Monoclonal Mouse Anti-Human Mammaglobin Clone 304

Monoclonal Mouse
Anti-Human
Mammaglobin
Clone 304-1A5
Nr kat. M3625
Przeznaczenie
Do stosowania w diagnostyce in vitro
Przeciwciała przeznaczone do zastosowań laboratoryjnych, w celu identyfikacji jakościowej komórek wykazujących ekspresję
mammaglobiny w tkankach prawidłowych i nowotworowych, przy uŜyciu mikroskopii świetlnej i metod immunohistochemicznych (IHC).
Dodatni wynik odczynu ułatwia klasyfikację raka sutka. Interpretację kliniczną kaŜdego wybarwienia dodatniego lub jego braku naleŜy
uzupełnić badaniami morfologicznymi i histologicznymi z uŜyciem stosownych kontroli. Interpretację powinien przeprowadzić
wykwalifikowany patolog, w oparciu o historię kliniczną pacjenta oraz inne testy diagnostyczne.
Synonim
Synonim przeciwciała: MGA
Synonim antygenu: Mam-1A5
Streszczenie i informacje ogólne
Mammaglobina to białko złoŜone z 93 aminokwasów wykazujące homologię do innych białek z rodziny globulin wydzielniczych/uteroglobulin,
pierwotnie zidentyfikowane w badaniach róŜnicowych ekspresji cDNA linii komórkowych raka sutka.1 Ekspresję mammaglobiny stwierdzono
równieŜ metodą RT-PCR w szeregu tkanek złośliwych i niezłośliwych pochodzących z dróg rodnych kobiet.2 Ekspresję genu mammaglobiny
i samego białka wykazano w tkankach nowotworów sutka i w podzbiorze komórek prawidłowego nabłonka sutka w gronach z płacikami typu
I i II oraz w komórkach nabłonka walcowatego przewodzików końcowych.3 Ekspresję mammaglobiny stwierdzono metodami IHC w dobrze,
umiarkowanie i słabo zróŜnicowanych inwazyjnych rakach przewodowych oraz metodą RT-PCR w komórkach przerzutowego i ukrytego
raka sutka.3,4 Ekspresja mammaglobiny jest w duŜym stopniu ograniczona do tkanek sutka, a białka tego nie wykryto w większości badanych
typów tkanek prawidłowych, z wyjątkiem skóry.1
Zobacz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące części instrukcji do
systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie
preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia
metody.
Dostarczany odczynnik
Nr kat. M3625
Mysie przeciwciała monoklonalne są dostarczane w postaci nadsączu hodowli tkankowej w buforze Tris-HCl o stęŜeniu 0,05 mol/l i pH 7,2,
zawierającym azydek sodu o stęŜeniu 0,015 mol/l. Produkt zawiera białko stabilizujące.
Klon: 304-1A51 Izotyp: IgG1, kappa
StęŜenie mysich lgG [mg/L]: patrz etykieta na fiolce.
Preparat M3625 moŜe być stosowany w rozcieńczeniu 1:100 podczas IHC przy uŜyciu systemu detekcji EnVision™+. Podane informacje
mają charakter wyłącznie orientacyjny. Optymalne stęŜenie przeciwciał moŜe się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału i sposobu jego
przygotowania. Optymalne stęŜenie powinno być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium.
