Monoclonal Mouse Anti-Human Epithelial Antigen/FITC

Monoclonal Mouse Anti-Human Epithelial Antigen/FITC

Monoclonal Mouse
Anti-Human Epithelial Antigen/FITC
Clone Ber-EP4
Numer katalogowy F 0860
Wydanie 01.01.03
Przeznaczenie
Do diagnostyki in vitro.
F 0860 jest przeznaczone do użycia w cytometrii przepływowej. Anti-Human Epithelial Antigen może być
używane do wykrywania komórek nowotworowych krążących we krwi obwodowej, wysiękach I popłuczynach z
jamy otrzewnowej, wraz z panelem innych przeciwciał (1-3). Interpretacji wyników może dokonywać
wykwalifikowany patolog w oparciu o wywiad kliniczny i inne testy diagnostyczne.
Synonimy antygenu
Ber-EP4 (1-7).
Wprowadzenie
Cytologiczn adiagnostyka reaktywnych lub złośliwych wysięków przy użyciu immunohistochemii lub cytometrii
przepływowej jest często trudna, szczególnie w przypadkach, kiedy trzeba odróżnić międzybłoniaka od raka
gruczołowego o nakładającej się charakterystyce histologicznej (3-7). Czułość konwencjonalnej cytologii w
wykrywaniu komórek nowotworowych w wysiękach poprawiła się, kiedy zaczęto używać takiego zestawu
przeciwciał, że niektóre markery są dodatnie dla międzybłoniaka, a niektóre ujemne dla międzybłoniaka, a
dodatnie dla raka (4-7). Vimentyna, HBME-1 i trombomodulina są dodatnimi markerami mesothelioma (4, 5).
Najczęściej używanymi markerami nabłonkowymi raków są CEA, B72.3 (TAG-72), Leu-M1 (CD15), MOC-31,
AH-6, HB-TN1, CA-125 i Ber-EP4 (3-7). Aby uzyskać optymalną czułość i swoistość analizy
immunohistochemicznej lub cytometrycznej zalecono użycie panelu 2, 3 lub 4 przeciwciał przeciwko markerom
rakowym, wśród których jest Ber-EP4 (3-6).
Odczynnik dostarczony
Przeciwciało Anti-Human Epithelial Antigen, F 0860, zostało wyprodukowane z oczyszczonych monoklonalnych
przeciwciał mysich. Są one dostarczane w postaci płynnej w buforze zawierającym 1% albuminy z surowicy
wołu (BSA) i 15 mmol/L NaN3, o pH 7,2. Każda fiolka zawiera ilość przeciwciała na 100 oznaczeń (10 L
przeciwciała na maksymalnie 106 leukocytów z normalnej ludzkiej krwi obwodowej).
Izotyp: IgG1, kappa. Stężenie koniugatu mg/L: zobacz etykietka na fiolce.
Przeciwciało,
nr katalogowy
F 0860
Fluorochrom
Kontrola
negatywna,
nr katalogowy
FITC (Fluorescein Isothiocyanate Isomer 1)
X 0927
Immunogen
Linia komórkowa MCF-7 (8).
Swoistość
Anti-Human Epithelial Antigen, Ber-EP4, jest skierowane przeciwko częściowo opornemu na formalinę
epitopowi ludzkiego antygenu nabłonkowego, składającemu się z dwóch glikoprotein o masach 34 i 39 kDa.
Antygen jest obecny na błonie powierzchniowej i w cytoplazmie wszystkich komórek nabłonkowych oprócz
powierzchniowych warstw nabłonka płaskiego, hepatocytów i komórek okładzinowych (8).
Analiza cytometryczna wysięków nowotworowych wykazała, że Anti-Human Epithelial Antigen, Ber-EP4,
znakuje próbki rakowe (16/17 przypadków (2) i 36/44 przypadków (3)). Barwiło się również kilka próbek
międzybłoniaka (2/3 przypadki) (3).
Środki ostrożności
1. Do stosowania przez osoby przygotowane zawodowo.
2. Produkt zawiera azydek sodowy (NaN3), odczynnik chemiczny silnie toksyczny w czystej postaci. W stężeniu
obecnym w produkcie, chociaż nie klasyfikowanym jako niebezpieczne, azydek sodowy może reagować z
elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, tworząc silnie wybuchowe pochodne lub azydki tych metali.
Przy usuwaniu odpadów przepłukać spływ dużą ilością wody, aby uniknąć tworzenia się azydków.
