Polyclonal Rabbit Anti-Human IgG/AP Nr kat. D 0336
Transkrypt
Polyclonal Rabbit Anti-Human IgG/AP Nr kat. D 0336
Polyclonal Rabbit Anti-Human IgG/AP Nr kat. D 0336 Wydanie z 24.07.2003 Przeznaczenie Do badań diagnostycznych in vitro. Przeciwciało Polyclonal Rabbit Anti-Human IgG/AP jest przeznaczone do użytku w badaniach techniką immunoblottingu i testach ELISA. Interpretację wyników powinien przeprowadzić pracownik uprawniony do wykonywania takich badań, na podstawie historii choroby pacjenta oraz innych testów diagnostycznych. Odczynnik dostarczony Izolowane drogą powinowactwa królicze przeciwciało dla ludzkiej IgG skoniugowane z fosfatazą alkaliczną jest dostarczane w postaci płynnej w roztworze 0,05 mol/L Tris-HCl, 0,1 mol/L NaCl, 1 mmol/L MgCl2, 0,1 mmol/L ZnCl2, 15 mmol/L NaN3, 40% glicerolu o pH 7,2. Stężenie koniugatu g/L: patrz informacja podana na etykiecie fiolki. Przygotowanie 1. Aby przeciwciało użyte do koniugacji stało się swoiste dla łańcuchów gamma, poddano je absorpcji w fazie stałej z użyciem wybranych frakcji białek surowicy ludzkiej. 2. Zaabsorbowane przeciwciało poddano dalszemu oczyszczaniu drogą chromatografii powinowactwa na kolumnie z ludzkim IgG. 3. Wyizolowane drogą powinowactwa przeciwciało koniugowano następnie z cielęcą jelitową fosfatazą alkaliczną o wysokiej aktywności swoistej przy użyciu zmodyfikowanej jednostopniowej metody glutaraldehydowej. 4. Na koniec koniugat poddano oczyszczaniu drogą chromatografii z użyciem filtra żelowego, aby usunąć wolne, nieskoniugowane cząsteczki fosfatazy alkalicznej i nieskoniugowane przeciwciało. Immunogen IgG wyizolowana z puli surowicy ludzkiej. Swoistość Przeciwciało reaguje z fragmentami Fc łańcuchów gamma ludzkiej IgG. Śladowe zanieczyszczenia innymi przeciwciałami usunięto drogą absorpcji w fazie stałej. Przed utworzeniem koniugatu swoistość przeciwciała stwierdzono następującymi metodami: Immunoelektroforeza krzyżowa: Jedynie w testach z wykorzystaniem 12,5 μL przeciwciała na 1 cm2 żelu z 2 μL osocza ludzkiego pojawia się łuk immunoprecypitacyjny IgG. Barwienie: barwnik Coomassie Briliant Blue. ELISA: W testach z wykorzystaniem pośredniej metody ELISA i ludzkiej IgA oraz IgM jako antygenów pokrywających, nie obserwuje się znaczącej reakcji. W teście ELISA typu „sandwich” z dwoma przeciwciałami nie obserwuje się istotnych reakcji z ludzkim osoczem pozbawionym IgG. Może występować reakcja krzyżowa z IgG innych gatunków. Jak wykazano metodą immunoelektroforezy rakietkowej, przeciwciało wchodzi w reakcje krzyżowe z ekwiwalentem białkowym IgG kotów, krów, jeleni, psów, kóz, koni, norek, małp, myszy, wołów piżmowych, tchórzy, szopów, szczurów i świń (1). Środki ostrożności 1. Do stosowania przez wyszkolony personel. 2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek sodu, zastosowany w produkcie w stężeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, może reagować z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych azydków metali. Po usunięciu spłukać dużą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku w kanalizacji. 3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych, należy stosować właściwe procedury postępowania. Przechowywanie Przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie używać po upływie daty ważności podanej na etykiecie fiolki. Jeśli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niż podane powyżej, użytkownik musi zweryfikować te warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na utratę stabilności produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem próbek pacjenta należy wykonywać odpowiednie kontrole. Jeśli wystąpią nieoczekiwane reakcje, których nie można wyjaśnić różnicami w procedurach laboratoryjnych, i istnieje podejrzenie, że przyczyną może być problem z niniejszym produktem, należy niezwłocznie skontaktować się z Działem Pomocy Technicznej naszej firmy. Wskazówki dotyczące sporządzania roztworu Immunoblotting: 1:500–1:2000. ELISA: 1:500–1:2000. Rozcieńczenia zalecane dla testów ELISA można stosować w przypadku większości typów oznaczeń z użyciem 100 μL rozcieńczonego koniugatu w dołkach na płytce typu „microwell” i 1 mg/mL p-nitrofenylofosforanu jako substratu (w roztworze 1 mol/L dwuetanoloaminy, 0,5 mmol/L MgCl2 o pH 9,8) i 30-minutowym cyklem inkubacji w temperaturze pokojowej. Jeśli nie wyznaczono trwałości odczynnika w aktualnie stosowanym systemie testowym, zaleca się go rozcieńczać bezpośrednio przed użyciem. Piśmiennictwo 1. Hau J, Nilsson M, Skovgaard-Jensen H-J, de Souza A, Eriksen E, Wandall LT. Analysis of animal serum proteins using antisera against human analogous proteins. Scand J Lab Anim Sci 1990; 17:3–7. Objaśnienia symboli (107762-002) Numer katalogowy Temperatura przechowywania Wyrób medyczny do diagnostyki in vitro Numer serii Sprawdzić w instrukcji stosowania Zużyć przed Producent D 0336/PL/KB/24.07.03 s. 1/1 Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17