Immunogen
Oczyszczone rekombinowane białko mammaglobina zawierające aminokwasy 15-93.1
Swoistość
Donoszono o reaktywności monoklonalnych przeciwciał mysich przeciwko mammaglobinie z epitopem o strukturze konformacyjnej, o czym
świadczył brak reaktywności w testach ELISA z nakładającymi się peptydami odpowiadającymi sekwencji mammaglobiny. W testach
Western Blot klon 304-1A5 reaguje z rekombinowaną mammaglobiną i z lizatami z linii komórkowej raka sutka MDA-MB-415 oraz z linii
komórkowej guzów pierwotnych sutka 450-17. Nie stwierdza się reaktywności z komórkami z linii pierwotnego raka sutka, 450-88. Mimo Ŝe
przewidywana masa cząsteczkowa mammaglobiny wynosi 9 kD, przeciwciała przeciwko mammaglobinie w testach Western Blot wykrywały
prąŜki 14 kD i 21 kD. Postać mammaglobiny o masie 9 kD wykrywano w testach Western Blot po enzymatycznej deglikozylacji MDA-MB415, co świadczy o glikozylacji mammaglobiny.1
Materiały wymagane, ale niedostarczane
Zobacz Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako i/lub instrukcje do systemu detekcji. Zalecany
rozcieńczalnik do stosowania przy odczynach IHC:
Antibody Diluent (nr kat. S0809)
Zalecana ujemna kontrola odczynów IHC:
Mouse IgG1 (nr kat. X0931)
(113642-002)
306574PL_001 s. 1/3
Środki ostroŜności
1. Odczynniki są przeznaczone dla przeszkolonych UŜytkowników.
2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. StęŜenie NaN3 występujące w
produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub miedzią, wchodzącymi w skład
instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali. Przy usuwaniu resztek odczynnika uŜywać duŜych ilości
wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się azydków w instalacji kanalizacyjnej.
3. Podobnie jak w przypadku kaŜdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, naleŜy stosować odpowiednie procedury
postępowania.5
4. NaleŜy stosować właściwe wyposaŜenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą bądź oczami.
5. Niewykorzystane odczynniki naleŜy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i ogólnokrajowymi.
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2–8 °C. Nie nale Ŝy uŜywać odczynników po upływie terminu waŜności podanego na fiolce. JeŜeli odczynniki
są przechowywane w warunkach innych niŜ podane na ulotce dołączanej do opakowania, UŜytkownik powinien je zweryfikować. Nie ma
jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności tego produktu. Dlatego równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od
pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić
róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem wsparcia
technicznego firmy Dako.
Przygotowanie próbek
Skrawki parafinowe
Przeciwciała przeciwko mammaglobinie moŜna stosować do skrawków utrwalanych w formalinie i zatapianych w parafinie. Nie zaleca się
trawienia tkanki enzymami proteolitycznymi.
Po odparafinowaniu, przed wykonaniem odczynu IHC skrawki powinny być poddane obróbce cieplnej (odmaskowaniu antygenu). Cieplne
odmaskowanie antygenu (ang. Heat-induced epitope retrieval — HIER) polega na umieszczeniu skrawków w ogrzanym uprzednio roztworze
buforu i utrzymaniu temperatury w kąpieli wodnej (95–99 °C). Do odmaskowania HIER mo Ŝna uŜywać równieŜ innych źródeł ciepła po
zweryfikowaniu ich pod kątem zgodności z zalecaną procedurą. Zaleca się stosowanie protokołu ogrzewania HIER przez 40 minut w
temperaturze 95–99 °C. Po zako ńczeniu ogrzewania naleŜy odstawić pojemnik z buforem zawierającym preparaty do ostygnięcia w
temperaturze pokojowej przez 20 minut. Po zakończeniu HIER dokładnie przepłukać roztworem buforu lub wodą dejonizowaną. W celu
uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych zaleca się stosowanie szkiełek Silanized Slides (nr kat. S3003).
Zaleca się stosowanie roztworu do odmaskowania antygenu, Target Retrieval Solution pH 9,0 (nr kat. S2368) lub 10x Concentrate (nr kat.
S2367).
Skrawki mroŜakowe i rozmazy cytologiczne
Przeciwciała przeciwko mammaglobinie mogą być stosowane do odczynów na utrwalonych w acetonie skrawkach mroŜakowych lub
utrwalonych rozmazach cytologicznych.
Wykonanie odczynu
Postępować według procedury, stosownie do wybranego systemu detekcji.
Interpretacja odczynu
Przeciwciała przeciwko mammaglobinie dają odczyn cytoplazmatyczny i/lub błonowy.