3. Jak w przypadku każdego materiału biologicznego należy stosować odpowiednie procedury.
Przechowywanie
Przechowywać w temp. 2-8oC. Nie używać po upływie daty ważności wskazanej na opakowaniu. Jeśli produkt
był przechowywany w warunkach innych niż wskazane, użytkownik musi sprawdzić jakość produktu. Ponieważ
nie ma wyraźnych oznak wskazujących na zmianę trwałości produktu, zawsze należy badać dodatnią i ujemną
kontrolę równolegle z próbką badaną. Jeżeli pojawia się nieswoiste barwienie bez zmiany procedur
laboratoryjnych i można podejrzewać, że dzieje się to z winy przeciwciała, należy skontaktować się z serwisem
technicznym firmy Dako.
Procedura barwienia
1.
Pobrać krew żylną do probówki z antykoagulantem.
2.
Wyizolować komórki jednojądrzaste przez wirowanie na gradiencie gęstości lub zlizować erytrocyty po
punkcie 6.
3.
Dwukrotnie przepłukać komórki jednojądrzaste RPMI 1640 lub PBS, o pH 7,2-7,4.
4.
Zmieszać 100 L zawiesiny komórek z 10 L F 0860.
(108361-002)
F 0860/PL/SSA/01.01.03 str. 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
5.
Użyć niereagującego przeciwciała o tym samym izotypie i sprzęgniętego z tym samym fluorochromem jako
kontroli ujemnej (patrz tabela).
6.
Inkubować w ciemnościach w temp. 4 C przez 30 minut.
7.
Dwukrotnie przepłukać PBS zawierającym 2% BSA. Zawiesić komórki w płynie odpowiednim do pomiarów
cytometrycznych,np. 0,3 mL roztworu zawierającego 1% paraformaldehyd jako utrwalacz w 0,01 mol/L PBS,
o pH 7,4.
8.
Zanalizować w cytometrze przepływowym.
Zaleca się użyć odpowiedniej kontroli dodatniej i ujemnej przy każdym pomiarze dla sprawdzenia odczynnika
i przygotowania próbki. Proszę zwrócić uwagę, że odczynniki sprzęgnięte z fluorochromami są wrażliwe
na światło i próbki powinny być przed nim chronione podczas barwienia aż do czasu analizy.
Literatura
1.
Kularatne BY, Lorigan P, Browne S, Suvarna SK, Smith MO, Lawry J. Monitoring tumour cells in the
peripheral blood of small cell lung cancer patients. Cytometry 2002;50:160-7.
2.
Risberg B, Davidson B, Dong HP, Nesland JM, Berner A. Flow cytometric immunophenotyping of serous
effusions and peritoneal washings: comparison with immunocytochemistry and morphological findings. J
Clin Pathol 2000;53:513-7.
3.
Davidson B, Dong HP, Berner A, Christensen J, Nielsen S, Johansen P, et al. Detection of malignant
epithelial cells in effusions using flow cytometric immunophenotyping. Am J Clin Pathol 2002;118:85-92.
4.
Lozano MD, Panizo A, Toledo GR, Sola JJ, Pardo-Mindán J. Immunocytochemistry in the differential
diagnosis of serous effusions. A comparative evaluation of eight monoclonal antibodies in Papanicolaou
stained smears. Cancer 2001;93:68-72.
5.
Garcia-Prats MD, Ballestin C, Sotelo T, Lopez-Encuentra A, Mayordomo JI. A comparative evaluation of
immunohistochemical markers for the differential diagnosis of malignant pleural tumours. Histopathology
1998;32:462-72.
6.
Motherby H, Kube M, Friedrichs N, Nadjari B, Knops K, Donner A, et al. Immunocytochemistry and DNAimage cytometry in diagnostic effusion cytology. I. Prevalence of markers in tumour cell positive and
negative smears. Anal Cell Pathol 1999;19:7-20.
7.
Roberts F, Harper CM, Downie I, Burnett RA. Immunohistochemical analysis still has a limited role in the
diagnosis of malignant mesothelioma. Am J Clin Pathol 2001;116:253-62.
8.
Latza U, Niedobitek G, Schwarting R, Nekarda H, Stein H. Ber-EP4: new monoclonal antibody which
distinguishes epithelia from mesothelia. J Clin Pathol 1990;43:213-9.
Objaśnienia symboli
(108361-002)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Zużyć przed
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Chronić przed światłem
(sprawdź w rozdz.
przechowywanie)
Producent
Sprawdź w instrukcji
stosowania
Numer serii
F 0860/PL/SSA/01.01.03 str. 2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17