Rapid CARB Blue Kit 98023

Instrukcja użytkowania testu Rapid CARB Blue Kit (98023)
PRZEGLĄD:
DATA WYDANIA:
JĘZYK:
MK
06.2014
Polski
WYŁĄCZNIE DO STOSOWANIA W DIAGNOSTYCE IN VITRO
GRUPA PRODUKTÓW:
Zestawy do wykrywania mechanizmów oporności.
PRODUCENT:
ROSCO Diagnostica
Denmark.
PRZEZNACZENIE:
Tabletki stosowane są do szybkiego potwierdzania in vitro zdolności bakterii do
produkcji karbapenemaz. Metoda ta opracowana została dla Acinetobacter
spp., Enterobacteriaceae oraz Pseudomonas spp.
Oksacylinazy produkowane przez Acinetobacter spp. mogą być wykryte przy
wykorzystaniu tego zestawu, podczas gdy nie są wykrywane przy użyciu
zestawów z zastosowaniem buforu lizującego.
GRUPA ODBIORCÓW:
Wyłącznie do użytku przez profesjonalnie przeszkolony personel.
A/S,
Taastrupgaardsvej
30,
DK-2630
Taastrup,
ZASADA DZIAŁANIA:
Bakterie potencjalnie produkujące karbapenemazy są obecnie wykrywane
głównie dzięki badaniu antybiotykooporności na leki z grupy karbapenemów
(Imipenem, Meropenem i Ertapenem). Zredukowane strefy zahamowania
wzrostu wokół krążków z tymi karbapenemami wskazują na produkcję
karbapenemaz. Szybka metoda opiera się na identyfikacji hydrolizy pierścienia
karbapenemu w obecności indykatora. Podążając za tą zasadą ROSCO
stworzyło nowy DIATAB; Imipenem (x2) + Błękit bromotymolowy. Badanie jest
wykonywane szybko, a odczytu wyników można dokonać w czasie od 30 do 60
minut od momentu rozpoczęcia reakcji. Nie ma potrzeby stotowania buforu
lizującego. Tak więc, korzystając z tego zestawu w rutynowych badaniach
wykrywania bakterii produkujących karbapenemazy, można oszczędzić czas i
nakład pracy w laboratorium.
Główną ideą jest pomoc laboratoriom w wykonaniu ich własnych badań
przesiewowych w kierunku karbapenemaz.
SZCZEGÓŁOWE INSTRUKCJE:
Szczegółowa instrukcja użytkowania tabletek DIATABS firmy ROSCO powinna
być dostępna w każdym laboratorium pracującym z produktami do diagnostyki
ROSCO.
Najnowsze wydanie instrukcji użytkowania można bezpłatnie pobrać
u lokalnego dystrybutora, ze strony internetowej firmy ROSCO (www.rosco.dk)
lub bezpośrednio z ROSCO Diagnostica A/S:
E-mail: [email protected]
Fax:
+ 45 43 52 73 74
ZAWARTOŚĆ ZESTAWU:
1 fiolka z tabletkami: Imipenem (x2) + Błękit Bromotymolowy, o formule
zapewniającej maksymalną stabilność. Fiolka zawiera 50 tabletek, co
w rezultacie pozwala na wykonanie 50 testów.
1 fiolka z tabletkami: Diatabs CARB Blue Kontrola Negatywna, 50 tabletek.
1
PRZECHOWYWANIE/POSTĘPOWANIE:
O
Przechowywać w temperaturze 2-8 C w dostarczonym pudełku do daty
ważności podanej na etykiecie. Przed użyciem należy przez 30-60 minut
pozostawić tabletki w temperaturze pokojowej. Podana data ważności odnosi
się tylko do fiolek przechowywanych w odpowiedniej temperaturze. Trzymać
fiolki z dala od źródła światła i dużej wilgoci.
ŚRODKI OSTROŻNOŚCI:
Tylko do diagnostyki in vitro. Podczas pracy z materiałem potencjalnie
zakaźnym należy podjąć odpowiednie środki ostrożności oraz zachować
techniki pracy aseptycznej. Może być używany tylko przez odpowiednio
przeszkolony i wykwalifikowany personel laboratoryjny. Przed wyrzuceniem
należy wysterylizować wszystkie odpady zakaźne. Patrz Karta Charakterystyki.
MATERIAŁY WYMAGANE, ALE NIE ZAPEWNIONE:
0,9% NaCl o pH=8,5 (używając 0,01 N roztworu NaOH)
Uwaga: Wartość pH roztworu może spadać w trakcie przechowywania. Dlatego
też zawsze należy sprawdzić i ustawić pH na 8,5 przy użyciu 0,01 N roztworu
NaOH.
Nie potrzeba buforu lizującego!
Standardowe wyposażenie mikrobiologiczne – ezy, podłoża bakteriologiczne,
cieplarka itd., oraz odczynniki biochemiczne.
PROCEDURA:
Zawsze używać świeżych izolatów. W przeciwnym wypadku posiać/inkubować
izolat 2 razy przed badaniem.
Kolonie powinny być posiane na podłożu: Mueller-Hinton Agar z BD, Columbia
Agar krwią, TSA. MH Agar musi być suplementowany ZnSO4 w ilości 70 mg/l.
