BD Gardnerella Selective Agar with 5% Human Blood

GOTOWE PODŁOŻA
HODOWLANE NA
PŁYTKACH – INSTRUKCJE
STOSOWANIA
PA-254094.06
wer.: July 2014
BD Gardnerella Selective Agar with 5% Human Blood
PRZEZNACZENIE
Podłoże BD Gardnerella Selective Agar with 5% Human Blood jest częściowo selektywnym,
różnicującym podłożem przeznaczonym do izolowania Gardnerella vaginalis z próbek
pochodzenia klinicznego.
ZASADY I OBJAŚNIENIE PROCEDURY
Metoda mikrobiologiczna.
Uważa się, że Gardnerella vaginalis jest jednym z drobnoustrojów powodujących zapalenie
pochwy.1-4 Choć bakteria ta może występować u dużego odsetka zdrowych kobiet we florze
fizjologicznej, nigdy nie kwestionowano jej znaczenia jako czynnika etiologicznego
niespecyficznego zapalenia pochwy (określanej także jako waginoza bakteryjna). U kobiet z
objawami tej choroby G. vaginalis często występuje razem z bakteriami beztlenowymi, takimi jak
Prevotella bivia, P. disiens, Mobiluncus, Peptostreptococcus i (lub) inne drobnoustroje
stanowiące elementy flory fizjologicznej cewki moczowej lub jelit, lecz nie pochwy. W
niespecyficznym zapaleniu pochwy prawidłowa flora Lactobacillus występuje w mniejszej ilości
lub nie występuje wcale. Uważa się, że Gardnerella vaginalis jest jednym z organizmów
wskaźnikowych w niespecyficznym zapaleniu pochwy, która w rzeczywistości jest zakażeniem
spowodowanym przez wiele drobnoustrojów.3,4 Wprawdzie w ostatnich latach do próbek
materiałów pochodzących z dróg rodnych zalecane były metody badawcze nie wymagające
posiewów, takie jak bezpośrednie barwienie metodą Grama, jednak wiele pracowni nadal
preferuje hodowle.1,5 G. vaginalis może być także odpowiedzialna za różne inne stany
patologiczne, takie jak poród przedwczesny, zapalenie błon płodowych, zakażenie układu
moczowego, zakażenia noworodków oraz posocznica.6
Wykrywanie tych drobnoustrojów na rutynowo używanych podłożach jest trudne, gdyż
Gardnerella i inne bakterie, takie jak pałeczki mlekowe i paciorkowce, mogą wykazywać
hemolizę na podłożach zawierających krew owczą. Jednak na podłożach zawierających krew
ludzką Gardnerella vaginalis tworzy charakterystyczną hemolizę typu beta.1,7-9 Dzięki temu, że
Gardnerella vaginalis – choć często jest uważana za bakterię Gram-ujemną – jest
drobnoustrojem Gram-dodatnim, można wykonywać jej hodowle na podłożach zawierających
kolistynę i kwas nalidyksowy.1,10,11
Podłoże BD Gardnerella Selective Agar with 5% Human Blood jest oparte na bazie Columbia
CNA Agar, która zawiera składniki odżywcze oraz inhibitory – kolistynę i kwas nalidyksowy,
powodujące zahamowanie wzrostu bakterii Gram-ujemnych, nie hamując wzrostu bakterii
Gram-dodatnich. Podłoże to jest wzbogacone peptonem Proteose, który promuje wzrost
Gardnerella. Dodawana jest także amfoterycyna B, która redukuje wzrost drożdży (np. Candida),
które także występują często w próbkach pobranych z pochwy. Krew ludzka jest dodawana jako
składnik odżywczy, a ponadto pozwala wykryć charakterystyczną, rozsianą hemolizę typu beta
danego drobnoustroju.
ODCZYNNIKI
BD Gardnerella Selective Agar with 5% Human Blood
Skład* w przeliczeniu na jeden litr wody oczyszczonej
Trzustkowy hydrolizat kazeiny
12,0 g Chlorek sodu
Hydrolizat pepsynowy tkanki zwierzęcej 5,0
Agar
Pepton Proteose
10,0
Kolistyna
Wyciąg drożdżowy
3,0
Kwas nalidyksowy
Wyciąg wołowy
3,0
Amfoterycyna B
Skrobia kukurydziana
1,0
Krew ludzka pozbawiona
włóknika
PA-254094.06
-1-
5,0 g
13,5
0,01
0,01
0,004
5%
pH 7,3 ± 0,2
*Skorygowany i (lub) uzupełniony zgodnie z wymaganiami mającymi na celu spełnienie
kryteriów wydajności.
