojedynczych i podwójnych przerw w ci¹g³oci nici DNA. Wozniak i B³asiak [55] wykazali, ¿e witaminy A, E oraz C mog¹ nasilaæ dzia³anie genotoksyczne soli wanadu poprzez poredniczenie w produkcji reaktywnych form tlenu. Tak¿e prostsze zwi¹zki kompleksowe wanadu wykazuj¹ dzia³anie antyproliferacyjne na komórki nowotwo-rowe. W badaniach Raya i wsp. [39,40] komórki ludzkiego raka piersi zosta³y poddane dzia³aniu monowanadanu amonu. Komórki te by³y wra¿liwe na zale¿ne od stê¿enia dzia³anie zwi¹zku wanadu, obserwowano efekt genotoksyczny, DNA ulega³ chromosomalnej kondensacji, cykl ¿ycia komórek MCF-7 by³ zahamowany, w koñcu wyst¹pi³a apoptoza. Odmienny mechanizm dzia³ania proponuj¹ Scrivens i wsp. [46] lub Fu i wsp. [21]. Polega on na oddzia³ywaniu zwi¹zków wanadu na fosfatazy wewn¹trzkomórkowe. Pierwszy z zespo³ów wykaza³ na liniach nowotworowych: g³owy, szyi, p³uc, okrê¿nicy, piersi, ¿e bisoksowanadan skutecznie oddzia³uje na fosfatazy bia³kowe, np. Cdc25A, onkoproteinê niezbêdn¹ do przekroczenia przez komórkê punktu kontrolnego G1-S. Bia³ko to wspó³pracuje z bia³kiem Ras i ich nadekspresja jest obserwowana w wielu odmianach nowotworów. Dzia³anie bisoksowanadanu jest niezale¿ne od poziomu bia³ek p53 czy p21 w komórkach nowotworowych [46]. Zwi¹zek wanadu oddzia³uje z centrum aktywnym fosfatazy przy³¹czaj¹c siê do niego, co prowadzi do zablokowania mo¿liwoci dzia³ania enzymu. Mechanizm zahamowania cyklu komórkowego zosta³ te¿ stwierdzony w komórkach HepG2. U¿yty w tych dowiadczeniach bisacetyloacetonian wanadu powodowa³ powstanie trwa³ego zahamowania cyklu w fazie G1. Poziom odpowiedzi komórkowej by³ zale¿ny od stê¿enia i czasu inkubacji z komórkami [21]. W przypadku tego zwi¹zku wanadu postuluje siê udzia³ w regulacji dzia³ania fosfataz (w niepoznany do koñca sposób), gdy¿ odnotowano znaczne zmniejszenie fosforylacji bia³ka Rb (retinoblastomy) oraz zmniejszenie ekspresji cyklin D1, E oraz A bez jednoczesnego wzrostu poziomu wolnych rodników [21]. VOSO4 chroni przed guzami piersi indukowanymi przez N-metylo-N-nitrozomocznik. Zwi¹zki wanadu hamuj¹ wzrost i tworzenie guzów jelita grubego i okrê¿nicy u ludzi, oraz hamuj¹ wzrost epidermalnych komórek rakowych [36]. POCHODNE WANADU...CZ. II. WP£YW NA KOMÓRKI NOWOTWOROWE 389 Zwi¹zki wanadu próbuje siê tak¿e syntetycznie ³¹czyæ z innymi zwi¹zkami o charakterze przeciwnowotworowym i przeciwutleniaj¹cym w celu zwiêkszenia mo¿liwoci i profilu dzia³ania takich kompleksów na komórki ludzkie i zwierzêce, a tak¿e zmniejszenia potencjalnego, cytotoksycznego dzia³ania wanadu. Takim przyk³adem jest po³¹czenie VO(IV) oraz hesperydyny, flawonoidu o du¿ych zdolnociach do zmiatania wolnych rodników. Etcheverry i wsp. [18] wykazali, ¿e taki kompleks ma wiêksze zdolnoci do eliminowania z komórek wolnych rodników ni¿ sam flawonoid. Kompleks ma zwiêkszone dzia³anie odpowiadaj¹ce funkcji dysmutazy ponadtlenkowej. Wykazano tak¿e, ¿e kompleks wanad/hesperydyna w równie dobrym stopniu jak hesperydyna powoduje zmiatanie wolnych rodników w komórkach ró¿nych typów. Dzia³anie