Neo-Rapid CARB Kit 98024

Instrukcja użytkowania testu Neo-Rapid CARB Kit (98024)
(Nowa, ulepszona wersja 98021)
PRZEGLĄD:
DATA WYDANIA:
JĘZYK:
MK
11.2014
Polski
WYŁĄCZNIE DO STOSOWANIA W DIAGNOSTYCE IN VITRO
GRUPA PRODUKTÓW:
Zestawy do wykrywania mechanizmów oporności.
PRODUCENT:
ROSCO Diagnostica
Denmark.
PRZEZNACZENIE:
Tabletki stosowane są do szybkiego potwierdzania in vitro zdolności bakterii do
produkcji karbapenemaz. Metoda ta zalecana jest dla Enterobacteriaceae oraz
Pseudomonas aeruginosa. Nie ma zastosowania dla Acinetobacter spp.
GRUPA ODBIORCÓW:
Wyłącznie do użytku przez profesjonalnie przeszkolony personel.
A/S,
Taastrupgaardsvej
30,
DK-2630
Taastrup,
ZASADA DZIAŁANIA:
Bakterie potencjalnie produkujące karbapenemazy są obecnie wykrywane
głównie dzięki badaniu antybiotykooporności na leki z grupy karbapenemów
(Imipenem, Meropenem i Ertapenem). Zredukowane strefy zahamowania
wzrostu wokół krążków z tymi karbapenemami wskazują na produkcję
karbapenemaz. Szybka metoda opiera się na identyfikacji hydrolizy pierścienia
karbapenemu w obecności indykatora. Podążając za tą zasadą ROSCO
stworzyło nowy DIATABS; Imipenem (x2) + Indicator (CARB). Badanie jest
wykonywane szybko, a odczytu wyników można dokonać w czasie od 30 do 60
minut od momentu rozpoczęcia reakcji. Tak więc, korzystając z tego zestawu
w rutynowych badaniach wykrywania bakterii produkujących karbapenemazy,
można oszczędzić czas i nakład pracy w laboratorium.
Główną ideą jest pomoc laboratoriom w wykonaniu ich własnych badań
przesiewowych w kierunku karbapenemaz.
Wyższa zawartość Imipenemu w Neo-Rapid CARB Kit (98024) powoduje
mocniejsze zabarwienie roztworu i łatwiejsze rozróżnienie pomiędzy reakcją
pozytywną a negatywną, jak również zwiększa czułość testu.
Stabilność imipenemu w Diatabs Rosco (2 lata), jest konkurencyjna do
niestabilności roztworu imipenemu (2-4 dni) w teście CARBA NP.
SZCZEGÓŁOWE INSTRUKCJE:
Szczegółowa instrukcja użytkowania tabletek DIATABS firmy ROSCO powinna
być dostępna w każdym laboratorium pracującym z produktami do diagnostyki
ROSCO.
Najnowsze wydanie instrukcji użytkowania można bezpłatnie pobrać
u lokalnego dystrybutora, ze strony internetowej firmy ROSCO (www.rosco.dk)
lub bezpośrednio z ROSCO Diagnostica A/S:
E-mail: [email protected]
Fax:
+ 45 43 52 73 74
ZAWARTOŚĆ ZESTAWU:
2 fiolki z tabletkami 6 mm; Imipenem (x2) + Indicator (CARB), o formule
zapewniającej maksymalną stabilność. Każda fiolka zawiera 25 tabletek, co
w rezultacie pozwala na wykonanie 50 testów. Jedna fiolka z tabletkami 6 mm:
Diatabs CARB Kontrola Negatywna, 50 tabletek.
1
PRZECHOWYWANIE/POSTĘPOWANIE:
O
Przechowywać w temperaturze 2-8 C w dostarczonym pudełku do daty
ważności podanej na etykiecie. Przed użyciem należy przez 30-60 minut
pozostawić tabletki w temperaturze pokojowej. Podana data ważności odnosi
się tylko do fiolek przechowywanych w odpowiedniej temperaturze. Trzymać
fiolki z dala od źródła światła i dużej wilgoci.
ŚRODKI OSTROŻNOŚCI:
Tylko do diagnostyki in vitro. Podczas pracy z materiałem potencjalnie
zakaźnym należy podjąć odpowiednie środki ostrożności oraz zachować
techniki pracy aseptycznej. Może być używany tylko przez odpowiednio
przeszkolony i wykwalifikowany personel laboratoryjny. Przed wyrzuceniem
należy wysterylizować wszystkie odpady zakaźne. Patrz Karta Charakterystyki.
MATERIAŁY WYMAGANE, ALE NIE ZAPEWNIONE:
Bufor B-PER II, Bacterial Protein Extraction Reagent.
Standardowe wyposażenie mikrobiologiczne – ezy, podłoża
cieplarka itd., oraz odczynniki biochemiczne.
bakteriologiczne,
PROCEDURA:
Zawsze używać świeżych izolatów. W przeciwnym wypadku posiać/inkubować
izolat 2 razy przed badaniem.
Kolonie powinny być posiane na podłożu: Mueller-Hinton Agar, Columbia Agar
z krwią, TSA. MH Agar musi być suplementowany ZnSO4 w ilości 70 mg/l.