Jony cynku w podłożu Mueller-Hinton są potrzebne w celu wykrycia metalobeta-laktamaz VIM oraz NDM. Niektóre Mueller-Hintony, np. z bioMerieux, nie
zawierają wystarczającej ilości jonów cynku i dają fałszywie negatywne wyniki.
Nie używać kolonii z podłoży selektywnych (Drigalskiego, MacConkey itp.).
Dodać inokulum badanego szczepu (odzyskanego z antybiogramu) do 200 µl
0,9% roztworu NaCl o pH=8,5. Zawiesina powinna mieć gęstość minimum 2
w skali McFarlanda.
Wymieszać dokładnie zawiesinę przez 1 minutę i pozostawić w temperaturze
pokojowej na 30 minut.
Dodać 1 tabletkę Imipenem (x2) + Błękit Bromotymolowy i zamknąć probówkę.
Wymieszać przez 1-2 sekundy do całkowitego rozpadu tabletki.
O
Inkubować badaną probówkę w temperaturze 35-37 C przez 30 minut,
1 godzinę, 2 godziny.
Ten sam schemat postępowania powtórzyć dla Diatabs Kontroli Negatywnej
CARB Blue.
Hodowla krwi:
Zrobić subkulturę: Pobrać 2 ml agaru odżywczego zawierającego 0,12 µg/ml
imipenemu** i dodać 5 kropel (75µl) pozytywnej próbki krwi. Inkubować 2
O
godziny w temp. 37 C. Odwirować (10000x g, 5 minut). Przepłukać osad
sterylną wodą. Zawiesić osad bakteryjny w 200 µl 0,9% roztworu NaCl
o pH=8,5 i postępować według powyższej procedury.
**W celu uzyskania 0,12 µg/ml Imipenemu można użyć Diatabs Imipenem
300µg.
a) 1 Imipenem 300 µg (Diatabs) dodać do 5 ml 0,9% NaCl, mieszać przez
1 minutę i pozostawić w temperaturze pokojowej przez 30 minut. (60µg/ml)
b) Rozcieńczyć 1 ml supernatantu w 4 ml 0,9% NaCl (12 µg/ml)
c) Dodać 20 µl roztwory 12 µg/ml do 2 ml agaru odżywczego (0,12 IMP/ml)
Próbki moczu:
Pobrać 10 ml moczu (pozytywnego dlabakterii Gram (-)) i odwirować. Zawiesić
osad z bakterii w 200 µl 0,9% roztworu NaCl o pH=8,5 i postępować zgodnie
z opisaną wcześniej procedurą.
2
INTERPRETACJA WYNIKÓW:
Zmiana koloru z niebieskiej na żółtą oznacza reakcję pozytywną, wskazującą
na fakt, że badana bakteria wytwarza karbapenemazy.
Jeśli reakcja jest pozytywna po 30 minutach lub 1 godzinie nie jest konieczne
dalsze inkubowanie próbki. Próbka nie może być inkubowana dłużej niż
2 godziny, ponieważ kolor żółty wskazujący na wynik dodatni może zniknąć.
Jeżeli roztwór przyjmuje kolor zielony, a kontrola negatywna ma kolor niebieski,
wskazuje to na wynik dodatni.
Jeżeli roztwór przyjmuje kolor żółty, a kontrola negatywna ma kolor zielony,
wskazuje to na wynik dodatni.
Jeżeli kontrola negatywna przyjmuje kolor żółtawy, wyniki uznać jako
niejednoznaczne, niezależnie od wyniku uzyskanego dla próby testowej
Imipenem (x2) + Błękit bromotymolowy.
Uwaga: Niektóre Enterobacteriaceae produkujące OXA-48 (lub podobne, dla
których MIC dla Imipenemu ≤ 0,5 µg/ml) mogą dawać reakcję ujemną dla
Rapid CARB Blue Kit.
Szczepy podejrzane o produkcję karbapenemaz OXA-48 (lub podobne)
wykazują wysoką oporność na temocylinę (NeoSensitabs Temocillin 30 µg,
strefa < 12 mm).
Karbapenemazo pozytywne
Karbapenemazo negatywne
Imipenem (2) + Bł.
Bromotymolowy
Wszystkie gat.
Żółty
Żółty
Zielony
Zielony
Niebieski
oraz
oraz
Negatywna Kontrola
CARB Blue
Wszystkie gat.
Zielony / Niebieski
Zielony / Niebieski
Niebieski
Niebieski
Zielony
KONTROLA JAKOŚCI:
DIATABS
Imipenem (x2) + Błękit Bromotymolowy
Klebsiella
1705
Pozytywna
pneumoniae
Negatywna
BAA Escherichia coli ATCC 25922
LITERATURA:
1. Pires J et al.: Blue Carba, an easy biochemical test for detection of diverse carbapenemase
producers directly from bacterial cultures. J.Clin. Microbiol 51, 4281-4283, 2013.
2. Dortet L. et al.: Impact of isolation medium for detection of carbapenemase producing
Enterobacteriaceae using an updated version of Carba NP. test. J. Med. Microbiol 63, 772-776,
2014.
3
Dystrybutor:
4