zwi¹zku kompleksowego na komórki Caco2, ludzkiej linii nowotworu jelita grubego, wykaza³o w porównaniu z sam¹ hesperydyn¹, zwiêkszony efekt antyproliferacyjny oraz proapoptotyczny wzglêdem badanych komórek. Podobne dzia³anie wykazuje kompleks na komórki szczurzej osteosarkomy UMR106. W niskich stê¿eniach (< 5 mM) stymulowa³ proliferacjê osteoblastów, w wy¿szych stê¿eniach (>20 mM) kompleks VO(IV)/hesperydyna wykazywa³ dzia³anie cytotoksyczne równie¿ wobec prawid³owych osteoblastów [18]. Innym przyk³adem po³¹czenia wanadu ze zwi¹zkiem o znanych w³aciwociach antynowotworowych jest kompleks VO(IV)/kwercetyna. W badaniach Ferrera i wsp. [19] testowano ten kompleks na linii komórek prawid³owych osteoblastów MC3T3E1 oraz linii komórek nowotworowych UMR106. W celach porównawczych badano tak¿e dzia³anie samych VOCl2 oraz kwercetyny na te same linie komórkowe. W badaniach wykazano, ¿e kompleks powoduje bardziej wydajn¹ ni¿ sam VOCl2, apoptozê komórek nowotworowych. Nie stwierdzono, ¿eby kompleks wanad/kwercetyna wykazywa³ w niskim zakresie stê¿eñ jakiekolwiek dzia³anie niepo¿¹dane w stosunku do prawid³owych osteoblastów. Poza dzia³aniem antyproliferacyjnym kompleksu wanadu z kwercetyn¹ na nowotworowe osteoblasty wykazano potencjalnie korzystne dzia³anie na komórki zdrowe. Polega³o ono na aktywacji (poprzez fosforylacjê) kinaz ERK regulowanych zewn¹trzkomórkowo oraz zwiêkszeniu produkcji kolagenu typu I w badanych komórkach. Dzia³anie takie mo¿e siê wi¹zaæ z korzystnym zwiêkszeniem proliferacji komórek osteoblastycznych w organizmie cz³owieka. Próbuje siê tak¿e po³¹czyæ wanad z prostymi cukrami np. kompleks wanadu(IV) oraz dwucukru trehalozy. Barrio i wsp. [4] wykazali jego zdolnoci antyproliferacyjne wobec osteoblastycznej linii komórek nowotworowych UMR106. W stê¿eniu poni¿ej 5 mM, pochodna ta zwiêksza³a proliferacjê komórek nowotworowych, podczas gdy zastosowanie wy¿szych stê¿eñ od 50 do 100 mM, ujawnia³o wprost proporcjonalne do stê¿enia, antyproliferacyjne dzia³anie badanego kompleksu. Na komórki prawid³owe, zwi¹zek ten dzia³a³ jak mitogen w zakresie stê¿eñ 525 mM. Stwierdzono tak¿e dzia³anie stymuluj¹ce na fosforylacjê kinazy ERK w komórkach (zale¿ne od stê¿enia i czasu dzia³ania zwi¹zku) [4,34]. Osiñska-Królicka i wsp. [38] wykazali, ¿e wanad na III stopniu utlenienia mo¿e tworzyæ trwa³e kompleksy z L-cystein¹ w rodowisku wodnym. Taki kompleks okaza³ siê skuteczny w hamowaniu proliferacji komórek hepatomy Morrisa5123. 390 P. HOLKO, A. M. KORDOWIAK Prowadzone s¹ te¿ próby zastosowania zwi¹zków, w których oprócz wanadu znajduj¹ siê te¿ inne rzadkie pierwiastki. W badaniach Younga i Wanga [56] zastosowano zwi¹zek wanadu z selenem w postaci Na5SeV5O18·3H2O do badañ nad tempem proliferacji komórek linii K562 ludzkiej bia³aczki. Zwi¹zek ten obni¿a tempo proliferacji badanych komórek, a efekt zale¿y od jego stê¿enia i czasu stosowania. Ponadto wykazano antyproliferacyjne dzia³anie tej pochodnej tak¿e w liniach zwierzêcych: mysiej sarkomy S180 oraz hepatomy H22. Mechanizm dzia³ania zwi¹zku ma polegaæ na wielotorowym dzia³aniu w komórkach linii bia³aczkowej, wydajnym hamowaniu cyklu ¿yciowego komórek w fazie S oraz G2/M, co uniemo¿liwia ich dalsz¹ proliferacjê. Mechanizm tego procesu zale¿y od akumulacji jonów Ca oraz Mg w komórce, zwiêkszenia iloci wystêpuj¹cych w komórce wolnych rodników, obni¿enia pH w b³onach mitochondrialnych oraz zmniejszenia potencja³u tych b³on [56]. 