Reveal Q+ Aflatoxin instrukcja

Reveal Q+ for Aflatoxin
Paskowy test ilościowy do wykrywania
Aflatoksyn
NEO 8085
Stosowany z czytnikiem Reveal AccuScan III
wersja 4.21 lub nowsza
o
Przechowywać w temperaturze 18-30 C
Nie zamrażać
Diagnostyka Rolno-Spożywcza
Sprzedaż i Serwis : +48 22 853 45 80/76
[email protected]
Reveal Q+ for Aflatoxin
Toksyna
Aflatoksyna jest toksyczną i rakotwórczą substancją wytwarzaną przez niektóre szczepy pleśni, tj.
Aspergillus flavus i Aspergillus parasiticus. W praktyce występują 4 zasadnicze typy Aflatoksyn,
tj. B1 i B2 oraz G1 i G2. Najczęściej spotykana jest Aflatoksyna B1 i należy ona do grupy najbardziej
toksycznych Aflatoksyn. Aflatoksyny najczęściej występują w kukurydzy, orzeszkach ziemnych,
nasionach bawełny oraz w większości orzechów drzewnych.
Skarmianie pasz skażonych Aflatoksynami powoduje chroniczne niedomaganie zdrowotne, brak
przyrostów produkcyjnych, do padnięć zwierząt włącznie. Aflatoksyny uszkadzają wątrobę, wywołują
raka, obniżają produkcję jaj i mleka, obniżają odporność organizmu i utrudniają efektywność rozrodu.
Wiele krajów ustaliło maksymalne dopuszczalne poziomy Aflatoksyn w żywności i paszy. Z tego
względu dokładne oznaczanie ich obecności należy do najważniejszych badań jakości żywności
i pasz, w których te toksyny mogą występować. Przy oznaczaniu obecności Aflatoksyn wymaga się
dokładnego
pobierania
i
przygotowywania
prób,
chemicznej
ekstrakcji
oraz
precyzyjnego
wykonywania oznaczeń ilościowych.
Limity dopuszczalnych poziomów Aflatoksyn w żywności i paszy ustalone przez FDA:
Konsumenci
Poziomy
Ludzie
20 ppb
Zwierzęta
20 ppb
Rodzaj badanej żywności lub
paszy
Wszystkie pokarmy, z wyjątkiem
mleka
Wszystkie pasze, z wyjątkiem
podanych poniżej
Wyjątki:
Bydło hodowlane
Trzoda hodowlana
Dorosły drób
Tuczniki powyżej 45 kg
100 ppb
Kukurydza
200 ppb
Kukurydza
Dorosłe bydło rzeźne
300 ppb
Kukurydza
Dorosłe bydło, świnie i drób
300 ppb
Śruta z ziarna bawełny
Diagnostyka Rolno-Spożywcza
Sprzedaż i Serwis : +48 22 853 45 80/76
[email protected]
Reveal Q+ for Aflatoxin
Regulacje UE dla Aflatoksyn są następujące:
Żywność
Orzeszki ziemne, orzechy do przetworzenia przed konsumpcją
Suszone owoce do przetworzenia przed konsumpcją
Przyprawy
Kukurydza do sortowania i przetworzenia przed konsumpcją
Orzechy do sortowania i przetworzenia przed konsumpcją
Orzeszki ziemne, orzechy do bezpośredniego spożycia