ŚRODKI OSTROŻNOŚCI
. Wyłącznie do zastosowań profesjonalnych.
Nie należy używać płytek, jeżeli są na nich widoczne oznaki skażenia mikrobiologicznego,
odbarwienia, wyschnięcia, pęknięcia lub inne zjawiska wskazujące na pogorszenie jakości.
Procedury aseptycznej techniki pracy z produktem, zagrożenia biologiczne oraz usuwanie
zużytego produktu opisano w dokumencie OGÓLNE INSTRUKCJE DOTYCZĄCE
STOSOWANIA.
UWAGA:
Produkt zawiera materiał potencjalnie zakaźny. Krew ludzka wykorzystana
przy produkcji tego podłoża została zbadana w kierunku HIV, HBsAg i
innych typów wirusów zapalenia wątroby przy użyciu kryteriów i metod
obecnie stosowanych w bankach krwi do badania krwi ludzkiej
przeznaczonej do przetaczania. Wszystkie wyniki były ujemne. Ze względu
na to, że żadna z dostępnych obecnie metod nie jest w stanie
zagwarantować z całą pewnością, że krew nie zawiera wirusa HIV, wirusów
zapalenia wątroby oraz innych czynników zakaźnych, próbki oraz
opisywane podłoże należy traktować jako materiały, które potencjalnie
mogą przenosić choroby zakaźne. W związku z tym zaleca się, aby podczas
pracy z opisywanym podłożem przestrzegać zasad bezpieczeństwa
biologicznego poziomu 2 (Biosafety Level 2).
PRZECHOWYWANIE I DOPUSZCZALNY OKRES PRZECHOWYWANIA
Po otrzymaniu, płytki należy przechowywać w ciemnym miejscu w temperaturze od 2 do 8° C, w
ich oryginalnym opakowaniu izolującym do chwili użycia. Unikać zamrażania i przegrzewania.
Posiewu na płytki można dokonywać aż do daty ważności (patrz etykieta na opakowaniu) i
inkubować w zalecanych czasach inkubacji.
Płytek z otwartych stosów zawierających po 10 płytek można używać przez okres jednego
tygodnia, przechowując w czystym miejscu w temperaturze od 2 do 8° C.
KONTROLA JAKOŚCI PRZEZ UŻYTKOWNIKA
Na płytki posiewa się próbki reprezentatywne niżej wymienionych szczepów (szczegółowe
informacje – zobacz dokument OGÓLNE INSTRUKCJE DOTYCZĄCE STOSOWANIA).
Inkubować w atmosferze wzbogaconej dwutlenkiem węgla przez 48–72 godziny, w
temperaturze 35–37°C. Alternatywnie, podłoże można inkubować w atmosferze
mikroaerobowej, tzn. przy użyciu systemu BD CampyPak.
Szczepy bakteryjne
Gardnerella vaginalis
ATCC 14018
Escherichia coli ATCC 25922
Proteus mirabilis
ATCC 14153
Candida albicans
ATCC 10231
Bez posiewu
PA-254094.06
Wyniki posiewu
Wzrost dobry lub bardzo dobry; kolonie małe, szarobiałe,
otoczone rozsianą hemolizą typu beta
Całkowite zahamowanie wzrostu
Częściowe lub całkowite zahamowanie wzrostu; brak
stopniowego wzrostu kolonii
Częściowe lub całkowite zahamowanie wzrostu
Czerwone (kolor krwi)
-2-
PROCEDURA
Dostarczane materiały
Podłoże BD Gardnerella Selective Agar with 5% Human Blood (płytki Stacker 90 mm).
Sprawdzane pod kątem obecności mikroorganizmów.
Materiały niedostarczane
Pomocnicze pożywki hodowlane, odczynniki i wyposażenie laboratoryjne zgodnie z
wymaganiami.