3. ZAKOÑCZENIE Nieorganiczne i organiczne pochodne wanadu s¹ intensywnie badane, gdy¿ jako substancje o dzia³aniu antyproliferacyjnym i hamuj¹cym wzrost ludzkich komórek nowotworowych budz¹ nadziejê na zastosowanie ich w przysz³oci w leczeniu pewnych typów nowotworów u ludzi. Ze wzglêdu na ró¿ne sposoby dzia³ania poszczególnych pochodnych wanadu na ró¿nych stopniach utlenienia s¹ tworzone zwierzêce i komórkowe modele dowiadczalne w celu precyzyjnego wyjanienia dzia³ania tych zwi¹zków w komórkach prawid³owych i nowotworowych. Z dotychczasowych dowiadczeñ wiadomo, ¿e wanad mo¿e wykazywaæ tak¿e dzia³anie genotoksyczne, a nawet mutagenne w stosunku do komórek prawid³owych zarówno zwierzêcych, jak i ludzkich [20,22,37,53]. Nie jest do koñca wyjaniony mechanizm dzia³ania pochodnych wanadu, promuj¹cych proces nowotworzenia. Wiadomo jednak, ¿e czêsto taki efekt mo¿e pojawiæ siê wraz ze wzrostem stê¿enia zwi¹zków wanadu. Równie¿ nie do koñca jest wyjaniony sposób dzia³ania wanadu i jego pochodnych na komórki nowotworowe. Wiadomo, ¿e zwi¹zki te mog¹ przyczyniaæ siê do zmniejszenia tempa proliferacji, iloci i masy guzów sztucznie wywo³anych w modelach zwierzêcych. W badanych liniach ludzkich komórek nowotworowych, wanad równie¿ zmniejsza³ aktywnoæ proliferacyjn¹ komórek. Ró¿ni autorzy proponuj¹ kilka mo¿liwoci wyjanienia mechanizmów takiego dzia³ania zwi¹zków wanadu. W celu zmniejszenia potencjalnie wystêpuj¹cych niepo¿¹danych efektów wanadu próbuje siê obecnie wi¹zaæ ten pierwiastek w nowo syntetyzowanych, najczêciej organicznych zwi¹zkach kompleksowych, które s¹ bardziej efektywne jako substancje o dzia³aniu przeciwnowotworowym. Na podstawie wyników uzyskiwanych przez innych autorów oraz wstêpnych dowiadczeñ w³asnych s¹dzimy, ¿e efektywnoæ dzia³ania wanadu na komórki zale¿y od: wybranego modelu badañ (komórki prawid³owe, nowotworowe, guzy zwierz¹t ró¿nych gatunków), od rodzaju nowotworu, ligandu wi¹¿¹cego wanad (jon nieorganiczny lub kompleks organiczny), wartocio- POCHODNE WANADU...CZ. II. WP£YW NA KOMÓRKI NOWOTWOROWE 391 woci wanadu w danym zwi¹zku i stê¿enia pochodnej wanadu oraz czasu trwania dowiadczenia. W okrelonych eksperymentem warunkach, najczêciej obserwuje siê liniow¹ zale¿noæ miêdzy stopniem zahamowania wzrostu komórek nowotworowych a u¿ytymi stê¿eniami wanadu. Jednak nale¿y zaznaczyæ, ¿e zawsze trzeba braæ pod uwagê potencjalne skutki uboczne dzia³ania zastosowanych zwi¹zków na prawid³owe komórki ludzkiego organizmu. LITERATURA [1] AHUKLA R, BHONDE RR. Adipogenic action of vanadium: a new dimensions in treating diabetes. Biometals 2008; 21: 205210. [2] AURELIANO M, GANDARA RMC. Decavanadate