Suszone owoce do bezpośredniego spożycia
Zboża przetworzone
Preparaty dla niemowląt
Poziomy
Maksymalne (ppb)
15
10
4
0,1
Zastosowanie testu
Test Reveal Q+ Aflatoksyny
jest stosowany do szybkiej ilościowej analizy zawartości Aflatoksyn
w kukurydzy i produktach kukurydzianych. Kierowany jest do osób zajmujących się kontrolą Jakości
produktów możliwie zanieczyszczonych Aflatoksynami.
Zasada działania testu
Test jest jednostopniowym paskowym testem immunochromatograficznym działającym na zasadzie
konkurencyjnej techniki immunologicznej.
Ekstrakt przenika do strefy z reagentami zawierającymi przeciwciała specyficzne dla Aflatoksyn
skoniugowane z cząsteczkami złota. Jeżeli w badanej próbce obecne są Aflatoksyny to w tej strefie
wychwytywana jest przez kompleks przeciwciało-barwnik na skutek czego tworzy się nowy kompleks:
Aflatoksyna + przeciwciało + barwnik. Z kolei ten kompleks przenika dalej do strefy membranowej,
w której Aflatoksyna skonjugowana jest z nośnikiem białkowym. W tej strefie wszystkie nie związane
przeciwciała specyficzne dla Aflatoksyn są wychwytywane, a cząstki barwne koncentrują się tworząc
widoczną poprzeczną linię na pasku. Jeżeli w badanej próbce jest więcej Aflatoksyn to w większym
stopniu będzie tworzył kompleksy ze specyficznymi przeciwciałami i cząsteczkami barwnymi, skutkiem
czego mniej przeciwciał Aflatoksyn będzie wychwytywanych w strefie testowej paska. Z tego względu
przy wyższej koncentracji Aflatoksyn w badanej próbce intensywność koloru na poprzecznej linii
tworzącej się na pasku jest słabsza.
Diagnostyka Rolno-Spożywcza
Sprzedaż i Serwis : +48 22 853 45 80/76
[email protected]
Reveal Q+ for Aflatoxin
Alogorytmy zaprogramowane w czytniku Reveal AccuScan™ III przeliczają intensywność tej linii na
ilościowy wynik wyrażany w częściach na bilion ppb (parts per billion = ppb).
Membrana zawiera także strefę kontrolną, w której immuno kompleks znajdujący się w strefie
reagentowej jest wychwytywany przez przeciwciała tworząc widoczną poprzeczną linię kontrolną.
Kontrolna linia formuje się zawsze, niezależnie od poziomu zawartości Aflatoksyn w badanej próbce
i wskazuje na prawidłowe działanie testu.
Przechowywanie
Zestaw należy przechowywać w temperaturze pokojowej (18 – 30C). Paski testowe należy
przechowywać w oryginalnych zamkniętych pojemnikach, w celu zachowania ich optymalnych
właściwości.
Skład zestawu

