TESTOSTERONE (SERUM) - For veterinary applications only

TESTOSTERON (SUROWICA)
TYLKO DO ZASTOSOWAŃ WETERYNARYJNYCH
PRZEZNACZENIE
Służy do ilościowego określenia poziomu testosteronu
w warunkach in vitro we krwi.
Nr Kat.
TT 1430 Płytka Mikrotitracyjna
12 x 8 wgłębień
1 x 96 t Bufor Rozcieńczająco-Myjący (Stęż.)
1 x 32 ml
Konjugat (Stęż.)
1 fiolka
Rozcieńczalnik Konjugatu
1 fiolka
Substrat Jednoodczynnikowy
1 x 15 ml
Standard
6 x 2 ml
Roztwór Zatrzymujący Reakcję
1 fiolka
ZASADA
Próbka poddana ekstrakcji i roztwór konjugatu są dodawane do wgłębień płytki mikrotitracyjnej, które uprzednio
zostały opłaszczone przeciwciałami przeciwko
testosteronowi. Testosteron w próbce współzawodniczy
o ograniczoną liczbę miejsc wiązania przeciwciał na płytce
mikrotitracyjnej ze znakowanym peroksydazą (z chrzanu)
testosteronem.
Dodawany jest substrat enzymatyczny. Po upływie odpowiedniego czasu, który jest potrzebny do umożliwienia
maksymalnego rozwoju reakcji barwnej, reakcja enzymatyczna jest zatrzymywana i wyznaczane są absorbancje.
Stężenie testosteronu w próbce jest obliczane na podstawie krzywej wzorcowej. Intensywność zabarwienia jest
odwrotnie proporcjonalna do stężenia testosteronu
w próbce.
PRZYGOTOWANIE PRÓBKI
Od zwierzęcia, które ma być zbadane, należy pobrać
do nieheparynizowanej probówki próbkę świeżej krwi.
Po oddzieleniu surowicy odpowiednio oznakować próbkę
i przechowywać w temperaturze od +2 do +8°C.
W przypadku, gdy próbka nie ma być użyta natychmiast,
przechowywać w temperaturze -20°C.
EKSTRAKCJA TESTOSTERONU
a) Pipetować 0.5 ml surowicy do szklanej probówki.
b) Dodać 5.0 ml tert-butylometyloeteru.
c) Mieszać przy użyciu Vortexu przez 3 minuty i odczekać
20 minut.
d) Zdjąć warstwę 4 ml eteru.
e) Odparować warstwę eteru do sucha.
f) Ponownie uzyskać zawiesinę w 400 Τl rozcieńczonego
buforu rozcieńczająco-myjącego, który został wcześniej
ogrzany do 37°C.
g) Mieszać przy użyciu Vortexu przez 3 minuty.
Przechowywać w czystym szklanym pojemniku w temperaturze od +2 do +8°C. Przechowywać w temperaturze
-20°C, jeżeli nie ma zostać użyta natychmiast.
ŚRODKI OSTROŻNOŚCI I OSTRZEŻENIA
Tylko do prowadzenia badań diagnostycznych w warunkach in vitro. Nie pipetować przy użyciu ust. Zachować typowe środki ostrożności obowiązujące przy kontakcie z odczynnikami stosowanymi w warunkach laboratoryjnych.
Bufor rozcieńczająco-myjący zawiera środek konserwu-jący.
Unikać połknięcia lub kontaktu ze skórą albo błonami
śluzowymi.
Na żądanie dostępne są arkusze danych dotyczących
zdrowia i bezpieczeństwa Health and Safety Data Sheets.
Odczynniki mogą być używane tylko zgodnie z ich przeznaczeniem, przez odpowiednio wykwalifikowany
personel laboratoryjny, w odpowiednich warunkach
laboratoryjnych.
STABILNOŚĆ I PRZYGOTOWANIE ODCZYNNIKÓW
REAKCJI
Płytka Mikrotitracyjna
Dostarczana w postaci gotowej do użycia. Zachowuje
stabilność do upływu daty ważności, pod warunkiem, że jest
przechowywana w temperaturze w zakresie od +2
do +8°C. Jeżeli używana jest tylko część płytki, pozostałe
paski należy odłożyć do foliowej torebki ze środkiem
osuszającym i szczelnie zamknąć, zwracając uwagę
na usunięcie nadmiaru powietrza.
Bufor Rozcieńczająco-Myjący (Stężony)
Rozcieńczyć zawartość jednej fiolki buforu rozcieńczającomyjącego przy użyciu 970 ml podwójnie destylowanej H2O.
Zachowuje stabilność przez 30 dni w zakresie temperatur
od +2 do +8°C.
Konjugat (Stężony)
Konjugat jest dostarczany w postaci koncentratu. Należy
rozcieńczać koncentrat konjugatu zgodnie z potrzebami,
w sposób taki, jak opisano w arkuszu procedury rozcieńczania konjugatu. Rozcieńczony konjugat powinien zostać
użyty natychmiast. Konjugat należy chronić przed działaniem światła.
Substrat Jednoodczynnikowy
Dostarczany w postaci gotowej do użycia. Zachowuje stabilność do upływu daty ważności, pod warunkiem, że jest
przechowywany w temperaturze w zakresie od +2 do +8°C.
Nie zawiera żadnych szkodliwych rozpuszczalników organicznych.
