Ćwiczenie nr 12

Ćwiczenie nr 12
ELEKTROFOREZA BIBUŁOWA
Część II
Przeprowadzenie rozdziału elektroforetycznego barwników metodą elektroforezy
bibułowej oraz wyznaczenia ładunku barwników.
Sprzęt:
1) zasilacz 4-stopniowy: 100; 150; 225; 300 V prądu stałego
2) komora wilgotna tzw. hygrostat, 6-paskowa
3) pipetka, probówki, krystalizator
Opis sprzętu:
Zasilacz półprzewodnikowy 4-stopniowy posiada na płycie czołowej miliamperomierz, u
góry przełącznik napięcia prądu stałego (100; 150; 225; 300 V), na prawo u dołu
wyłącznik sieci prądu zmiennego 220V i lampkę sygnalizacyjną. Na lewo u dołu zaciski
dla przewodów komory wilgotnej i przełączniki biegunowości. Komora wilgotna zawiera
dwie wanienki winidurowe, przedzielone przegrodą na dwie części: labirynt i komora
elektrodowa. Obie te części łączą się przez okrągły otwór, na który zakładamy jako
błonę połprzepuszczalną celofan. W części elektrodowej są wmontowane taśmowe
elektrody ze stali nierdzewnej.
Odczynniki:
0,1% roztwory barwników: błękit bromotymolowy , czerń krezolowa , błękit toluidynowy ,
czerń eriochromowa , rodamina 6G , chryzoidyna i CH3COOH (1 mol/dm3)
Wykonanie ćwiczenia:
1. Włóż wtyczkę do gniazdka sieci 220 V.
2. Podłączyć do zacisków przewody wychodzące z komory wilgotnej. UWAGA! Jeżeli
dźwignia przełącznika sieciowego jest skierowana w górę, biegundodatni jest na górnym
zacisku.
3. Komorę wilgotną napełnić buforem.
4. Na paskach bibuły Whatman 1 o szerokości 3,5 cm i długości 28,5 cm zaznaczyć
zwykłym ołówkiem na środku „linię startową". Paski zwilżyć CH3COOH o stęż. 1mol/dm3
i umieścić na rurkach winidurowych w komorze wilgotnej. Po 30 min na trzy paski bibuły
nałożyć ok. 0,02 cm3 roztworu analizowanych barwników (dowolnie wybranych) na
każdym pasku jeden barwnik a na czwarty pasek nanieść dwa barwniki (dowolnie
wybrane). W celu uniknięcia tzw. efektu brzeżnego, próby nałożyć na linię startową tak,
aby roztwór nie dotykał skraju paska.
Włączyć napięcie 300V; czas elektroforezy wynosi ok. 2 godz. Po wyłączeniu prądu
zdjąć pokrywę komory, wyjąć paski i wysuszyć na powietrzu.