Jony cynku w podłożu Mueller-Hinton są potrzebne w celu wykrycia metalobeta-laktamaz VIM oraz NDM. Niektóre Mueller-Hintony, np. z bioMerieux, nie
zawierają wystarczającej ilości jonów cynku i dają fałszywie negatywne wyniki.
Nie używać kolonii z podłoży selektywnych (Drigalskiego, MacConkey itp.).
Dodać inokulum badanego szczepu (odzyskanego z antybiogramu) do
mieszaniny złożonej ze 100 µl 0,9% NaCl i 100 µl buforu lizującego Tris-HCl 20
mmol/l (B-PER II; Bacterial Protein Extraction Reagent, Thermo Scientific).
Można również użyć standardowego zbuforowanego reagentu Bug Buster Tris
(Novagen) o pH 7,5. Zawiesina powinna mieć gęstość minimum 4 w skali
McFarlanda.
Wymieszać dokładnie zawiesinę przez 1 minutę i pozostawić w temperaturze
pokojowej na 30 minut.
Dodać 50 µl zawiesiny bakterii do probówki z 100 µl 0,9% NaCl, a następnie
1 tabletkę Imipenem (x2) + Indicator (CARB) i zamknąć probówkę. Wymieszać
przez 1-2 sekundy do całkowitego rozpadu tabletki.
O
Inkubować badaną probówkę w temperaturze 35-37 C przez 30 minut,
1 godzinę, 2 godziny.
Ten sam schemat postępowania powtórzyć dla Diatabs Kontroli Negatywnej
CARB.
Hodowla krwi:
Zrobić subkulturę: Pobrać 2 ml bulionu odżywczego zawierającego 0,12 µg/ml
imipenemu** i dodać 5 kropel (75µl) pozytywnej próbki krwi. Inkubować 2
O
godziny w temp. 37 C. Odwirować (10000x g, 5 minut). Przepłukać osad
sterylną wodą. Zawiesić osad bakteryjny w 150 µl buforu lizującego TRIS-HCl i
postępować według powyższej procedury.
**W celu uzyskania 0,12 µg/ml Imipenemu można użyć Diatabs Imipenem
300µg.
a) 1 Imipenem 300 µg (Diatabs) dodać do 5 ml 0,9% NaCl, mieszać przez 1
minutę i pozostawić w temperaturze pokojowej przez 30 minut. (60µg/ml)
b) Rozcieńczyć 1 ml supernatantu w 4 ml 0,9% NaCl (12 µg/ml)
c) Dodać 20 µl roztwory 12 µg/ml do 2 ml agaru odżywczego (0,12 IMP/ml)
2
Próbki moczu:
Pobrać 10 ml moczu (pozytywnego dlabakterii Gram (-)) i odwirować. Zawiesić
osad z bakterii w 150 µl Buforu lizującego Tris-HCl i postępować zgodnie
z opisaną wcześniej procedurą.
INTERPRETACJA WYNIKÓW:
Zmiana koloru z czerwonej na żółtą oznacza reakcję pozytywną, wskazującą
na fakt, że badana bakteria wytwarza karbapenemazy.
Jeśli reakcja jest pozytywna po 30 minutach lub 1 godzinie nie jest konieczne
dalsze inkubowanie próbki. Próbka nie może być inkubowana dłużej niż
2 godziny, ponieważ kolor żółty wskazujący reakcję pozytywną może zniknąć.
W niektórych przypadkach po inkubacji uzyskuje się kolor pomarańczowy lub
żółtawy. To również oznacza wynik pozytywny dla testu, jeżeli kontrola
negatywna pozostaje czerwona.
Jeśli Kontrola Negatywna CARB zabarwi się na kolor żółtawy, wyniki uznać
jako niejednoznaczne, niezależnie od wyniku uzyskanego dla próby testowej
Imipenem (x2)+ Indicator (CARB).
Uwaga: Szczepy podejrzane o produkcję karbapenemaz OXA-48 wykazują
wysoką oporność na temocylinę (NeoSensitabs Temocillin, strefa < 12 mm).
KONTROLA JAKOŚCI:
DIATABS
Pozytywna
Imipenem (x2) + Indicator (CARB) Klebsiella pneumoniae BAA 1705
Negatywna
Escherichia coli ATCC 25922
LITERATURA:
1. Nordmann P. et al. Rapid detection of carbapenemase producing Enterobacteriaceae. Emerg.
Infect. Dis. 18, 1503-1507, 2012.
2. Nordmann P. et al. Rapid detection of carbapenemase production in Pseudomonas. Presentation
CI-078, ICAAC, 2012.
3. Tijet N. et al.: „ Evaluation of the Carba NP. Test for rapid detection of carbapenemase-producing
Enterobacteriaceae and Ps aeruginosa.” Antimicr Ag. Chemother 57, 4578-4580, 2013.
4. Williams A. et al.: Direct detection of carbapenemase producing Enterobacteriaceae and
Pseudomonas spp. from positive blood cultures. BSAC Spring Meeteing 20-03-2014.
5. Dortet L. et al.: Impact of isolation medium for detection of carbapenemase producing
Enterobacteriaceae using an updated version of Carba NP. test. J. Med. Microbiol 63, 772-776,
2014.
Dystrybutor:
3