Polyclonal Rabbit Anti-Human Chorionic Gonadotropin Nr

Polyclonal Rabbit
Anti-Human
Chorionic Gonadotropin
Nr kat. A 0231
Wydanie 01.12.02
Przeznaczenie
Do diagnostyki in vitro.
.
Polyclonal Rabbit Anti-Human Chorionic Gonadotropin (hCG), Nr kat. A 0231, jest przeznaczone do użytku w
immunohistochemii. Przeciwciało znakuje komórki zawierające hCG- (1) I może być używane do demonstracji
elementów trofoblastycznych np. komórek guzów terminalnych (2). Różnicowe wykrywanie jest wspomagane
przez wyniki z panelu przeciwciał. Przeciwciało jest odpowiednie do testów ciążowych, zakładając, że ich
czułość jest wystandaryzowana do poziomu pozwalającego uniknąć reakcji z lutenizującym hormonem (LH).
Poziom ten musi być ustanowiony dla każdego testu. Przykład używania A 0231 w teście ELISA
przedstawiono w (3).
Interpretacji wyników może dokonywać tylko osoba wykwalifikowana, w kontekście wywiadu klinicznego i innych
badań diagnostycznych.
Wprowadzenie
hCG jest 40 kDa glikoproteiną złożoną z dwóch cześci,  i . Część  jest powszechna dla hCG, LH, follicle
stimulating hormone (FSH), i tyroid stimulating hormone (TSH), podczas gdy część  jest unikiatowa dla hCG
jakkolwiek jego sekwencja aminokwasu jest częściowo identyczna z z tą częścią  hormonu LH (3, 4). hCG jest
najważniejszym markerem komórek gestational trophoblastic, obecnych w komórkach syncytiotrophoblastycznych i
komórek średnio-zaawansowanych trofoblastów ale nieobecna w cytotrofoblastach. Ekspresja hCG została
również zademonstrowana w guzach nietrofoblastycznych np. u 14% pacjentów z hepatocellular carcinoma (4). W
czasie ciąży koncentracja surowicy wzrasta początkowo w tępie funkcji eksponens, następnie osiąga szczyt w
okolicy 100 kIU/L w dziesiątym tygodniu od zapłodnienia. Koncentracja maleje dziesięciokrotnie przez kilka
następnych tygodni zakończona małym wzrostem w okolicach terminu (5).
Odczynnik dostarczony
Oczyszczona frakcja globulinowa surowicy króliczej, w formie płynnej. Zawiera 0,1 mol/L NaCl, 15 mmol/L NaN3.
Stężenie białka g/L: patrz etykietka na fiolce.
Różnice w mianie pomiędzy poszczególnymi seriami A 0231 nie przekraczają 10%. Uzyskano to dzięki
doprowadzaniu miana każde serii do stałej wartości próby referencyjnej, przechowywanej w temp. -80oC.
Immunogen
Izolowany łańcuch  hCG.
Specyfikacja
Przeciwciało reaguje z hCG, I jak większość przeciwciał poliklonalnych z beta-hCG wykazuje także nieznaczną
reaktywność krzyżową (około 4%) z LH (3). Ślady białek ludzkiego osocza zanieczyszczających przeciwciała
zostały usunięte w fazie stałej.
Specyficzność przeciwciała została przetestowana w następujący sposób:
Immunoelektroforeza krzyżowa:: Używając 12.5 L A 0231 na cm2 przeciwko 10 L skoncentrowanego moczu
od ciężarnej kobiety (15ty-16ty tydzień ciąży) ukazuje się tylko łuk precypitacyjny hCG. Nie zaobserwowano
precypitacji kiedy używano 12.5 L przeciwciała na cm2 powierzchni żelu przeciwko 10 L normalnego
ludzkiego osocza. Barwienie: Coomassie Brilliant Blue.
Jak wykazała immunoelektroforeza rakietkow, reaguje krzyżowo z ekwiwalentem
myszy, wołu piżmowego, tchórza, świni i gnu (6).
Środki ostrożności
hCG u chomika, konia,
1. Do stosowania przez osoby przygotowane zawodowo.
2. Produkt zawiera azydek sodowy (NaN3), odczynnik chemiczny silnie toksyczny w czystej postaci. W stężeniu
obecnym w produkcie, chociaż nie klasyfikowanym jako niebezpieczne, azydek sodowy może reagować z
elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, tworząc silnie wybuchowe pochodne lub azydki tych
metali. Przy usuwaniu odpadów przepłukać spływ dużą ilością wody, aby uniknąć tworzenia się azydków.
3. Jak w przypadku każdego materiału biologicznego należy stosować odpowiednie procedury.
4. Produkt może być stosowany w różnych technikach i w zestawieniu z różnymi typami próbek i materiałów, a
zatem każde laboratorium powinno ustalić własny system kontroli jakości.
Przechowywanie
Przechowywać w temp. 2-8oC. Nie używać po upływie daty ważności wskazanej na opakowaniu. Jeśli produkt
był przechowywany w warunkach innych niż wskazane, użytkownik musi sprawdzić jakość produktu. Nie ma
wyraźnych oznak wskazujących na niestabilność produktu, dlatego równocześnie z próbkami badanymi
powinno się oznaczać wiarygodną kontrolę. Jeżeli uzyskuje się nieoczekiwane wyniki bez zmiany procedur
laboratoryjnych i można podejrzewać, że dzieje się to z winy przeciwciała, należy skontaktować się z serwisem
technicznym firmy Dako.
