Ćwiczenie 4: Wzrost i hodowla mikroorganizmów.

Ćwiczenie 4: Wzrost i hodowla mikroorganizmów.
1. Hodowla E. coli w pożywce płynnej. Wykreślanie krzywej wzrostu bakterii.
a) Zaszczepić 2 ml hodowli nocnej E. coli do kolby ze 100 ml pożywki płynnej.
b) Jedną kolbę umieścić w wytrząsarce, w temperaturze 37oC, a drugą pozostawić bez
wytrząsania w temperaturze pokojowej
c) Bezpośrednio po zaszczepieniu bakterii oraz w dostępach czasowych co 20 minut wykonać
pomiary OD600 stosując czystą pożywkę jako próbę odniesienia.
d) Na papierze milimetrowym wykreślić krzywą wzrostu bakterii dla hodowli (oś Y – OD; oś X
– czas inkubacji).
2. Szereg rozcieńczeń. Liczenie kolonii bakteryjnych-metoda posiewu powierzchniowego.
Studenci pracują w dwóch grupach
a) każda grupa wykonuje z nocnej hodowli E. coli rozcieńczenia w jałowej pożywce od 10-1 do
10-10
b) z pięciu ostatnich rozcieńczeń pobrać po 0,1 ml, nanieść na podłoże agarowe i wykonać
posiew na murawę
c) inkubować 24 godziny w 37°C
d) policzyć kolonie na płytkach, obliczyć ilość bakterii w 1 ml hodowli wyjściowej,
uwzględniając rozcieńczenie.
3. Ustalanie liczebności mikroorganizmów metodą miana.
Studenci pracują w dwóch grupach. Każda z grup przynosi próbkę gleby lub wody .
a) przyniesioną próbkę gleby zawiesić w wodzie jałowej w proporcji 1:10 (v/v), wytrząsać i
odstawić do osadzenia. Następnie zebrać ciecz znad warstwy gleby (rozcieńczenie 10-1). W
przypadku wody nie wykonujemy wstępnych rozcienczeń.
b) z ekstraktu glebowego lub próby wody wykonać szereg rozcieńczeń od 10-1 do 10-6 w
wodzie jałowej
c) ze wszystkich otrzymanych rozcieńczeń przenieść po 1 ml do otrzymanych probówek z
bulionem odżywczym (od największego do najmniejszego rozcieńczenia), dokładnie
wymieszać. Pozostaje jedna probówka jako kontrola.
d) inkubować 24 godziny w 37°C
e) Na podstawie obserwacji zmętnienia próbki odczytać miano bakterii, czyli największe
rozcieńczenie badanego materiału w którym stwierdzono wzrost mikroorganizmów.
______________________________________________________________________________
Zagadnienia teoretyczne.
Na czym polega hodowla stacjonarna bakterii? Kolejne fazy wzrostu bakterii w hodowli stacjonarnej. Co to
jest faza logarytmicznego wzrostu? Dlaczego w hodowli stacjonarnej komórki ostatecznie zamierają? Co to
jest czas generacji bakterii? Czy jest on taki sam dla wszystkich bakterii? Co to jest miano bakterii? Co to
jest OD? Przy jakiej długości fali mierzymy OD hodowli bakteryjnej? Jednostki CFU. Jakie są metody
bezpośrednie określania liczby drobnoustrojów? Jakie są metody pośrednie określania liczby
drobnoustrojów? W jaki sposób przygotowuje się seryjne rozcieńczenia? W jaki sposób można uzyskać
pojedyncze kolonie bakteryjne (co najmniej dwie metody)? Na czym polegają hodowla ciągła i hodowla
zsynchronizowana drobnoustrojów? Krzywe wzrostu bakterii w hodowli ciągłej i zsynchronizowanej.
Odżywianie i pobieranie pokarmu przez bakterie.