MonoMousAnti-Hum NeutrophilElastase

Monoclonal Mouse
Anti-Human Neutrophil Elastase
Klon NP57
Nr kat. M 0752
Wydanie 20.01.03
Przeznaczenie
Do diagnostyki in vitro.
Monoclonal Mouse Anti-Human Neutrophil Elastase, klon NP57 jest przeznaczone do immunohistochemii.
Przeciwciało znakuje granulocyty obojętnochłonne i ich prekursory, a także reaguje (chociaż znacznie słabiej)
z mniej liczną populacją monocytów krwi. Komórki rozrostu nowotworowego w około 70% przypadkach ostrej
białaczki szpikowej (mieloblastycznej) są znakowane przez przeciwciało (1,2). Stanowi ono również dobre
uzupełnienie innych przeciwciał przeciw markerom szpiku w diagnostyce różnicowej ostrej białaczki szpiku i
nowotworów z komórek mieloidalnych pozaszpikowych. Diagnostyka różnicowa jest wspomagana przez wyniki
z panelu przeciwciał oraz przez tradycyjne histologiczne i histochemiczne metody. Interpretacji wyników może
dokonywać osoba wykwalifikowana, w kontekście wywiadu chorobowego i innych badań diagnostycznych.
Wprowadzenie
Elastaza granulocytów obojętnochłonnych (NE) jest obojętną proteazą serynową (EC 3.4.21.37) o masie
cząsteczkowej ok.30 kDa składającą się z trzech izoenzymów (1, 5). NE jest wytwarzana w promielocytach i
promonocytach i w większości znajduje się w pierwotnych azurochłonnych ziarnistościach granulocytów
obojętnochłonnych (neutrofili), w których zajmuje znaczną część (1, 2, 6). Uwolniona z ziarnistości NE działa jako
silny czynnik proteolityczny zdolny do rozkładu szerokiego zakresu białek z zewnętrznymi białkami macierzy,
czynnikami krzepnięcia, immunoglobulinami i ich dopełniaczami włącznie (6). NE jest ważnym mediatorem w
procesie zabijania mikroorganizmów w stadium inicjowania uszkodzonych tkanek przy zapaleniu (1). Uważa się, że
NE jest włączony w proces niszczenia tkanek w rozedmie pęcherzykowej płuc, zapaleniu kłębków nerkowych ,
reumatoidalnym zapaleniu stawów i w zespole niewydolności oddechowej dorosłych (ARDS) (6, 7). Poza tym
został także powiązany z naciekaniem nowotworu (8). Działanie NE niszczące tkanki podlega przeciwdziałaniu
różnych endogennych inhibitorów takich jak -1-antytrypsyna, ludzki inhibitor elastazy granulocytów
obojętnochłonnych (HEI) lub elafin (6). NE jest kodowany przez gen ELA2 a mutacje tego genu były wskazywane w
przypadkach ciężkiej wrodzonej neutropenii (SCN), która może prowadzić do ostrej białaczki szpiku
(mieloblastycznej) (6).
Odczynnik dostarczony
Monoklonalne przeciwciało mysie w formie płynnej jako nadsącz kultury komórek, przedializowane wobec 0,05
mol/L soli fizjologicznej buforowanej TRIS-em (Tris/HCl) o pH 7,2. Zawiera 15 mmol/L NaN3.
Klon: NP57 (1). Isotyp: IgG1, kappa.
Stężenie IgG mysich: patrz etykietka na fiolce.
Immunogen
Białka ziarnistości ludzkich granulocytów obojętnochłonnych (1).
Swoistość
W metodzie Western blotting preparatu ziarnistości obojętnochłonnych, przeciwciało znakuje trzy prążki o masie
cząsteczkowej około 30 kDa odpowiadające trzem izoenzymom elastazy granulocytów obojętnochłonnych (1). W
tej metodzie przeciwciało rozpoznaje także oczyszczoną elastazę granulocytów obojętnochłonnych (1).
W immunohistochemii przeciwciało znakuje silnie cytoplazmatycznie linię komórkową histiocytów U-937 (1).
Środki ostrożności
1. Do stosowania przez osoby przygotowane zawodowo.
2. Produkt zawiera azydek sodowy (NaN3), odczynnik chemiczny silnie toksyczny w czystej postaci. W stężeniu
obecnym w produkcie, chociaż nie klasyfikowanym jako niebezpieczne, azydek sodowy może reagować z
elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, tworząc silnie wybuchowe pochodne lub azydki tych
metali. Przy usuwaniu odpadów przepłukać odpływ dużą ilością wody, aby uniknąć tworzenia się azydków w
kanalizacji.