25 pasków testowych Reveal Q+

25 czerwonych probówek do rozcieńczeń

25 probówek na próbki

2 butelek z rozcieńczalnikiem do próbek

Instrukcja użycia
Materiały zalecane, nie znajdujące się w zestawie

65% roztwór etanolu

Pojemniki do pobierania próbek z nakrywkami (Neogen nr kat. 9428)

Młynek Agri Grind lub równorzędny (Neogen nr kat. 0401)

Waga o możliwości odważenia 5-50 g  0,1g (Neogen nr kat. 9427)

Stoper (Neogen nr kat.0426)

Statyw na probówki Reveal Sample Cup Rack (Neogen nr kat. 9475)

Czytnik Reveal AccuSan III (Neogen nr kat. 9590)

Cylinder miarowy o pojemności 100 ml (Neogen nr kat.9447,9448)

Strzykawka filtrująca lub filtr Whatman Nr.1 (Neogen nr kat. 9420)

Pojemniki do zbierania ekstraktu z korkami (Neogen nr kat. 9421, 9421B)

Pipeta 100l (Neogen nr kat. 9272, 9278)

Końcówki do pipety 100l (Neogen nr kat.9410, 9417 lub 9407)

Pipeta 500l (Neogen nr kat. 9335)

Końcówki do pipety 500l (Neogen nr kat.9464, 9487)
Diagnostyka Rolno-Spożywcza
Sprzedaż i Serwis : +48 22 853 45 80/76
[email protected]
Reveal Q+ for Aflatoxin
Uwagi i zalecenia
1. Paski testowe muszą być przetrzymywane wewnątrz suchego oryginalnego opakowania.
2. Etanol jest łatwopalny. Przechowywać opakowanie szczelnie zamknięte, z dala od ciepła
ognia i iskier oraz osób palących. Jest toksyczny po połknięciu lub po wchłonięciu oparów.
Unikać kontaktu ze skórą.
3. Zestaw należy przechowywać w temperaturze pokojowej (18 – 30C). Nie zamrażać.
4. Nie stosować testu po upływie jego terminu ważności.
5. Wszystkie stosowane w teście płyny, w tym ekstrakty próbek, jak również sprzęt laboratoryjny
należy traktować, jako zanieczyszczone Aflatoksyną. W czasie wykonywania testu należy
stosować rękawiczki i odzież ochronną
6. W celu uniknięcia zanieczyszczenia krzyżowego, do każdej próbki należy stosować czysty
sprzęt laboratoryjny i dokładnie myć szkło przed użyciem go do następnej próbki.
Ustawienia czytnika AccuScan III
Czytnik AccuScan III musi mieć wersję oprogramowania 4.21 lub nowszą.
W celu uzyskania informacji na temat odpowiednich ustawień krzywej wzorcowej należy odnieść się
do opakowania testu lub certyfikatu Jakości testu.
1. Uruchomić program AccuScan III w czytniku.
2. Wybrać kategorię: Mycotoxin Q+ i rodzaj testu Aflatoxin.
3. Wprowadzić numer próbki ID (opcjonalne).
4. Wprowadzić numer serii testu (lot number), wartości A,B,C,D, z opakowania testu lub wybrać
z historii (History) wcześniej wprowadzone dane.
Uwaga: Aby uzyskać bardziej szczegółowe informacje należy skorzystać z instrukcji obsługi czytnika
AccuScan III. Czytnik AccuScan III musi dopasować numer serii do analizowanego paska testowego.
Czytnik AccuScan III należy zaktualizować przed przystąpieniem do wykonywania analiz.
Przygotowanie i ekstrakcja próbek
Badane próbki powinny być pobrane zgodnie z zasadami przy pobieraniu próbek reprezentatywnych.
1. Jeżeli nie stosuje się gotowego roztworu Neogen, przygotować 65% roztwór etanolu poprzez
zmieszanie 6,5 części etanolu z 3,5 części wody destylowanej lub dejonizowanej.
Diagnostyka Rolno-Spożywcza
Sprzedaż i Serwis : +48 22 853 45 80/76
[email protected]
Reveal Q+ for Aflatoxin
2. Uzyskać próbkę reprezentatywną. Zmielić pobraną próbkę do takiego stopnia, aby
co najmniej 75% zmielonego materiału przechodziło przez sito o 20 mesh, tj. miało wygląd
dobrze zmielonej kawy instant.
3. Ekstrakcję prowadzić w stosunku: 1 część próbki do 5 części 65% roztworu etanolu. Na
przykład, do 10 gramów próbki dodać 50 ml 65% roztworu etanolu. Energicznie wytrząsać
przez 3 minuty lub mieszać w mieszalniku szybkoobrotowym przez 1 minutę.
ALTERNATYWNIE: (W metodzie USDA/GIPSA) Zmieszać 50 gramów próbki ze 250 ml 65%
roztworu etanolu
i wytrząsać przez 3 minuty lub mieszać w mieszalniku szybkoobrotowym
przez 1 minutę.
4. Pozostawić próbkę do odstania, a następnie przefiltrować co najmniej 5ml przez strzykawę
filtrującą lub przez filtr papierowy Whatman Nr.1 i zebrać filtrat.
