microphthalmia transcription factor

Monoclonal Mouse
Anti-Human MITF
(microphthalmia transcription factor)
Clone D5
Nr kodu M3621
Przeznaczenie
Do stosowania w diagnostyce in vitro.
Przeciwciała przeznaczone do zastosowań laboratoryjnych, w celu identyfikacji jakościowej komórek wykazujących ekspresję MITF w
tkankach prawidłowych i nowotworowych, przy użyciu mikroskopii świetlnej i metod immunohistochemicznych (IHC). Wyniki dodatnie
wykorzystuje się w klasyfikacji czerniaka.3 Zastosowanie panelu przeciwciał ułatwia identyfikację i różnicowanie. Interpretacja wyniku musi
przebiegać z uwzględnieniem kontekstu klinicznego oraz wyników innych metod diagnostycznych przez wykwalifikowanego patologa.
Synonim:C
zynnik transkrypcyjny małoocza
Streszczenie i informacje ogólne
MITF (czynnik transkrypcyjny małoocza), czynnik transkrypcyjny typu podstawowy-heliks-pętla-heliks-suwak leucynowy (bHLHzip), reguluje
rozwój i przeżywalność melanocytów i nabłonka pigmentowego siatkówki oraz uczestniczy w transkrypcji genów enzymów pigmentacyjnych,
np. tyrozynazy, TRP1 i TRP2.2,4 Wykazano fosforylację MITF przez kinazę MAP w odpowiedzi na aktywację c-Kit, prowadzącą do
zwiększenia aktywności transkrypcyjnej MITF.1 Mutacje genu MITF są związane z chorobą dziedziczoną w sposób dominujący autosomalny.
Choroba manifestująca się głuchotą i zaburzeniami pigmentacji jest określana jako zespół Waardenburga typu 2A.5 Istnieje szereg izoform
MITF, w tym MITF-A, MITF-B, MITF-C, MITF-H oraz MITF-M, które różnią się domeną na końcu aminowym oraz sposobami ekspresji.
Izoforma MITF-M występuje wyłącznie w liniach komórkowych melanocytów.4
Przeciwciała przeciwko MITF rozpoznają białko jądrowe, które podlega ekspresji w większości pierwotnych i przerzutowych złośliwych
czerniaków nabłonkowatych, jak również w prawidłowych melanocytach, znamionach łagodnych i znamionach dysplastycznych.
Przeciwciała przeciwko MITF badano z wieloma różnymi nowotworami innymi niż czerniak, obserwując reaktywność immunologiczną
jedynie w przypadku nielicznych guzów.6,7,8
Zobacz dokument „Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych” firmy Dako lub następujące części instrukcji do
systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie
preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia
metody.
Dostarczany odczynnik
Przeciwciała przeciwko MITF są dostarczane w postaci płynnej jako nadsącz hodowli tkankowej (zawierający płodową surowicę bydlęcą),
dializowany wobec roztworu Tris-HCl o stężeniu 0,05 mol/l , pH 7,2 i azydku sodu o stężeniu 0,015 mol/l. Zawiera białko stabilizujące.
Klon: D51 Izotyp: IgG1, kappa
Stężenie mysich lgG [mg/l]: zobacz etykietę na fiolce.
Preparat M3621 może być stosowany w rozcieńczeniu 1:100 podczas IHC przy użyciu systemu detekcji EnVision+™. Podane wartości mają
charakter wyłącznie orientacyjny. Optymalne stężenie przeciwciał może się zmieniać w zależności od rodzaju materiału i sposobu jego
przygotowania. Optymalne stężenie powinno być określone indywidualnie w każdym laboratorium.
Immunogen
Białko fuzyjne histydyny fragmentu Taq-Sac z końcową grupą aminową ludzkiego cDNA MITF1,2
Swoistość
W badaniu Western blot linii ludzkich komórek czerniaka, 501mel, przeciwciała przeciwko MITF wykazują prążki 54 i 60 kD, co odpowiada
wariantom MITF różniącym się stanem fosforylacji. Swoistość wykazano również w badaniach mobilności na żelu, w których przeciwciała
przeciwko MITF powodowały wystąpienie swoistej migracji typu supershift w przypadku MITF, nie wywołując migracji innych czynników
związanych z bHLHzip, np. TFEB, TFEC i TFE3.1
Materiały wymagane, ale niedostarczane
Zobacz „General Instructions for Immunohistochemical Staining” i (lub) „Instrukcje” do systemu detekcji. Wymagany rozcieńczalnik
(rozcieńczalniki) do stosowania przy odczynach IHC:
Antibody Diluent (rozcieńczalnik do przeciwciał) (nr kodu S0809)
Zalecana ujemna kontrola odczynów IHC:
Przeciwciała Mouse IgG1 (mysie IgG1) (nr kodu X0931)
(109217-002)
305848PL_001 s. 1/4
Środki ostrożności
1. Odczynniki są przeznaczone dla przeszkolonych Użytkowników.
2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. Stężenie NaN3 występujące w
produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub miedzią, wchodzącymi w skład
instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali. Przy usuwaniu resztek odczynnika używać dużych ilości
wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się azydków w instalacji kanalizacyjnej. 9,10
3. Podobnie jak w przypadku każdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, należy stosować odpowiednie procedury
postępowania.