effects in biological systems. J Inorg Biochem 2005; 99: 979985. [3] AVILA-COSTA MR, FLORES EM, COLIN-BARENQUE C, ORDONEZ JL, GUTIERREZ AL, NINOCABRERA HG, MUSSALI-GALANTE P, FORTOUL TI. Nigrostriatal modifications after vanadium inhalation: an immunocytochemical and cytological approach. Neurochemical Res 2004: 29: 1365 1369. [4] BARRIO DA, WILLIAMS PAM, CORTIZO AM, ETCHEVERRY SB. Synthesis of a new vanadyl(IV) complex with trehalose (TreVO): insulin-mimetic activities in osteoblast-like cells in culture. J Biol Inorg Chem 2003; 8: 459468. [5] CHAKRABORTY T, CHATTERJEE A, DHACHINAMOORTHI D, SRIVASTAWA S, PANAYAPPAN L, CHATTERJEE M. Vanadium limits the expression of proliferating cell nuclear antigen and inhibits early DNA damage during diethylnitrosamine-induced hepatocellular preneoplasia in rats. Environ Mol Mutagen 2006; 47: 603615. [6] CHAKRABORTY T, CHATTERJEE A, RANA A, DHACHINAMOOTRHI D, KUMAR AP, CHATTERJEE M. Carcinogen-induced early molecular events and its implication in the initiation of chemical hepatocarcinogenesis in rats: Chemo-preventive role of vanadium on this process. Biochim Biophys Acta 2007; 1772: 4859. [7] CHAKRABORTY T, CHATTERJEE A, RANA A, RANA B, PALANISAMY A, MADHAPPAN R, CHATTERJEE M. Suppression of early stages of neoplastic transformation in a two-stage chemical hepatocarcinogenesis model: supplementation of vanadium, a dietary micronutrient, limits cell proliferation and inhibits the formations of 8-hydroxy-2'-deoxyguanosines and DNA strand-breaks in the liver of spraguedawley rats. Nutr Cancer 2007; 59: 228247. [8] CHAKRABORTY T, CHATTERJEE A, SARALAYA MG, CHATTERJEE M. Chemopreventive effect of vanadium in a rodent model of chemical hepatocarcinogenesis: reflections in oxidative DNA damage, energy-dispersive X-ray fluorescence profile and metallothionein expression. J Biol Inorg Chem 2006; 11: 855866. [9] CHAKRABORTY T, CHATTERJEE A, SARALAYA MG, DHACHINAMOOTRHI D, CHATTERJEE M. Vanadium inhibits the development of 2-acetylaminofluorene-induced premalignant phenotype in a two-stage chemical rat hepatocarcinogenesis model. Life Sci 2006; 78: 28392851. [10] CHAKRABORTY T, PANDEY N, CHATTERJEE A, GHOSH B, RANA B, CHATTERJEE M. Molecular basis of anticlastogenic potential of vanadium in vivo during the early stages of diethylnitrosamineinduced hepatocarcinogenesis in rats. Mut Res 2006; 609: 117128. [11] CHATTOPADHYAY MB, CB MK, KANNA PS, RAY RS, ROY S, CHATTERJEE M. Combined supplementation of vanadium and beta-carotene suppresses placental glutathione S-transferase-positive foci and enhances antioxidant functions during the inhibition of diethylnitrosamine-induced rat liver carcinogenesis. J Gastroenterol Hepatol 2004; 19: 683693. [12] CHIEN P-S, MAK O-T, HUANG H-J. Induction of COX-2 protein expression by vanadate in A549 human lung carcinoma cell line through EGF receptor and p38 MAPK-mediated pathway. Biochem Biophys Res Commun 2006; 339: 562568. 