bakterie jelitowe Z rodzaju Bifidobacterilłm"

Rozprawa doktorska
Uniwersytet Przyrodn tczy w Poznaniu
iochemic zna i molekula rna charakterystyka
hydr olaz Soli Żołciowych Synt ęZowanych przez
bakterie jelitowe Z rodzaju Bifidobacterilłm"
,,B
Piotr Jarocki
Promot or rozprawy doktorskiej:
Prof. dr hab. Zdzisław Targo ski
Katedra Biotechnolog It, Zywienia Człowieka
i Towaroznawstwa Zywności
Wydział Nauk o Zywnościi Biotechnologii
Uniwersytet Przyrodn tczy w Lublinie
Poznan,2015
Streszc zenie
Liczne bakterie zasiedlające układ pokarmowy człowiekai zvłierząt posiadują enzymy
w ż łciowych i aminokwas w.
wydaje się być aktywnośćhydrolityczna względem soli Żołci wśrod
kataltnljące hydrolizę soli zołciowych do wolnych kwas
Szczeg lnie istotna
bakterii z rodzaju Bifidobacterium, kt re są bardza waŻnym składnikiem mikrobioty układu
pokarmowe go człowieka.
Pomimo powszechnej obecnościhydrolaz soli Żołci(BSH) u bifidobakterii, tylko
nieliczne z tych enzym w zostały dogłębnte zbadane. Kwestią do dziśnierozstrzygniętą jest
Znaczefiie fizjologtczne obecnościhydrolaz dla samych bakterii' a także dla ludzi
i
zwierząt.
W związku z tym, iz niekt re wyniki badari sugerują, Że nadmierna hydroliza soli kwas w
Żołciowych moze mieć negatywny wpływ fia zdrowię człowieka, koniecznośćdogłębnej
charakterystyki enzym w hydrolizujących sole
z
łciowe wydaje się być kwestią bezsporną.
W pierwszym etapie badari została przeprowadzona analiza genetyczna występowania
gen
w kodujących BSH w obrębie rodzaju Bifidobacterium. Na podstawie
otrzymanych
wynik w zostały zaprojektowane uniwersalne startery do wykrywania obecności,a także do
sekwencjonowania oraz analtzy ekspresji gen w kodujących hydrolazy soli
z łci w badanej
w
przeprowadzona
grupie bifidobakterii. Na podstawie zsekwencjonowanych amplikon
została analiza filogenetyczna gen w bsh u bakterii
r wniez
z
analtzę ekspresji gen w bsh z uzyciem metody
rodzaju Bifidobacterium. Wykonano
RT-PCR.
W drugim etapie przeanalizowano występowanie aktywności BSH wśrd
mikroorganizm w naleŻących do rodzaju Bffidobacterium. Na tej podstawie,
wyselekcjonowano trzy szczepy, kt rych enzymy BSH zostały oczyszczone
chromatograftcznie, a następnie poddane charakterystyce biochemtcznej i molekularnej.
ostatni etap badari polegał na analizie zjawiska powstawania hydrożelu na skutek
z łciowych. obserwacje prowadzone były zar wno podczas hodowli
bakterii, jak r wniez w mieszaninie reakcyjnej podczas hydrolizy kwas w z łciowych
dekoniugacji soli
w obecności enzym w BSH. Przeprowadzone badania sugerują, Że zdekoniugowane kwasy
z łciowe, kt rych
powstawanie związane było bezpośrednioz aktywnościąBSH, mają
zelujące. Wytwarzanie hydroze|u przez bakterie moze prowadzić do powstania
właściwości
bardzo korzystnego mikrośrodowiska dla kom rek bakteryjnych mających aktywnośc BSH.
Co więcej, tworzenie hydroŻelu w warunkach fizjologicznych moze mieć duŻę Znaczenle
dla zasiedlania oraz przeŻywalności bakterii w układzie pokarmowym
człowiekai zwierząt.
_-4
,/o
/łł*
/
r-ocź*s