ćwiczenie 3

ĆWICZENIE 3
Sterylizacja nasion oraz wybranych tkanek roślinnych
1. Przygotować „pakieciki” z bibuły Whatmann nr1 wg schematu podanego przez
Prowadzącego zajęcia i napełnić je wybranymi nasionami (każda para przygotowuje
jeden „pakiecik”).
UWAGA: Odtąd wszystkie czynności należy wykonywać w komorze z laminarnym
przepływem powietrza.
2. Umieścić „pakieciki” oraz fragmenty tkanek roślinnych w zlewce z 1% roztworem
Triton X100 na 15 minut, w celu zmniejszenia napięcia powierzchniowego
sterylizowanego materiału.
3. Następnie umieścić „pakieciki” i tkanki w zlewce z 70% EtOH na 5-10 sekund
(sterylizacja wstępna).
4. Za pomocą sterylnej pensety, dobrze opalonej w płomieniu palnika, umieścić nasiona
rzodkiewnika oraz tkanki roślinne w słoiku z 2% roztworem podchlorynu sodu (20%
Ace), w celu wysterylizowania materiału.
Czas trwania sterylizacji: 15 minut – nasiona, 5-10 minut tkanki roślinne.
5. Po sterylizacji nasiona i tkanki roślinne należy 3-krotnie wypłukać sterylną wodą
destylowaną (po 15 minut, w każdej z trzech zlewek).
6. Wysterylizowane nasiona i tkanki przełożyć do probówek i słoików z pożywką MS bez
hormonów i umieścić w fitotronie.