3. Jak w przypadku każdego materiału biologicznego należy stosować odpowiednie procedury.
Przechowywanie
Przechowywać w temp. 2-8 °C. Nie używać po upływie daty ważności wskazanej na opakowaniu. Jeśli
odczynniki były przechowywane w warunkach innych niż wskazane, użytkownik musi sprawdzić jakość
produktu. Nie ma wyraźnych oznak wskazujących na niestabilność produktu, dlatego równocześnie z próbkami
badanymi powinno się oznaczać wiarygodną kontrolę dodatnią i ujemną. Jeżeli uzyskuje się nieoczekiwane
wyniki bez zmiany procedur laboratoryjnych i można podejrzewać, że dzieje się to z winy przeciwciała, należy
skontaktować się z serwisem technicznym firmy Dako.
Przygotowanie próbek
Skrawki parafinowe: Przeciwciało nadaje się do znakowania skrawków tkanki utrwalonych w formalinie i
zatopionych w parafinie. Nie jest wymagane wstępne trawienie tkanek proteinazą K. Wykazano jednak, że
wstępne odsłonięcie epitopów przez ogrzewanie prowadzi do zniszczenia epitopów. Skrawki tkankowe nie
powinny wysychać podczas trawienia proteinazą K ani podczas podanej poniżej procedury
immunohistochemicznego barwienia.
Skrawki mrożone i preparaty komórkowe: Przeciwciało nadaje się do znakowanie skrawków mrożonych.
Jednakże antygen podlega dyfuzji z komórki i dlatego barwienie może wyglądać jak „chmura” przykrywająca
znakowanie poszczególnych komórek (1).
Przeciwciało nadaje się do znakowania rozmazów krwi i szpiku kostnego oraz kultur komórek (1, 2).
(111959-003)
M 0752/PL/SUA/20.01.03 str. 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
Procedura barwienia
Rozcieńczenie: Monoclonal Mouse Anti-Human Neutrophil Elastase, nr kat. M 0752 może być używane w
zakresie rozcieńczeń 1:100-1:200, gdy stosuje się go na skrawki migdałków utrwalane formaliną i zatapiane w
parafinie, po 30 min. inkubacji z pierwotnym przeciwciałem w temperaturze pokojowej. Optymalne warunki
mogą się różnić zależnie od próbki i metod jej przygotowania, i powinny zostać dobrane w każdym
laboratorium. Zalecaną kontrolą ujemną jest Dako Mouse IgG1, nr kat. X 0931, rozcieńczone do takiego samego
stężenia przeciwciał IgG mysich jak roztwór pierwotnego przeciwciała. Jeśli nie udowodniono trwałości
przeciwciała i kontroli ujemnej w danej metodzie, zaleca się rozcieńczanie tych odczynników tuż przed użyciem
lub rozcieńczanie w Antibody Diluent, nr kat. S 0809. Dodatnia i ujemna kontrola powinny być oznaczane
razem z materiałem badanym.
Uwidocznienie: Zalecane są zestawy odczynnikowe DAKO LSAB™+/HRP, nr kat. K 0679, oraz DA KO
EnVision™+/HRP, nr kat. K 4004 i K 4006. Do oznaczania skrawków mrożonych i preparatów komórkowych w
przypadku gdy problemem jest własne świecenie peroksydazy, wskazaną alternatywą jest zestaw Dako
APAAP, nr kat. K 0670. Procedura wykonania jest opisana w każdym z zestawów.
Opis wyników
Komórki znaczone przeciwciałem wykazują barwienie cytoplazmatyczne głównie w postaci granularnego wzoru (1,
2).
Tkanki i komórki normalne: W rozmazach krwi przeciwciało znakuje granulocyty obojętnochłonne. Subpopulacja
monocytów jest także znaczona, choć o wiele słabiej. W rozmazach szpiku kostnego znakowane są granulocyty
obojętnochłonne oraz prekursory tych komórek. Limfoidalne, histiocytalne i erytroidalne komórki są ujemne
podobnie jak megakariocyty (1, 2). Testowanie zestawu na różnych ludzkich tkankach wykazało silne znakowanie
granulocytów obojętnochłonnych przy braku znakowania innych komórek lub ich elementów w skrawkach tkanek
(1).