Procedura wykonania testu
1. Wyjąć niezbędną ilość czerwonych probówek do rozcieńczeń i przezroczystych probówek na
próbki. Umieścić je w stojaku.
2. Przy użyciu pipety i nowej końcówki wprowadzić po 500l rozcieńczalnika do próbek do
każdej probówki oznaczonej na czerwono.
3. Stosując nową końcówkę pipety do każdej próbki wprowadzić po 100l przefiltrowanych
ekstraktów badanych próbek do każdej czerwonej probówki z rozcieńczalnikiem. Mieszać
poprzez 5 krotne pipetowanie w górę i w dół.
4. Przenieść po 100l rozcieńczonego ekstraktu próbek do czystych przezroczystych probówek.
5. W każdej probówce umieścić pasek testowy Reveal Q+ Aflatoxin, końcówką oznakowaną
„sample” do dołu. Pozostawić pasek testowy w próbce przez 6 minut.
6. Wyjąć pasek z próbówki po upływie czasu 6 minut. Przejść do odczytu wyników.
Odczyt wyników na czytniku Reveal AccuScan
Testy powinny być odczytane w ciągu 1 minuty od zakończenia 6 minutowej inkubacji.
Aby uzyskać dodatkowe informacje na temat ustawień należy udać się do Reveal AccuScan III Set
Up.
1. Umieścić dokładnie pasek testowy Reveal Q+ w czarnym adapterze, najpierw strona
„sample”, stroną z rezultatami skierowanymi na zewnątrz.
Diagnostyka Rolno-Spożywcza
Sprzedaż i Serwis : +48 22 853 45 80/76
[email protected]
Reveal Q+ for Aflatoxin
2. Umieścić adapter z testem, górną stroną skierowany w dół, w czytniku (linie testowe będą
skierowane w dół czytnika). Po włożeniu adaptera zaświeci się zielone światełko czytnik
rozpocznie automatycznie analizę testu. UWAGA: usunięcie adaptera z czytnika w trakcie
odczytu może prowadzić do niewłaściwych odczytów.
3. Czytnik AccuScan III przeanalizuje pasek testowy a uzyskane rezultaty zostaną wyświetlone
na ekranie oraz zapisane w pamięci czytnika.
Uwagi
1. Należy upewnić się, że pasek testowy jest właściwie (całkowicie) umieszczony w adapterze.
2. Odczyty powinny być wykonane pomiędzy 6 a 7 minutą. Odczyty dokonane po czasie
przekraczającym 7 minut mogą być niedokładne z powodu nadmiernego rozwinięcia paska
testowego.
3. Pasek testowy musi być odczytywany w czytniku Reveal AccuScan III Reader.
Charakterystyka testu
Test Reveal Q+ for Aflatoxin został opracowany do ilościowej analizy Aflatoksyn.
1. Limit detekcji: 2 ppb
2. Zakres pomiarowy: 2 – 150 ppb
UWAGA: aby oznaczyć zawartość Aflatoksyn na poziomie przekraczającym 150 ppb należy
skontaktować się z serwisem technicznym.
Zwalidowane matryce
Kukurydza, ryż browarniczy, płatki kukurydziane, kukurydziana mączka, kukurydziana mączka
glutenowa*, skrobia kukurydziana, mieszanki kukurydza/soja,
DDGS*, orzechy ziemne*, popcorn,
łuski ryżowe,
*prosimy o kontakt w sprawie uzyskania informacji na temat ekstrakcji.
Diagnostyka Rolno-Spożywcza
Sprzedaż i Serwis : +48 22 853 45 80/76
[email protected]
Reveal Q+ for Aflatoxin
UWAGA: Neogen stale prowadzi walidację dla kolejnych produktów. W celu uzyskania aktualizacji
prosimy o kontakt z firmą Noack Polen Sp. z o.o.
Serwis klienta
Noack Polen Sp. z o.o., ul. Królowej Marysieńki 50, 02-954 Warszawa, Tel. 22 853 45 80, fax. 22 853
77 26, [email protected]
Dostępne informacje MSDS
Materiały dotyczące bezpieczeństwa dla tego testu i wszystkich testów Neogenu są dostępne na
stronie www.neogen.com/msds.html.
Gwarancja
Neogen nie daje żadnych gwarancji na żaden sposób, również wykorzystania lub wprowadzania, z
wyjątkiem materiału, z którego produkty są wykonane, które mają standardową jakość. Jeżeli
jakiekolwiek materiały są wadliwe, Neogen dostarczy produkt zastępczy. Kupujący ponosi całkowite
ryzyko i odpowiedzialność za wyniki wynikające z użycia tego produktu. Nie ma gwarancji
sprzedawalności tego produktu, zdolności użytkowej do różnych celów. Neogen nie powinien być
odpowiedzialny za żadne uszkodzenia, włączając specjalne lub wynikające, lub koszty wynikające
bezpośrednio lub pośrednio ze stosowania produktu.
Diagnostyka Rolno-Spożywcza
Sprzedaż i Serwis : +48 22 853 45 80/76
[email protected]