392 P. HOLKO, A. M. KORDOWIAK [13] CORTIZO AM, MOLINUEVO MS, BARRIO DA, BRUZZONE L. Osteogenic activity of vanadyl(IV)ascorbate complex: evaluation of its mechanism of action. Int J Biochem Cell Biol 2006; 38: 1171 1180. [14] CRANS DC, SMEE JJ, GAIDAMAUSKAS E, YANG L. The chemistry and biochemistry of vanadium and the biological activities exerted by vanadium compounds. Chem Rev 2004; 104: 849902. [15] DABROS W, KLEIN A, TATAR B, HOLKO P, KORDOWIAK AM. Does Streptozotocin [STZ] exert an rat hepatoma H35-19 cell line? Pol J Pathol 2007; 58: 253260. [16] D'CRUZ OJ, UCKUN FM. Metvan: a novel oxovanadium(IV) complex with broad spectrum anticancer activity. Expert Opin Investig Drugs 2002; 11: 18291836. [17] DU H, XIANG J, ZHANG Y, TANG Y, XU G. Binding of V(IV) to human transferrin: potential relevance to anticancer activity of vanadocene dichloride. J Inorg Biochem 2008; 102: 146149. [18] ETCHEVERRY SB, FERRER EG, NASO L, RIVADENEIRA J, SALINAS V, WILLIAMS PAM. Antioxidant effects of the VO(IV) hesperidin complex and its role in cancer chemoprevention. J Biol Inorg Chem 2008; 13: 435447. [19] FERRER EG, SALINAS MV, CORREA MJ, NASO L, BARRIO DA, ETCHEVERRY SB, LEZAMA L, ROJO T, WILLIAMS PAM. Synthesis, characterization, antitumoral and osteogenic activities of quercetin vanadyl(IV) complexes. J Biol Inorg Chem 2006; 11: 791801. [20] FRITZ WA, LIN TM, PETERSON RE. The aryl hydrocarbon receptor (AhR) inhibits vanadate-induced vascular endothelial growth factor (VEGF) production in TRAMP prostates. Carcinogenesis 2008; 29: 10771082. [21] FU Y, WANG Q, YANG XG, YANG XD, WANG K. Vanadyl bisacetylacetonate induced G1/S cell cycle arrest via high-intensity ERK phosphorylation in HepG2 cells. J Biol Inorg Chem 2008; 13: 1001 1009. [22] GLAVIANO A, NAYAK V, CABUY E, BAIRD DM, YIN Z, NEWSON R, LADON D, RUBIO MA, SLIJEPCEVIC P, LYNG F, MOTHERSILL C, CASE CP. Effects of hTERT on metal ion-induced genomic instability. Oncogene 2006; 25: 34243435. [23] HOLKO P, LIGEZA J, KISIELEWSKA J, KORDOWIAK AM, KLEIN A. The effect of vanadyl sulphate (VOSO4) on autocrine growth of human epithelial cancer cell lines. Pol J Pathol 2008; 59: 38. [24] IVANKOVIÆ S, MUSIÆ M, GOTIÆ M, LJUBESIÆ N. Cytotoxicity of nanosize V2O5 particles to selected fibroblast and tumor cells. Toxicol in vitro 2006; 20: 286294. [25] KANNA PS, SARALAYA MG, SAMANTA K, CHATTERJEE M. Vanadium inhibits DNA-protein crosslinks and ameliorates surface level changes of aberrant crypt foci during 1,2-dimethylhydrazine induced rat colon carcinogenesis. Cell Biol Toxicol 2005; 21: 4152. [26] KISS T, JAKUSH T, HOLLENDER D, DORNYEI A, ENYEDY EA, PESSOA JC, SAKURAI H, SANZMEDEL A. Biospecification of antidiabetic VO(IV) complexes. Coord Chem Rev 2008; 252: 1153 1162. [27] KLEIN A, HOLKO P, LIGÊZA J,. KORDOWIAK AM. Sodium orthovanadate affects growth of some human epithelial cancer ells (A549, DU145, HTB44). Folia Biol Kraków 2008; 56: 115121. [28] KORDOWIAK AM, HOLKO P. Pochodne wanadu jako zwi¹zki o istotnym znaczeniu biologicznym: Czêæ I: Dzia³anie przeciwcukrzycowe. Post Biol Kom 2009; 36,3: 361376. [29] KORDOWIAK AM, KLEIN A, GOC A, DABROS