4. Należy stosować właściwe wyposażenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą bądź oczami.
5. Niewykorzystane odczynniki należy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i ogólnokrajowymi.
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie należy używać odczynników po upływie terminu ważności podanego na fiolce. Jeżeli odczynniki
są przechowywane w warunkach innych niż podane na ulotce dołączanej do opakowania, Użytkownik powinien je zweryfikować. Nie ma
jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności tego produktu. Dlatego równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od
pacjentów należy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie można wyjaśnić
różnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, należy się skontaktować z działem wsparcia
technicznego firmy Dako.
Przygotowanie materiału
Skrawki parafinowe
Przeciwciała przeciwko MITF można stosować do skrawków utrwalanych w formalinie i zatapianych w parafinie. Nie zaleca się trawienia
tkanki enzymami proteolitycznymi.
Po odparafinowaniu, przed wykonaniem odczynu IHC skrawki powinny być poddane obróbce cieplnej (odmaskowaniu antygenu). Cieplne
odmaskowanie antygenu pierwotnego (Heat-induced epitope retrieval — HIER) polega na umieszczeniu skrawków w roztworze buforu i
ogrzewaniu w szybkowarze (121 °C). Zaleca się stosowanie protokołu ogrzewania w szybkowarze ustawionym na 121 °C przez 5 minut. Po
zakończeniu HIER dokładnie przepłukać roztworem buforu lub wodą dejonizowaną. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do
szkiełek podstawowych, zaleca się stosowanie szkiełek typu Silanized Slides (silanizowanych) (nr kodu S3003). Zaleca się stosowanie
preparatu Target Retrieval Solution (roztworu do odzyskiwania antygenu) (nr kodu S1700) lub 10x Concentrate (10x koncentrat) (nr kodu
S1699).
Skrawki mrożakowe i rozmazy cytologiczne
Przeciwciała przeciwko MITF mogą być stosowane do odczynów na utrwalonych w acetonie skrawkach mrożakowych lub utrwalonych
rozmazach cytologicznych.
Wykonanie odczynu
Postępować według stosownej procedury dla wybranego systemu detekcji.
Interpretacja odczynu
Przeciwciała przeciwko MITF dają odczyn jądrowy.
Charakterystyka wyników
Prawidłowe tkanki11
Rodzaj tkanki (liczba testowanych
przypadków)
Skóra6
Znamiona6
Znamiona dysplastyczne6
Nadnercza (3)11
Szpik kostny (3)11
Mózgowie, móżdżek (3)11
Mózg, mózgowie (3)11
Gruczoły sutkowe (3)11
Szyjka macicy (3)11
Jelito grube (3)11
Przełyk (3)11
Serce (3)11
Nerki (3)11
Wątroba (3)11
Płuca (3)11
Komórki międzybłonka (3)11
Nerwy obwodowe (3)11
Jajniki (3)11
Trzustka (3)11
Przytarczyce (3)11
Przysadka mózgowa (3)11
Gruczoł krokowy (3)11
Ślinianki (3)11
(109217-002)
Składniki komórkowe dające dodatni odczyn
jądra melanocytów
jądra melanocytów
jądra melanocytów
0/3
0/3
0/3
0/3
0/3
0/3
0/3
0/3
1/3 jądra miocytów
0/3
0/3
1/3 jądra i cytoplazma makrofagów pęcherzykowych (słabo)
0/3
0/3
0/3
0/3
0/3
1/3 cytoplazma ziarnista nielicznych komórek przedniego płata
przysadki*
0/3
0/3
305848PL_001 s. 2/4
Mięśnie szkieletowe (3)11
0/3
3/3 jądra melanocytów
Skóra (3)11
Jelito cienkie (3)11
0/3
Śledziona (3)11
0/3
Żołądek (3)11
0/3
Jądra (3)11
0/3
Grasica (3)11
0/3
Tarczyca (3)
0/3
Migdałki (3)11
0/3
Macica (3)11
1/3 jądra i cytoplazma komórek podścieliska endometrium
*za wynik dodatni uznawano tylko immunoreaktywność jądrową
Nieprawidłowe tkanki 5, 6
Rodzaj tkanki (liczba testowanych
przypadków)
Czerniak złośliwy (76)6
In situ (19)6
Pierwotny (50)6