Typy próbek
Wymazy z pochwy lub inne próbki podejrzewane o to, że zawierają G. vaginalis. Najlepiej
pobrać dwa wymazy – jeden na posiew, a drugi do bezpośredniego barwienia metodą Grama.
Jeśli próbki nie są od razu przetwarzane, należy stosować podłoże transportowe (np. BD PortA-Cul). (zobacz także CHARAKTERYSTYKA WYDAJNOŚCI I OGRANICZENIA
PROCEDURY).
Procedura testowa
Wykonać posiew próbek na podłożu BD Gardnerella Selective Agar with 5% Human Blood,
stosując przyjętą technikę rozcieńczenia. Należy także wykonać posiew na podłoże BD
Columbia Agar with 5% Sheep Blood. Inkubować płytki w atmosferze tlenowej wzbogaconej
CO2, w temperaturze 36 ± 2°C, przez 48–72 godziny. Na każdej próbce materiału z pochwy
należy wykonać także bezpośrednie barwienie metodą Grama.1,2,5
Wyniki
Po inkubacji należy zbadać podłoże BD Gardnerella Selective Agar with 5% Human Blood
pod kątem obecności małych lub średnich kolonii, otoczonych rozsianą hemolizą typu beta.
Wynik ten należy porównać z wzrostem uzyskanym na płytce z podłożem BD Columbia Agar
with 5% Sheep Blood. Jeśli kolonie z hemolizą typu beta występują tylko na podłożu
selektywnym dla Gardnerella, obecność G. vaginalis jest bardzo prawdopodobna. Jeśli kolonie z
hemolizą typu beta występują na obu podłożach, należy upewnić się za pomocą barwienia
metodą Grama, czy drobnoustrój obecny na podłożu selektywnym dla Gardnerella jest małą,
podobną do maczugowca błonicy pałeczką wykazującą zmienną reakcję w barwieniu metodą
Grama. Obecność ziarenkowców w barwieniu metodą Grama materiału z kolonii z hemolizą typu
beta na podłożu BD Gardnerella Selective Agar with 5% Human Blood wskazuje na to, że
izolowanymi drobnoustrojami są beta-hemolizujące paciorkowce lub gronkowce, lecz nie G.
vaginalis. Kolonie z hemolizą typu alfa i bez hemolizy można pominąć. Na podłożach
zawierających krew owczą Gardnerella tworzy małe kolonie z hemolizą alfa lub bez hemolizy. W
przypadku hodowli mieszanych z innymi drobnoustrojami beta-hemolizującymi należy ponownie
wykonać na obu podłożach hodowle pochodne z kolonii izolowanych na podłożu BD
Gardnerella Selective Agar with 5% Human Blood i prowadzić inkubację zgodnie z
powyższym opisem. Ostateczna identyfikacja izolowanych szczepów wymaga wykonania
dalszych testów biochemicznych. Należy zapoznać się z piśmiennictwem.1,7,9
Jeśli pacjent choruje na waginozę bakteryjną, w bezpośrednim barwieniu Grama próbek z
pochwy widoczne będą komórki typu „clue cells” (= komórki nabłonka pochwy obładowane dużą
ilością krótkich pałeczek Gram-zmiennych).1,5
Interpretacja wyników
Jeśli z próbek materiału z pochwy wyizolowano G. vaginalis, rozpoznanie należy uważnie
porównać z subiektywnymi i obiektywnymi objawami klinicznymi. Zazwyczaj, jeśli Gardnerella
stanowi przyczynę waginozy bakteryjnej, pacjentka uskarża się na zwiększoną ilość wydzieliny o
nieprzyjemnym zapachu. pH wydzieliny wynosi >4,5, a w barwieniu metodą Grama obecne są
komórki typu „clue”. Szczegółowe informacje przedstawiono w piśmiennictwie.1-3,5
CHARAKTERYSTYKA WYNIKÓW I OGRANICZENIA DOTYCZĄCE PROCEDURY
Podłoże BD Gardnerella Selective Agar with 5% Human Blood jest częściowo selektywnym
podłożem przeznaczonym do izolowania Gardnerella vaginalis.4,11 G. vaginalis tworzy kolonie z
PA-254094.06
-3-
hemolizą typu beta na podłożach z krwią ludzką, a kolonie z hemolizą typu alfa na podłożach
zawierających krew owczą.