Standardy
Odtworzyć zawartość każdej fiolki standardu przy użyciu
2 ml rozcieńczonego buforu rozcieńczająco-myjącego.
Zachowuje stabilność przez co najmniej 28 dni pod warunkiem, że jest przechowywana w temperaturze w zakresie
od +2 do +8°C.
Roztwór Zatrzymujący Reakcję
Dostarczany w postaci gotowej do użycia. Zachowuje stabilność do upływu daty ważności, pod warunkiem, że jest
przechowywany w temperaturze w zakresie od +2 do +8°C.
ΑΒΧ
INSTRUKCJA - TESTOSTERON - TT 1430
STRONA 2 Z 2
a) Pipetować do odpowiednich wgłębień płytki mikrototracyjnej:
DOSTARCZONE MATERIAŁY
Płytka Mikrotitracyjna
Bufor Rozcieńczająco-Myjący (Stężony)
Konjugat (Stężony)
Rozcieńczalnik Konjugatu
Substrat Jednoodczynnikowy
Standard
Roztwór Zatrzymujący Reakcję
Próbka
QC
50 Τl
-
-
Kontrola Jak. QC
-
-
50 Τl
Próbka
-
50 Τl
-
50 Τl
50 Τl
50 Τl
Standard
Konjugat
POTRZEBNE MATERIAŁY, KTÓRE NIE SĄ
DOSTARCZONE
tert-Butylometyloeter (stopnia HPLC)
Czytnik płytek mikrotitracyjnych (450 nm)
Pipety : 10 μl do 100 μl
Metoda mycia płytek
Uszczelniacze do płytek
PROCEDURA
Zaleca się, aby przed użyciem wszystkie odczynniki
osiągnęły temperaturę pokojową (+19 do +25°C). W celu
zminimalizowania efektów brzegowych zaleca się, aby
płytka mikrotitracyjna była uszczelniona przy użyciu
przyklejanej uszczelki płytek.
Oznaczenie jest przeprowadzane w duplikacie. Zalecany
jest następujący układ dla płytki testowej, przy czym
komórki reprezentują dwa wgłębienia.
S1
T1
T9
T17
T25
T33
S2
T2
T10
T18
T26
T34
S3
T3
T11
T19
T27
T35
S4
T4
T12
T20
T28
T36
S5
T5
T13
T21
T29
T37
S6
T6
T14
T22
T30
T38
QCL
T7
T15
T23
T31
T39
QCE
T8
T16
T24
T32
T40
S
QC
T
Standard
= Standard
= Kontrola Jakości: niska-L/podwyższona-E
= Badana Próbka
b) Inkubować płytkę przez 1.5 godz. w temperaturze
pokojowej (od +19 do +25°C).
c) Odwrócić płytkę i wytrząsnąć płyn.
d) Myć płytkę mikrotitracyjną 6 razy przez okres 10-15
minut przy użyciu rozcieńczonego buforu rozcieńczająco-myjącego (po upewnieniu się, że każde wgłębienie
jest napełnione). Po końcowym myciu wystukać
na bibułkę do całkowitego wysuszenia.
e) Natychmiast po myciu przeprowadzić pipetowanie
po 125 μl roztworu substratu jednoodczynnikowego
do każdego wgłębienia przy użyciu wielokanałowej
pipety. Delikatnie wystukać płytkę mikrotitracyjną z obu
stron oraz przeprowadzać inkubację przez 20 ± 2 minuty w temperaturze pokojowej (od +19 do +25°C) w ciemności.
f) Zatrzymać rozwój reakcji barwnej przez dodanie po 100
μl roztworu zatrzymującego reakcję na wgłębienie.
Powinna być wyraźnie widoczna zmiana koloru z niebieskiego na żółty.
g) W ciągu dziesięciu minut od zatrzymania reakcji zmierzyć gęstość optyczną mieszaniny reakcyjnej przy 450
nm.
SPECYFICZNOŚĆ
Reakcyjności krzyżowe przeciwciała przeciwko testosteronowi podano w tabeli zamieszczonej poniżej:
ZWIĄZEK
% REAKCYJNOŚCI
KRZYŻOWEJ
Testosteron (17ϑ)
100 %
Boldenon (17ϑ)
67 %
19-Nortestosteron (17ϑ)
21 %
Boldenon (17Ι)
3.3 %
1,4-Androstadiena-3,
2%
17-dion
WARTOŚĆ PROGOWA CZUŁOŚCI
125 pg/ml surowicy
KRZYWA WZORCOWA I INTERPRETACJA WYNIKÓW
a) Obliczyć średnie absorbancje standardów, materiału
kontrolnego i badanych próbek.
b) Wykreślić absorbancje standardów względem log10
wartości stężeń tych standardów.
c) Dla zmierzonych absorbancji prób badanych i kontrolnych z krzywej wzorcowej odczytać odpowiadające im
stężenia tych prób w ng/ml.
Wydanie poprawione 22/05/03 wpt
RANDOX Laboratories Ltd., Ardmore, Diamond Road, Crumlin, Co. Antrim, United Kingdom, BT29 4QY
Tel:CRUMLIN (028)94422413 Fax.No.INT.44 (028)94452912 UK (028)94452912
Email: [email protected] Website: www.randox.com
Α
ΑΒΧ