Przerzutowy (7)6
Czerniak nabłonkowaty (32)7
Czerniak (44)8
Szkliwiak (1)7
Mięsak naczyniowy (2)7
Inwazyjny przewodowy rak sutka (10)6
Składniki komórkowe dające dodatni odczyn
76/76 jądra komórek guza
19/19 jądra komórek guza
50/50 jądra komórek guza
7/7 jądra komórek guza
29/32 jądra komórek guza
44/44 jądra komórek guza
0/1
0/2
0/10 jądra komórek guza
2/10 cytoplazma komórek guza*
1/8 jądra komórek guza (wieloogniskowo i słabo)
0/2
0/18
0/10
0/2
0/2
0/3
2/5 jądra komórek guza (ogniskowo)
0/6
0/5
0/19
1/1 jądra komórek guza (słabo)
Rak sutka (8)7
Rakowiak (2)7
Rak jelita grubego (18)7
Rak gruczołowy endometrium (10)6
Mięsak podścieliska endometrium (2)7
Rak przełyku (2)7
Rak żołądka (3)7
Mięsak gładkokomórkowy (5)7
Rak gruczołowy płuc (6)7
Rak drobnokomórkowy płuc (5)7
Rak płaskonabłonkowy płuc (19)6, 7
Złośliwy guz mieszany z przewodów
Mullera (1)7
0/3
Złośliwy guz otoczki nerwu
obwodowego (3)7
Rak części nosowej gardła (1)7
0/1
Kostniakomięsak (1)7
0/1
Rak jajnika (1)7
0/1
Rak trzustki (1)7
0/1
Rak brodawkowaty tarczycy (2)7
0/2
Guz chromochłonny nadnerczy (1)7
0/1
Rak gruczołu krokowego (2)7
0/2
Rak nerki (17)7
2/17 jądra komórek guza
Mięsak prążkowanokomórkowy (1)7
0/1
Rak płaskonabłonkowy sromu (10)6
0/10
7
Maziówczak (1)
0/1
Rak jądra (10)6
0/10
Grasiczak (1)7
0/1
Rak tarczycy (10)6
0/10
Guz Wilmsa (1)7
0/1
*za wynik dodatni uznawano tylko immunoreaktywność jądrową
Piśmiennictwo
1. Hemesath TJ, Price ER, Takemoto C, Badalian T, Fisher DE. MAP kinase links the transcription factor Microphthalmia to c-Kit signalling
in melanocytes. Nature. 1998; 391(6664):298
2. Tachibana M, Perez-Jurado LA, Nakayama A, Hodgkinson CA, Li X, Schneider M, Miki T, Fex J, Francke U, Arnheiter H. Cloning of
MITF, the human homolog of the mouse microphthalmia gene and assignment to chromosome 3p14.1-p12.3. Hum Mol Genet. 1994;
3(4):553
3
Chang KL, Folpe AL. Diagnostic utility of microphthalmia transcription factor in malignant melanoma and other tumors. Adv Anat Pathol.
2001; 8(5):273
4. Widlund HR, Fisher DE. Microphthalamia-associated transcription factor: a critical regulator of pigment cell development and survival.
Oncogene. 2003; 22(20):3035
(109217-002)
305848PL_001 s. 3/4
5.
Tassabehji M, Newton VE, Read AP. Waardenburg syndrome type 2 caused by mutations in the human microphthalmia (MITF) gene.
Nat Genet. 1994; 8(3):251
6. King R, Weilbaecher KN, McGill G, Cooley E, Mihm M, Fisher DE. Microphthalmia transcription factor. A sensitive and specific
melanocyte marker for MelanomaDiagnosis. Am J Pathol. 1999; 155(3):731
7. Granter SR, Weilbaecher KN, Quigley C, Fisher DE. Role for microphthalmia transcription factor in the diagnosis of metastatic
malignant melanoma. Appl Immunohistochem Mol Morphol. 2002; 10(1):47
8. Dorvault CC, Weilbaecher KN, Yee H, Fisher DE, Chiriboga LA, Xu Y, Chhieng DC. Microphthalmia transcription factor: a sensitive and
specific marker for malignant melanoma in cytologic specimens. Cancer. 2001; 93(5):337
9. Department of Health, Education and Welfare, National Institute for Occupational Safety and Health, Rockville, MD. “Procedures for the
decontamination of plumbing systems containing copper and/or lead azides.” DHHS (NIOSH) Publ. No. 78-127, Current 13. August 16,
1976
10. Centers for Disease Control Manual Guide – Safety Management, No. CDC-22, Atlanta, GA. “Decontamination of laboratory sink drains
to remove azide salts.” April 30, 1976
11. IHC003 Report On File
(109217-002)
305848PL_001 s. 4/4