Tkanki patologiczne: Na 55 przypadków ostrych białaczek nielimfoblastycznych w 62% wynik próby z
przeciwciałem był dodatni. W tej liczbie wystąpiło: 13/21 M1 i M2 ostrych białaczek mieloblastycznych (AML), 1/1
M3 ostrej białaczki promielocytowej (APL), 16/22 M4 ostrej białaczki mielomonoblastycznej (AMML), 4/6 M5 ostrej
białaczki monoblastycznej (AmoL), 0/1 M6 ostrej białaczki erytroblastycznej i 0/4 M7 ostrej białaczki
megakarioblastycznej (AMKL) (1). W innych badaniach na 37 przypadków ostrych białaczek mieloblastycznych (2)
73% dało wynik dodatni. W tej liczbie wystąpiło odpowiednio: 14/21 AML (M1), 7/7 AML (M2), 5/5 AML (M4) i 1/4
AML (M5). Procentowo liczba komórek dodatnich wynosiła od 10-15% do prawie wszystkich komórek.
Najwyraźniejsze znakowanie było obserwowane dla przypadków M2 i M4. Wszystkie 36 przypadków ostrych
białaczek limfoblastycznych tak jak i wszystkie 17 przypadków chronicznego zaburzenia limfoproliferacyjnego dały
z przeciwciałem wynik ujemny (1, 2).
Gdy przeciwciało było stosowane razem z testami Dako Anti-Myeloid/Histiocyte Antigen, nr kat. M 0747 i Dako
Anti-Lysozyme, nr kat. A 0099, zidentyfikowano wszystkie z 15 przypadków nowotworów z komórek mieloidalnych
pozaszpikowych choć żaden z 5 przypadków ostrej białaczki limfatycznej nie był oznaczony (3).
W przypadkach glejaka przeciwciało znakowało granulocyty obojętnochłonne w obszarach naciekania nowotworu w
4/4 przypadkach glejaka 3/4 przypadkach gwiaździaka anaplastycznego, podczas gdy nie zaobserwowano
barwienia w 4/4 przypadkach gwiaździaka niskiego stopnia (8).
Piśmiennictwo
1. Pulford KAF, Erber WN, Crick JA, Olsson I, Micklem KJ, Gatter KC, et al. Use of monoclonal antibody
against human neutrophil elastase in normal and leukaemic myeloid cells. J Clin Pathol 1988;41:853-60.
2. Ralfkiaer E, Pulford KAF, Lauritzen AF, Avnstrøm S, Guldhammer B, Mason DY. Diagnosis of acute
myeloid leukaemia with the use of monoclonal anti-neutrophil elastase (NP57) reactive with routinely
processed biopsy samples. Histopathology 1989;14:637-43.
3. Davey FR, Olson S, Kurec AS, Eastman-Abaya R, Gottlieb AJ, Mason DY. The immunophenotyping of
extramedullary myeloid cell tumors in paraffin-embedded tissue sections. Am J Surg Pathol 1988;12:699707.
4. Davey FR, Elghetany MT, Kurec AS. Immunophenotyping of hematologic neoplasms in paraffin-embedded
tissue sections. Am J Clin Pathol 1990;93 Suppl 1:S17-S26.
5. Ohlsson K, Olsson I. The neutral proteases of human granulocytes. Isolation and partial characterization of
granulocyte elastases Eur J Biochem 1974;42:519-27.
6. Li F-Q, Horwitz M. Characterization of mutant neutrophil elastase in severe congenital neutropenia. J Biol
Chem 2001;276:14230-41.
7. Cramer EM, Beesley JE, Pulford KAF, Breton-Gorius J, Mason DY. Colocalization of elastase and
myeloperoxidase in human blood and bone marrow neutrophils using a monoclonal antibody and
immunogold. Am J Pathol 1989;134:1275-84.
8. Iwatsuki K-I, Kumara E, Yoshimine T, Nakagawa H, Sato M, Hayakawa T. Elastase expression by
infiltrating neutrophils in gliomas. Neurol Res 2000;22:465-8.
Objaśnienia symboli
(111959-003)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Numer serii
Sprawdź w instrukcji
stosowania
Zużyć przed
Producent
M 0752/PL/SUA/20.01.03 str. 2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17