Polyclonal Rabbit Anti-Human IgM/HRP Nr kat. P 0215
Transkrypt
Polyclonal Rabbit Anti-Human IgM/HRP Nr kat. P 0215
Polyclonal Rabbit Anti-Human IgM/HRP Nr kat. P 0215 Wydanie 19.06.03 Przeznaczenie Do diagnostyki in vitro. Polyclonal Rabbit Anti-Human IgM/HRP, nr kat. P 0215, jest przeznaczone do oznaczania ludzkiej IgM testem immunoenzymatycznym ELISA (1) oraz techniką immunoblottingu (2). Dodatkowo koniugat przeznaczony jest do stosowania w immunocytochemii w przypadku występowania dużych ilości IgM (3). Dla czułej detekcji mniejszych ilości IgM w tkankach polecane jest Dako Polyclonal Rabbit Anti-Human IgM, nr kat. A 0425, w połączeniu z systemen wizualizacji reakcji Dako LSAB™+ lub EnVision™+. Interpretacja wyniku musi być dokonana przez wykwalifikowaną zawodowo osobę, w kontekście historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych. Odczynnik dostarczony P 0215 jest oczyszczoną frakcją immunoglobulin króliczej surowicy odpornościowej sprzężonych z peroksydazą chrzanową (HRP) o bardzo wysokiej swoistej aktywności enzymatycznej. Reakcja sprzęgania jest opracowaną w Dako modyfikacją dwustopniowej metody glutaraldehydowej Avrameasa i Ternyncka (4). Reakcja jest łagodna, wydajna, wysoce powtarzalna i daje czasteczki koniugatu Mr głównie od 200 000 do 240 000. Koniugat dostarczony jest w formie płynnej. Zawiera 0.05 mol/L Tris/HCI, 15 mmol/L NaN3, pH 7.2. Stężenie immunoglobulin g/L: Patrz etykietka na fiolce. Immunogen IgM izolowana z zebranych prawidłowych surowic ludzkich. Swoistość Przeciwciało reaguje z łańcuchem ludzkiej IgM. Śladowe ilości przeciwciał zanieczyszczających zostały usunięte przez absorbcję na fazie stałej. Przed sprzęganiem swoistość przeciwciała została stwierdzona jak następuje: Immunoelektroforeza krzyżowa: Tylko jeden łuk precypitacyjny odpowiadający IgM występował w reakcji badanego przeciwciała z osoczem ludzkim. Barwienie: Coomassie Brilliant Blue. ELISA: Nie zaobserwowano istotnej reakcji w pośrednim teście ELISA kiedy jako opłaszczone antygeny użyto ludzkie IgA i IgG. W metodzie kanapkowej ELISA z użyciem dwóch rodzajów przeciwciał nie zaobserwowano istotnej reakcji z osoczem ludzkim pozbawionym IgM. Może występować reakcja krzyżowa z IgM innych gatunków. W immunoelektroforezie rakietkowej wykazano, że niesprzężone przeciwciało reaguje krzyżowo z odpowiadającymi IgM białkami surowicy kota, krowy, jelenia, psa, słonia, chomika, konia, norki, myszy, tchórza, szopa, szczura, foki, owcy i świni (5). Środki ostrożności 1. Do stosowania przez osoby przygotowane zawodowo. 2. Produkt zawiera azydek sodowy (NaN3), odczynnik chemiczny silnie toksyczny w czystej postaci. W stężeniu obecnym w produkcie, chociaż nie klasyfikowanym jako niebezpieczne, azydek sodowy może reagować z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, tworząc silnie wybuchowe pochodne lub azydki tych metali. Przy usuwaniu odpadów przepłukać spływ dużą ilością wody, aby uniknąć tworzenia się azydków. 3. Jak w przypadku każdego materiału biologicznego należy stosować odpowiednie procedury. 4. Produkt może być stosowany w różnych technikach i w zestawieniu z różnymi typami próbek i materiałów, a zatem każde laboratorium powinno ustalić własny system kontroli jakości. Przechowywanie Przechowywać w temp. 2-8oC. Nie używać po upływie daty ważności wskazanej na opakowaniu. Jeśli produkt był przechowywany w warunkach innych niż wskazane, użytkownik musi sprawdzić jakość produktu. Nie ma wyraźnych oznak wskazujących na niestabilność produktu, dlatego równocześnie z próbkami badanymi powinno się oznaczać wiarygodną kontrolę. Jeżeli uzyskuje się nieoczekiwane wyniki bez zmiany procedur laboratoryjnych i można podejrzewać, że dzieje się to z winy przeciwciała, należy skontaktować się z serwisem technicznym firmy Dako. Zalecane rozcieńczenia ELISA: 1:(1 000 x F) Immunoblotting: 1:(1 000 x F) Immunocytochemia: 1:(100 x F) Odnośnie wartości współczynnika F, patrz etykietka na fiolce. F zwykle wynosi 1.0. Dla metody kanapkowej ELISA z użyciem dwóch rodzajów przeciwciał jako instrukcja oznaczania IgM może służyć Dako “General ELISA Procedure” (Instrukcja Nr 30 023). Procedura opisana poniżej dotyczy oznaczania IgM w surowicy (zakres pomiaru 2.5 do 100 µg/L). 1. Przeciwciało opłaszczające fazę stałą: Dako Polyclonal Rabbit Anti-Human IgM, nr kat. A 0425, rozcieńczone tak aby stężenie białka wynosiło 10 mg/L. 2. Wzorzec: Dako Human Serum Protein Calibrator, nr kat. X 0908, rozcieńczony w zakresie od 2.5 µg/L do 100 µg/L IgM. Rozcieńczenie badanych próbek: 1:25 000. 3. Przeciwciało wykrywające: Dako Polyclonal Rabbit Anti-Human IgM/HRP, nr kat.P 0215 Zalecane rozcieńczenie: 1:(1 000 x F). Jeśli nie udowodniono trwałości przeciwciała w danej metodzie, zaleca się rozcieńczanie go tuż przed użyciem. (110385-002) P 0215/PL/AI/19.06.03 str. 1/2 Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17 Literatura 1. Trinick TR, Laker MF. Measurement of urinary immunoglobulins G, A and M by an enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). Clin Chim Acta 1984, 139:113-7. 2. Naaby-Hansen S, Bjerrum OJ. Auto-and iso-antigens of human spermatozoa detected by immunoblotting with human sera after SDS-PAGE. J Reprod Immunol 1985;7:41-57. 3. Rantala I, Helin H. Immunoelectron microscopic localization of immunoglobulins and complement in human renal glomeruli. J Histochem Cytochem 1982;30:932-7. 4. Avrameas S, Ternynck T. Peroxidase labelled antibody and Fab conjugates with enhanced intracellular penetration. Immunochemistry 1971;8:1175-9. 5. Hau J, Nilsson M, Skovgaard-Jensen H-J, de Souza A, Eriksen E, Wandall LT. Analysis of animal serum proteins using antisera against human analogous proteins. Scand J Lab Anim Sci 1990;17:3-7. Objaśnienia symboli (110385-002) Numer katalogowy Temperatura przechowywania Wyrób medyczny do diagnostyki in vitro Numer serii Sprawdź w instrukcji stosowania Zużyć przed Producent P 0215/PL/AI/19.06.03 str. 2/2 Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17