ETV6 FISH DNA Probe, Split Signal Nr kat. Y5400

ETV6 FISH DNA Probe, Split Signal
Nr kat. Y5400
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Sonda genetyczna ETV6 FISH DNA Probe, Split Signal, jest przeznaczona do wykrywania metodą hybrydyzacji
fluorescencyjnej in situ (FISH, fluo rescence in situ hybridization) translokacji obejmujących gen ETV6
chromosomu 12p13. W warunkach uŜywania sondy do badań cytologicznych zaleca się uŜywanie zestawu
Dako Cytology FISH Accessory Kit, nr kat. K5499.
Interpretację wyników w oparciu o historię choroby pacjenta oraz inne testy diagnostyczne powinien
przeprowadzić pracownik uprawniony do wykonywania takich badań.
Wstęp
Ludzki gen ETV6 (ETS Variant gene 6, znany równieŜ jako TEL) składa się z 8 egzonów o wielkości ~240 kb
na chromosomie 12, prąŜek p13 (1, 2). Gen ETV6 koduje czynnik transkrypcji niezbędny swoiście do
hemopoezy w szpiku kostnym(3). Białko ETV6 zawiera dwie domeny o kluczowym znaczeniu: domenę
dimeryzacji 5´ typu "helisa-pętla-helisa" (HLH, 5´ helix-loop-helix dimerization), kodowaną przez egzony 3 i 4
oraz domenę wiązania DNA 3´swoistego dla transformacji E26 (3´ E26 transformation-specific DNA-binding),
kodowaną przez egzony 6-8 (2). Translokację ETV6 wykazano w przypadku róŜnych par chromosomów (4).
Dwie sondy genetyczne uŜywane do wykrywania translokacji obejmującej gen ETV6 metodą hybrydyzacji
fluorescencyjnej in situ z rozdzieleniem sygnału (split-signal FISH detection) opracowano tak, aby łączyły się po
obu stronach obszaru, który powszechnie jest miejscem złamań. Jednakowa lokalizacja obu sond powoduje
powstanie sygnału Ŝółtego, natomiast obecność translokacji w omawianym obszarze spowoduje rozdzielenie
sygnału Ŝółtego na oddzielne sygnały -- koloru zielonego (fluoresceina) i czerwonego (czerwień teksańska).
Miejsce docelowe (czerwone) Sonda DNA znakowana czerwienią teksańską (ETV6-TR) łączy się z mierzącym 264 kb segmentem,
połoŜonym w kierunku telomeru od miejsca złamań genu ETV6 chromosomu 12p13.
Miejsce docelowe (zielone)
Sonda DNA znakowana fluoresceiną (ETV6-Flu) łączy się z mierzącym 483 kb segmentem, połoŜonym w
kierunku centromeru od miejsca złamań genu ETV6 chromosomu 12p13.
Odstęp pomiędzy sondami
Odstęp pomiędzy ETV6-TR a ETV-Flu wynosi 44 kb.
Odczynnik dostarczony
Sonda ETV6 FISH DNA Probe, Split Signal stanowi mieszaninę dwóch sond DNA znakowanych
fluorochromem z nieznakowanymi sondami blokującymi PNA. Mieszanka sond DNA składa się z sondy
znakowanej fluoresceiną (ETV6-Flu) oraz sondy znakowanej czerwienią teksańską (ETV6-TR). Do badań
cytologicznych naleŜy uŜywać jej wraz z zestawem Dako Cytology FISH Accessory Kit, nr kat. K5499.
Odczynnik dostarczany jest w postaci płynnej, jako roztwór do hybrydyzacji, zawierający 45% formamid, 10%
siarczan dekstranu, 300 mmol/L NaCl, 5 mmol/L fosforan oraz czynnik hamujący. KaŜda fiolka zawiera 200 µL,
co wystarcza na wykonanie 20 badań (10 µL na badanie).
Swoistość
99.4%. Zdefiniowana jako średnia 6 niezaleŜnych zliczeń obejmujących 1050 komórek prawidłowej krwi
obwodowej.
