Dako Target Retrieval Solution, (10x) Nr kat. S1699

Dako
Target Retrieval Solution, (10x)
Nr kat. S1699
Przeznaczenie
Do stosowania w diagnostyce in vitro.
Produkt po rozcieńczeniu jest przeznaczony do odmaskowania epitopu przed procedurami immunohistochemicznymi (IHC) i hybrydyzacji in
situ (ISH) na utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawkach tkankowych na szkiełkach szklanych.
Razem z aparatem Dako PT Link, nr kat. PT100/PT101, odczynnik moŜe być stosowany jako roztwór do odmaskowania epitopu po
odparafinowaniu szkiełek oraz jako roztwór 3-w-1 w procedurze przygotowywania próbek 3-w-1 obejmującej odparafinowanie, nawodnienie
i odmaskowanie epitopu na skrawkach tkankowych utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie.
Zobacz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące części instrukcji do
systemu detekcji IHC:
1) Zasada przeprowadzenia odczynu, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu,
5) Wykonanie barwienia, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku barwienia, 9) Ograniczenia metody.
Dostarczany odczynnik
Bufor cytrynianowy, 500 ml , pH 6, koncentrat 10x.
Opis
Procedura odmaskowania epitopu polega na zanurzeniu skrawków tkankowych umieszczonych na szkiełkach w rozcieńczonym odczynniku
Target Retrieval Solution i ogrzewaniu — w aparacie PT Link (97°C), w ła źni wodnej (95–99°C) lub w szybkowarze (121°C). W pr zypadku
wielu przeciwciał pierwotnych cieplne odmaskowanie epitopu (przed wykonaniem odczynu IHC) pozwala na zwiększenie intensywności
odczynu. W przypadku niektórych przeciwciał procedura ta jest wymagana do uzyskania pozytywnych rezultatów. Odmaskowanie epitopu
moŜe takŜe stanowić praktyczną alternatywę dla wstępnego wytrawiania enzymatycznego w procedurach ISH.
Procedura 3-w-1 w aparacie PT Link polega na zanurzeniu skrawków tkankowych umieszczonych na szkiełkach w rozcieńczonym odczynniku
Target Retrieval Solution, a następnie odparafinowaniu i ogrzewaniu w aparacie PT Link (97°C). Procedura 3-w-1 wykonywana przed procedur ami
IHC umoŜliwia przeprowadzenie odparafinowania, nawodnienia i odmaskowania epitopu w jednym kroku. W przypadku zastosowania w aparacie
PT Link do cieplnego odmaskowania epitopu (ang. heat-induced epitope retrieval, HIER) lub w procedurze 3-w-1 odczynnika Dako Target Retrieval
Solution moŜna uŜyć 3-krotnie w ciągu 5 dni, pod warunkiem Ŝe jest przechowywany w temperaturze pokojowej.
Środki ostroŜności
1. Odczynniki przeznaczone są dla przeszkolonych UŜytkowników.
2. W trakcie procedury roztwór jest gorący i moŜe spowodować poparzenia nieosłoniętych oczu i skóry.
3. NaleŜy stosować właściwe wyposaŜenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą bądź oczami.
4. Niewykorzystany odczynnik naleŜy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi.
5. Karta Charakterystyki Substancji Niebezpiecznej jest dostępna na Ŝądanie UŜytkowników.
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2–8°C.
Przygotowanie odczynników
Przed uŜyciem produkt naleŜy rozcieńczyć 1:10 wodą dejonizowaną lub destylowaną (jedna część S1699 na dziewięć części wody) w celu
uzyskania roztworu roboczego. Współczynnik pH uzyskanego roztworu powinien mieścić się w przedziale od 6,00 do 6,20 (optymalnie 6,10).
Jeśli współczynnik pH przekracza 6,20, naleŜy go skorygować za pomocą 2N HCI. Jeśli współczynnik pH jest niŜszy niŜ 6,00, naleŜy go
skorygować za pomocą 2N NaOH.
Procedura
Procedura 3-w-1 przygotowania preparatu w aparacie PT Link:
1. Przygotować roztwór roboczy, rozcieńczając koncentrat w stosunku 1:10 wodą destylowaną lub dejonizowaną.
2. Napełnić zbiorniki aparatu PT Link roztworem roboczym w ilości (1,5 l) wystarczającej do przykrycia skrawków tkankowych.