IMMUNOCYTOCHEMIA
Przygotowanie próbek
(108840-002)
Skrawki parafinowe: Przeciwciało może być zastosowane do znakowania tkanki utrwalonej w formalinie i
zatopionej w parafinie. Dla odzyskiwania epitopu za pomocą wzbudzania temperaturą optymalne rezultaty
uzyskiwane są przy pomocy docelowego roztworu odzyskiwania Dako TRS nr kat. S1700 lub 10 mmol/L buforu
Tris, 1 mmol/L EDTA, pH 9.0. Mniej optymalne rezultaty uzyskiwane są przy pomocy Dako Target Retriewal
A 0231/PL/KSS/01.12.02 str. 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
Sollution, o wysokim pH nr kat. S3308 lub 10 mmol/L buforu cytrynianowego pH 6.0. Skrawki tkankowe nie
powinny wyschnąć podczas obchodzenia się z nimi lub podczas następującej immunohistochemicznej procedury
barwienia.
Procedura barwienia
Rozcieńczenie: Polyclonal Rabbit Anti-Human Chorionic Gonadotropin (hCG), Nr kat. A 0231, może być użyte
w rozcieńczeniu od 1:300-1:600 kiedy nanoszone na utrwalone w formalinie, zatopione w parafinie skrawki
ludzkiego łożyska i używając 20 minutowego odzyskiwania epitopu za pomocą temperatury w Dako TRS nr kat.
S1700 i 30 minutowej inkubacji z przeciwciałem pierwotnym w pokojowej temperaturze. Optymalne warunki mogą
się różnić zależnie od próby i metod preparatyki i powinny być określone przez każde laboratorium. Polecana
kontrolą negatywna jest Dako Rabbit Immunoglobulin Fraction (absorbowane w fazie stałej) nr kat. X0936,
rozcieńczone do tego samego stężenia białka jak pierwotne przeciwciało. O ile stabilność we właściwym systemie
nie została ustanowiona, zaleca się rozcieńczyć produkt tuż przed użyciem lub rozcieńczać w Dako Antibody
Diluent, nr kat. S0809.
Wizualizacja: Zalecane są: Zestaw DAKO LSABTM+/HRP nr kat. K0679 i zestawy DAKO EnVisionTM+/HRP nr kat.
K4008 i K4010. Postępować zgodnie z procedurą dołączoną do wybranego zestawu wizualizacji.
Automatyzacja: Przeciwciało to jest dobrze dobrane do barwienia immunohistochemicznego, używając
automatycznych platform, takich jak Dako Autostainer.
Charakterystyka
Komórki znakowane przez przeciwciało wykazują cytoplazmatyczny wzór barwienia. (1).
Normalne tkanki: W pierwszym trymestrze łożyska, przeciwciało znakuje dużą ilość syncytiotrophoblast cytoplasmic
granules, niektóre przechodzące exocytosis (1).
Tkanki nieprawidłowe: 189 orchidectomy próbki z germ cell tumours (95 seminomas i 94 non-seminomas) były badane
z przeciwciałem. hCG było demonstrowane we wszystkich komponentach choriocarcinoma w syncytiotrophoblasts i
syncytiotrophoblast-like cells w 8% wśród seminomas i 30% wśród non-seminomas. Carcinoma-in-situ obecny w
kanalikach seminiferous sąsiadującymi z guzami był pozytywny na hCG w kilku przypadkach (2).
Referencje
1.
Morrish DW, Marusyk H, Siy O. Demonstration of specific secretory granules for human chorionic
gonadotropin in placenta. J Histochem Cytochem 1987;35:93-101.
2.
Jacobsen GK, Jacobsen M. Alpha-fetoprotein (AFP) and human chorionic gonadotropin (HCG) in
testicular germ cell tumours. A prospective immunohistochemical study. Acta Path Microbiol Immunol
Scand Sect A 1983;91:165-76.
3.
Mehta HC, MacDonald DJ. A sensitive enzyme immunoassay specific for human chorionic gonadotrophin.
Clin Chim Acta 1982;121:245-50.
4.
Leong AS-Y, Cooper K, Leong FJW-M. Manual of diagnostic antibodies for immunohistology; London:
Oxford University Press; 1999. p. 25-6.
5.
The National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Choriogonadotropin testing:
Nomenclature, reference preparations, assay performance, and clinical application; Approved guideline.
NCCLS document I/LA10-A (1-56238-314-0) NCCLS, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne,
Pennsylvania 19087-1898 USA; 1996.
6.
Hau J, Nilsson M, Skovgaard-Jensen H-J, de Souza A, Eriksen E, Wandall LT. Analysis of animal serum
proteins using antisera against human analogous proteins. Scand J Lab Anim Sci 1990;17:3-7.
Objaśnienia symboli
(108840-002)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Numer serii
Sprawdź w instrukcji
stosowania
Zużyć przed
Producent
A 0231/PL/KSS/01.12.02 str. 2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17