W. Comparison of the effect of VOSO4, Na3VO4 and NaVO3 on proliferation, viability and morphology of H35-19 rat hepatoma cell line. Pol J Pathol 2007; 58: 5157. [30] LAMPRONTI I, BIANCHI N, BORGATTI M, FABBRI E, VIZZIELLO L, KHAN MT, ATHER A, BREZENA D, TAHIR MM, GAMBARI R. Effects of vanadium complexes on cell growth of human leukemia cells and protein-DNA interactions. Oncology Rep 2005; 14: 915. [31] LEOPARDI P, VILLANI P, CORDELLI E, SINISCALCHI E, VESCHETTI E, CREBELLI R. Assessment of the in vivo genotoxicity of vanadate: analysis of micronuclei and DNA damage induced in mice by oral exposure. Toxicol Lett 2005; 158: 3949. [32] LIN TS, CHANG CL, SHEN FM. Whole blood vanadium in Taiwanese. College Students Bull Environ Contam Toxicol 2004; 73: 781786. [33] MEHDI MZ, PANDEY SK, THEBERGE JF, SRIVASTAVA AK. Insulin signal mimicry as a mechanism for the insulin-like effects of vanadium. Cell Biochem Biophys 2006; 44: 7381. [34] MOLINUEVO MS, CORTIZO AM, ETCHEVERRY SB. Vanadium(IV) complexes inhibit adhesion, migration and colony formation of UMR106 osteosarcoma cells. Cancer Chemother Pharmacol 2008; 61: 767773. POCHODNE WANADU...CZ. II. WP£YW NA KOMÓRKI NOWOTWOROWE 393 [35] MOSKALYK RR, ALFANTAZI AM. Processing of vanadium: a review. Minerals Eng 2003; 16: 793805. [36] MUKHERJEE B, PATRA B, MAHAPATRA S, BANERJEE P, TIWARI A, CHATTERJEE M. Vanadium an element of atypical biological significance. Toxicol Letters 2004; 150: 135143. [37] NOUTSOPOULOS D, MARKOPOULOS G, KOLIOU M, DOVA L, VARTHOLOMATOS G, KOLETTAS E, TZAVARAS T. Vanadium induces VL30 retrotransposition at an unusually high level: a possible carcinogenesis mechanism. J Mol Biol 2007; 374: 8090. [38] OSIÑSKA-KRÓLICKA I, PODSIAD£Y H, BUKIETYÑSKA K, ZEMANEK-ZBOCH M, NOWAK D, SUCHOSZEK-£UKANIUK K, MALICKA-B£ASZKIEWICZ M. Vanadium(III) complexes with L-cysteine-stability, speciation and the effect on actin in hepatoma Morris 5123 cells. J Inorg Biochem 2004; 98: 20872098. [39] RAY RS, GHOSH B, RANA A, CHATTERJEE M. Suppression of cell proliferation, induction of apoptosis and cell cycle arrest: chemopreventive activity of vanadium in vivo and in vitro. Int J Cancer 2007; 120: 1323. [40] RAY RS, RANA B, SWAMI B, VENU V, CHATTERJEE M. Vanadium mediated apoptosis and cell cycle agrest in MCF7 cell line. Chem Biol Interact 2006; 163: 239247. [41] RAY RS, ROY S, GHOSH S, KUMAR M, CHATTERJEE M. Suppression of cell proliferation, DNA protein cross-links and induction of apoptosis by vanadium in chemical rat mammary carcinogenesis. Biochim Biophys Acta 2004; 1675: 165173. [42] RAY RS, ROY S, SAMANTA S, MAITRA D, CHATTERJEE M. Protective role of vanadium on the early process of rat mammary carcinogenesis by influencing expression of metallothionein, GGT-positive foci and DNA fragmentation. Cell Biochem Funct 2005; 23: 447456. [43] RESS NB, CHOU BJ, RENNE RA, DILL JA, MILLER RA, ROYCROFT JR, HAILEY JR,HASEMAN JK, BUCHER JR. Carcinogenicity of inhaled vanadium pentoxide in F344/N rats and B6C3F1 mice. Toxicol Sci 2003; 74: 