3. Ustawić aparat PT Link tak, aby wstępnie ogrzać roztwór do temperatury 65°C.
4. Zanurzyć skrawki utrwalone w formalinie i zatopione w parafinie we wstępnie ogrzanym roztworze Target Retrieval Solution (roztwór
roboczy) w zbiornikach aparatu PT Link i inkubować przez 20–40 minut w temperaturze 97°C. U Ŝytkownik powinien ustalić optymalny
czas inkubacji.
5. Pozostawić skrawki w aparacie PT Link, aŜ ostygną do temperatury 65°C.
6. Ze zbiornika aparatu PT Link wyjąć wszystkie stojaki na szkiełka aparatu Autostainer i natychmiast zanurzyć szkiełka w
naczyniu/zbiorniku (np. Dako PT Link Rinse Station, nr kat. PT109) z rozcieńczonym buforem Dako Wash Buffer (10x), nr kat. S3006,
o temperaturze pokojowej.
7. Pozostawić zanurzone szkiełka w rozcieńczonym buforze Dako Wash Buffer (10x), nr kat. S3006, przez 1–5 minut.
8. WłoŜyć szkiełka do aparatu Dako Autostainer i wykonać barwienie. W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury barwienia
immunohistochemicznego skrawki nie powinny wyschnąć.
9. Po zakończeniu barwienia zalecane jest wykonanie odwodnienia, czyszczenia i trwałego zatapiania.
(114157-004)
301784PL_004 p. 1/2
Procedura HIER w aparacie PT Link:
1. Przygotować roztwór roboczy, rozcieńczając koncentrat w stosunku 1:10 wodą destylowaną lub dejonizowaną.
2. Napełnić zbiorniki aparatu PT Link roztworem roboczym w ilości (1,5 l) wystarczającej do przykrycia skrawków tkankowych.
3. Ustawić aparat PT Link tak, aby wstępnie ogrzać roztwór do temperatury 65°C.
4. Ręcznie odparafinować i nawodnić skrawki tkankowe zatopione na szkiełkach. Aby zapewnić lepsze przyleganie skrawków tkankowych
do szkiełek, zalecane jest uŜycie szkiełek powlekanych lub silanizowanych.
5. Zanurzyć skrawki tkankowe we wstępnie ogrzanym roztworze Target Retrieval Solution (roztwór roboczy) i inkubować przez
20–40 minut w temperaturze 97°C. U Ŝytkownik powinien ustalić optymalny czas inkubacji.
6. Pozostawić skrawki w aparacie PT Link, aŜ ostygną do temperatury 65°C.
7. Ze zbiornika aparatu PT Link wyjąć wszystkie stojaki na szkiełka i natychmiast zanurzyć szkiełka w naczyniu/zbiorniku (np. naczynie
Dako PT Link Jar, nr kat. PT10930) z rozcieńczonym buforem Dako Wash Buffer (10x), nr kat. S3006, o temperaturze pokojowej.
8. Pozostawić zanurzone szkiełka w rozcieńczonym buforze Dako Wash Buffer (10x), nr kat. S3006, przez 1–5 minut.
9. WłoŜyć szkiełka do systemu Dako Autostainer Platform i wykonać barwienie. W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury
barwienia immunohistochemicznego skrawki nie powinny wyschnąć.
10. Po zakończeniu barwienia szkiełka naleŜy zatopić za pomocą środka wodnego lub środka do trwałego zatapiania.
Procedura alternatywna: szybkowar
1. Odparafinować i ponownie nawodnić skrawki tkankowe.
2. Zanurzyć skrawki w naczyniu Coplina lub innym odpowiednim naczyniu wypełnionym odczynnikiem Target Retrieval Solution.
3. Inkubować przez 1–10 minut pod ciśnieniem 15 psi (121°C). Aby unikn ąć przegotowania, przed wyjęciem preparatów z szybkowaru
naleŜy natychmiast stopniowo zredukować ciśnienie, albo poczekać, aŜ naczynia z odczynnikiem Target Retrieval Solution i skrawkami
tkankowymi ostygną do około 85°C.
4. Zlać odczynnik Target Retrieval Solution i opłukać skrawki 2 do 3 razy buforem o temperaturze pokojowej (Tris, PBS, itp.).
5. Wykonać barwienie.
Wydanie 10/10
(114157-004)
301784PL_004 p. 2/2