Czułość
95.3%. Zdefiniowana jako średnia 6 niezaleŜnych zliczeń obejmujących 1050 komórek linii REH, wykazujących
obecność translokacji (5).
Wartość odcięcia
Próbkę naleŜy uznać za wykazującą obecność translokacji ETV6, gdy w warunkach zliczania z 50 komórek
odnotuje się ponad 4 incydenty z rozdzielonym sygnałem. Uwzględniając swoistość i czułość sondy zapewnia
to, Ŝe 99% wszystkich próbek zawierających mniej niŜ 2% komórek wykazujących rozdzielony sygnał zostanie
uznanych za niewykazujące translokacji, natomiast 99% wszystkich próbek zawierających ponad 12% komórek
wykazujących rozdzielony sygnał zostanie uznanych za wykazujące translokację. W razie wątpliwości naleŜy
ponownie dokonać zliczenia w próbce.
Środki ostroŜności
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Odczynnik zawiera ≥25-<50% formamid i ≥1-<3% chlorek sodu. Produkt jest oznaczony następującymi
symbolami:
(128789-001)
P04169PL_01_Y540029-2/2015.10 p. 1/2
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Niebezpieczeństwo
H360D
P201
P280
MoŜe działać szkodliwie na dziecko w łonie matki.
Przed uŜyciem zapoznać się ze specjalnymi środkami ostroŜności..
Stosować rękawice ochronne. Nosić okulary ochronne lub ochronę twarzy. Stosować
odzieŜ ochronną.
W PRZYPADKU naraŜenia lub styczności: Zwrócić się o pomoc lekarską.
Przechowywać pod zamknięciem.
Zawartość i pojemnik usuwać zgodnie z lokalnymi, regionalnymi, krajowymi i
międzynarodowymi przepisami.
P308 + P313
P405
P501
Przechowywanie
Przechowywać w ciemnym miejscu w temperaturze 2–8°C. Nie stosow ać po upływie terminu waŜności
podanego na opakowaniu. JeŜeli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane na ulotce
dołączanej do opakowania, UŜytkownik powinien je zweryfikować. Nie ma jednoznacznych oznak świadczących
o niestabilności tego produktu. Z tego względu jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od pacjentów,
naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego
nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem,
naleŜy się skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy Dako.
Piśmiennictwo
1. Golub TR, Barker GF, Lovett M, Gilliland DG. Fusion of PDGF receptor beta to a novel ets-like gene, tel, in
chronic myelomonocytic leukemia with t(5;12) chromosomal translocation. Cell 1994; 77:307-16.
2. Baens M, Peeters P, Guo C, Aerssens J, Marynen P. Genomic organization of TEL: the human ETSvariant gene 6. Genome Res 1996;6:404-13.
3. Wang LC, Swat W, Fujiwara Y, Davidson L, Visvader J, Kuo F, et al. The TEL/ETV6 gene is required
specifically for hematopoiesis in the bone marrow. Genes Dev 1998;12:2392-402.
4. van der Burg M, Poulsen TS, Hunger SP, Beverloo HB, Smit EME, Vang-Nielsen K, et al. Split-signal FISH
for detection of chromosome aberrations in acute lymphoblastic leukemia using a new PNA-based blocking
method. Leukemia 2004;18:895-908.
5. Cell line REH provided by DSMZ-German Collection of Microorganisms and Cell Cultures, Braunschweig,
Germany
Objaśnienie symboli
(128789-001)
N umer katalogo wy
Temp eratura
p rzech owywa nia
ZuŜyć przed
Wyrób med yczny do
d iag nostyki in vitro
C hron ić przed św iatłe m
Prod ucen t
Sp rawd zić w i nstrukcji
stoso wan ia
N umer serii
Piktog ram GHS
(dzia ł środki stro Ŝn ości)
P04169PL_01_Y540029-2/2015.10 p. 2/2
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17