Podłoże BD Gardnerella Selective Agar with 5% Human Blood nie hamuje wzrostu innych
drobnoustrojów Gram-dodatnich, takich jak paciorkowce, gronkowce lub Listeria, które mogą,
lecz nie muszą, powodować hemolizę beta na podłożach zawierających krew ludzką i mogą
także występować w próbkach materiałów pochodzących z pochwy. W związku z tym, do
potwierdzenia identyfikacji izolowanych bakterii jako G. vaginalis konieczne jest wykonanie
badań mikroskopowych i biochemicznych.
Obecność G. vaginalis w próbce materiału z pochwy niekoniecznie musi oznaczać, że
drobnoustrój ten jest przyczyną infekcji.
Nie należy używać podłoża BD Gardnerella Selective Agar with 5% Human Blood do
określania właściwości hemolizujących organizmów innych niż Gardnerella vaginalis.
PIŚMIENNICTWO
1. Clarridge, J.E., and C.A. Spiegel. 1995. Corynebacterium and miscellaneous irregular gram-positive
rods, Erysipelothrix, and Gardnerella. In: Murray, P. R., E. J. Baron, M. A. Pfaller, F. C. Tenover, and
R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology,
Washington, D.C.
2. Spiegel, C.A. 1991. Bacterial vaginosis. Clin. Microbiol. Rev. 4: 485-502.
3. Hammann, R., Lang, N., and H. Werner. 1984. Die Rolle von Gardnerella vaginalis und Anaerobiern –
Ätiologie der unspezifischen Kolpitis. Fortschr. Med. 102: 255-258.
4. Hammann, R., A. Kronibus, N. Lang, and H. Werner. 1987. Quantitative studies on the vaginal flora
of asymptomatic women and patients with vaginitis and vaginosis. Zbl. Bakt. A 265: 451-461.
5. Spiegel, C.A., Amsel, R., and K.K. Holmes. 1983. Diagnosis of bacterial vaginosis by direct Gram
stain of vaginal fluid. J. Clin. Microbiol. 18: 170-177.
6. Martius, J., and D.A. Eschenbach. 1990. The role of bacterial vaginosis as a cause of amniotic fluid
infection, chorioamnionitis and prematurity – a review. Arch. Gynecol. Obstet. 247: 1-13.
7. Greenwood, J.R. et al. 1977. Haemophilus vaginalis (Corynebacterium vaginale) method for isolation
and rapid biochemical identification. Health Lab. Sci. 14: 102
8. Kretzschmar, U.M., R. Hammann, H.J. Kutzner. 1991. Purification and characterization of Gardnerella
vaginalis hemolysin. Curr. Microbiol. 23: 7-13.
9. Piot, P., et al. 1982. Identification of Gardnerella (Haemophilus) vaginalis. J. Clin. Microbiol. 15: 19-24.
10. Harper, J.J, and G.H.G. Davis. 1982. Cell wall analysis of Gardnerella vaginalis (Haemophilus
vaginalis). Int. J. Syst. Bacteriol. 32: 48-50.
11. Goldberg, R.L. and J.A. Washington II. 1976. Comparison of isolation of Haemophilus vaginalis
(Corynebacterium vaginale) from Peptone-Starch-Dextrose Agar and Columbia Colistin-Nalidixic Acid
Agar. J. Clin. Microbiol. 4: 245.
PAKOWANIE / DOSTĘPNOŚĆ
BD Gardnerella Selective Agar with 5% Human Blood
Nr katalogowy 254094
Gotowe podłoża na płytkach
hodowlanych, cpu 20
Nr katalogowy 257664
Gotowe podłoża na płytkach
hodowlanych, cpu 120
DODATKOWE INFORMACJE
W celu uzyskania dodatkowych informacji należy się skontaktować z lokalnym przedstawicielem
firmy BD.
Becton Dickinson GmbH
Tullastrasse 8 – 12
D-69126 Heidelberg/Germany
Phone: +49-62 21-30 50
Fax: +49-62 21-30 52 16
[email protected]
http://www.bd.com
http://www.bd.com/europe/regulatory/
PA-254094.06
-4-
ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection
BD, BD Logo and all other trademarks are the property of Becton, Dickinson and Company. © 2014 BD
PA-254094.06
-5-