Charakterystyka wydajnościowa
Tkanki prawidłowe1
Rodzaj tkanki (liczba testowanych
przypadków)
Gruczoły sutkowe (10)
Jelito grube (5)
Nerki (6)
Wątroba (3)
Płuca (4)
Mózg (3)
Serce (2)
Szpik kostny (1)
Nadnercza (3)
Szyjka macicy (2)
Skóra (7)
Dwunastnica (2)
Pęcherzyk Ŝółciowy (1)
Jelito kręte (2)
Jajniki (4)
Trzustka (2)
Ślinianki przyuszne (1)
Gruczoł krokowy (4)
Śledziona (3)
Jądra (1)
Mięśnie szkieletowe (1)
Endometrium (3)
(113642-002)
Składniki komórkowe dające dodatni odczyn
5/10 komórek nabłonka przewodowego
0/5
0/6
0/3
0/4
0/3
0/2
0/1
0/3
0/2
7/7 komórek nabłonkowych wyściełających
gruczoły apokrynowe i ekrynowe potowe
0/2
0/1
0/2
0/4
0/2
0/1
0/4
0/3
0/1
0/1
0/3
306574PL_001 s. 2/3
Tkanki nieprawidłowe1,6,7
Rodzaj nowotworu (liczba testowanych przypadków)
Rak sutka (35)
Naciekowy przewodowy rak sutka (IDC) (96)
Rak endometrium (4)
Międzybłoniak nabłonkowy (EM) (16)
Rak przewodu pokarmowego (4)
Rak narządów moczowo-płciowych (2)
Rak płuc (32)
Rak jajnika (9)
Rak surowiczy brodawkowaty jajnika (OSPC) (21)
Rak guczołowy płuc (PAC) (23)
Rak endometrioidalny macicy (UEC) (18)
Liczba preparatów z
nowotworów dających
odczyn dodatni
23/35
78/96
0/4
1/16
0/4
0/2
0/32
0/9
0/21
6/23
6/18
Piśmiennictwo
1. Fanger GR, Houghton RL, Retter MW, Hendrickson RC, Babcook J, Dillon DC, Durham MD, Reynolds LD, Johnson JC, Carter D,
Fleming TP, Roche PC, Persing DH, Reed SG. Detection of mammaglobin in the sera of patients with breast cancer. Tumour Biol
2002;23(4):212-21
2. Grünewald K, Haun M, Fiegl M, Urbanek M, Müller-Holzner E, Massoner A, Riha K, Propst A, Marth C, Gastl G. Mammaglobin
expression in gynecologic malignancies and malignant effusions detected by nested reverse transcriptase-polymerase chain reaction.
Lab Invest 2002;82(9):1147-53
3. Watson MA, Dintzis S, Darrow CM, Voss LE, DiPersio J, Jensen R, Fleming TP. Mammaglobin expression in primary, metastatic, and
occult breast cancer. Cancer Res 1999;59:3028-31
4. Min CJ, Tafra L, Verbanac KM. Identification of superior markers for polymerase chain reaction detection of breast cancer metastases
in sentinel lymph nodes. Cancer Res 1998;58(20):4581-4
5. National Committee for Clinical Laboratory Standards. Protection of laboratory workers from instrument biohazards and infectious
diseases transmitted by blood, body fluids, and tissue; approved guideline. Villanova, PA. 1997; Order code M29-A
6. Ciampa A, Fanger G, Khan A, Rock KL, Xu B. Mammaglobin and CRxA-01 in pleural effusion cytology: potential utility of distinguishing
metastatic breast carcinomas from other cytokeratin 7-positive/cytokeratin 20-negative carcinomas. Cancer 2004;102(6):368-72
7. Stachurski D, Fanger G, Xu B, Edminston K, Rock KL, Khan A. CRxA-01 and mammaglobin expression in breast cancer: potential role
in differentiating breast cancer from other CK7+/CK20- tumors. (205) Mod Path 2003;16(1):48A
Edition 07/07
(113642-002)
306574PL_001 s. 3/3