287296. [44] RODRIGUEZ-MERCADO JJ, ROLDAN-REYES E, ALTAMIRO-LOZANO M. Genotoxic effects of vanadium(IV) in human peripheral blood cells. Toxicol Lett 2003; 144: 359369. [45] SAMANTA S, SWAMY V, SURESH D, RAJKUMAR M, RANA R, RANA A, CHATTERJEE M. Protective effects of vanadium against DMH-induced genotoxicity and carcinogenesis in rat colon: removal of O6-methylguanine DNA adducts, p53 expression, inducible nitric oxide synthase downregulation and apoptotic induction. Mutat Res 2008; 650: 123131. [46] SCRIVENS PJ, ALAOUI-JAMALI MA, GIANNINI G, WANG T, LOIGNON M, BATIST G, SANDOR VA. Cdc25A-inhibitory properties and antineoplastic activity of bisperoxovanadium analogues. Mol Cancer Ther 2003; 2: 10531059. [47] SHECHTER Y, GOLDWASER I, MIRONCHIK M, FRIDKIN M, GEFEL D. Historic perspective and recent developments on the insulin-like actions of vanadium; toward developing vanadium-based drugs for diabetes. Coord Chem Rev 2003; 237: 311. [48] SHECHTER Y. Insulin-like effects of vanadium: mechanism of action, clinical and basic implications. Lett Pept Sci 1998; 5: 319322. [49] SUZUKI K, INAGEDA K, NISHITAI G, MATSUOKA M. Phosphorylation of p53 at serine 15 in A549 pulmonary epithelial cells exposed to vanadate: involvement of ATM pathway. Toxicol Appl Pharmacol 2007; 220: 8391. [50] TANG H, SUN Y, XIU Q, LU H, HAN H. Cyclooxygenase-2 induction requires activation of nuclear factor of activated T-cells in Beas-2B cells after vanadium exposure and plays an anti-apoptotic role. Arch Biochem Biophys 2007; 468: 9299. [51] TANIGUCHI T, SHIMIZU M, NAKAMURA H, HIRABAYASHI T, FUJINO H, SAITO T, MURAYAMA T. Vanadate-induced activation of cytosolic phospholipase A2a in L929 cells: roles of tyrosine kinase, protein kinase C and extracellular signal-regulated kinase. Biochem Pharmacol 2007; 73: 854862. [52] THOMPSON KH, BÖHMERLE K, POLISHCHUK E, MARTINS C, TOLEIKIS P, TSE J, YUEN V, MCNEILL JH, ORVIG C. Complementary inhibition of synoviocyte, smooth muscle cell or mouse lymphoma cell proliferation by a vanadyl curcumin complex compared to curcumin alone. J Inorg Biochem 2004; 98: 20632070. [53] VALKO M, RHODES CJ, MONCOL J, IZAKOVIC M, MAZUR M. Free radicals, metals and antioxidants in oxidative stress-induced cancer. Chem Biol Interact 2006; 160: 140. 394 P. HOLKO, A. M. KORDOWIAK [54] VILLANI P, CORDELLI E, LEOPARDI P, SINISCALCHI E, VESCHETTI E, FRESEGNA AM, CREBELLI R. Evaluation of genotoxicity of oral exposure to tetravalent vanadium in vivo. Toxicol Lett 2007; 170: 1118. [55] WONIAK K, B£ASIAK J. Vanadyl sulfate can differentially damage DNA in human lymphocytes and HeLa cells. Arch Toxicol 2004; 78: 715. [56] YANG J., WANG Z. The antitumor effects of selenium compound Na5SeV5O18·3H2O in K562 cell. Arch Pharm Res 2006; 29: 859865. Redaktor prowadz¹cy Janusz Kubrakiewicz Otrzymano: 29.12. 2009 r. Przyjêto: 15.05. 2009 r. Prof. dr hab. Anna M. Kordowiak Wydzia³ Biochemii, Biofizyki i Biotechnologii, Zak³ad Biochemii Ogólnej, Uniwersytet Jagielloñski, 30-387 Kraków ul. Gronostajowa 7, e-mail: [email protected]