BD MacConkey II Agar

GOTOWE PODŁOŻA
HODOWLANE NA
PŁYTKACH – INSTRUKCJE
STOSOWANIA
PA-254025.07
wer.: July 2014
BD MacConkey II Agar
PRZEZNACZENIE
BD MacConkey II Agar jest selektywnym, różnicującym podłożem przeznaczonym do
izolowania i różnicowania Enterobacteriaceae i różnych innych pałeczek Gram-ujemnych z
próbek klinicznych.
ZASADY I OBJAŚNIENIE PROCEDURY
Metoda mikrobiologiczna.
Obecnie dostępnych jest wiele podłoży hodowlanych do izolowania, hodowli i identyfikacji
szczepów z rodziny Enterobacteriaceae i niektórych bakterii niefermentujących. Jedna z
pierwszych tego typu pożywek została opracowana przez MacConkey’a, a jej skład opublikowano
w latach 1900 i 1905.1,2 Dobór składników opierał się na znajomości faktu, że sole żółciowe są
wytrącane przez kwasy, a pewne drobnoustroje jelitowe fermentują laktozę, podczas gdy inne nie
posiadają tej zdolności. W późniejszym okresie skład podłoża kilkakrotnie modyfikowano.3,4
Agar MacConkey’a wykazuje niewielką selektywność, gdyż stężenie soli żółciowych hamujących
wzrost drobnoustrojów Gram-dodatnich jest niskie w porównaniu z innymi podłożami na płytkach
do hodowli bakterii jelitowych. Zaleca się stosowanie opisywanego podłoża do posiewów próbek
pochodzenia klinicznego, które podejrzewa się o obecność mieszanej flory bakteryjnej – moczu,
materiału z dróg oddechowych lub z rany i innych. Podłoże umożliwia wstępną klasyfikację
bakterii jelitowych i innych drobnoustrojów Gram-ujemnych na organizmy zdolne i niezdolne do
fermentacji laktozy.5,6 Agar MacConkey’a jest ponadto wykorzystywany do badań
mikrobiologicznych pokarmów.7
Skład podłoża MacConkey II Agar opracowano z myślą o skuteczniejszym zahamowaniu
stopniowego wzrostu kolonii rodzaju Proteus dla zapewnienia dokładniejszego różnicowania
bakterii zdolnych i niezdolnych do fermentacji laktozy oraz promowania wzrostu bakterii
jelitowych.
W podłożu BD MacConkey II Agar źródłem składników odżywczych są peptony. Fiolet
metylowy hamuje wzrost bakterii Gram-dodatnich, zwłaszcza paciorkowców jelitowych i
gronkowców. Różnicowanie mikroorganizmów jelitowych jest możliwe dzięki połączeniu laktozy
i czerwieni obojętnej – wskaźnika odczynu pH. Powstające kolonie są bezbarwne lub mają
zabarwienie różowe do czerwonego, w zależności od zdolności poszczególnych szczepów do
fermentacji określonego węglowodanu.
ODCZYNNIKI
BD MacConkey II Agar
Skład* w przeliczeniu na jeden litr wody oczyszczonej
Trzustkowy hydrolizat żelatyny
17,0 g
Trzustkowy hydrolizat kazeiny
1,5
Hydrolizat pepsynowy tkanki
1,5
zwierzęcej
Laktoza
10,0
Sole żółciowe
1,5
Chlorek sodu
5,0
Czerwień obojętna
0,03
Fiolet metylowy
0,001
Agar
13,5
pH 7,1 ± 0,2
*Skorygowany i (lub) uzupełniony zgodnie z wymaganiami mającymi na celu spełnienie
kryteriów wydajności.
PA-254025.07
-1-
ŚRODKI OSTROŻNOŚCI
. Wyłącznie do zastosowań profesjonalnych.
Nie należy używać płytek, jeżeli są na nich widoczne oznaki skażenia mikrobiologicznego,
odbarwienia, wyschnięcia, pęknięcia lub inne oznaki pogorszenia jakości.
Procedury aseptycznej techniki pracy z produktem, zagrożenia biologiczne oraz usuwanie
zużytego produktu opisano w dokumencie OGÓLNE INSTRUKCJE DOTYCZĄCE
STOSOWANIA.
PRZECHOWYWANIE I DOPUSZCZALNY OKRES PRZECHOWYWANIA
Po otrzymaniu, płytki należy przechowywać w ciemnym miejscu w temperaturze od 2 do 8° C, w
ich oryginalnym opakowaniu izolującym do chwili użycia. Unikać zamrażania i przegrzewania.
Posiewu na płytki można dokonywać aż do daty ważności (patrz etykieta na opakowaniu) i
inkubować w zalecanych czasach inkubacji.
Płytek z otwartych stosów zawierających po 10 płytek można używać przez okres jednego
tygodnia, przechowując w czystym miejscu w temperaturze od 2 do 8° C.
KONTROLA JAKOŚCI PRZEZ UŻYTKOWNIKA
Na płytki posiewa się próbki reprezentatywne niżej wymienionych szczepów (szczegółowe
informacje – zobacz dokument OGÓLNE INSTRUKCJE DOTYCZĄCE STOSOWANIA). Płytki
inkubuje się w temperaturze 35 ± 2°C w atmosferze tlenowej. Płytki należy badać po 18–24
godz., oceniając stopień wzrostu, wielkość kolonii, zabarwienie i selektywność.
Szczepy bakteryjne
Wzrost
Escherichia coli ATCC 25922
Wzrost; kolonie różowe
Proteus mirabilis ATCC 12453 Wzrost; kolonie bezbarwne do beżowych; zahamowanie
stopniowego wzrostu kolonii
Salmonella Typhimurium
Wzrost; kolonie bezbarwne do beżowych
ATCC 14028
Salmonella Abony DSM 4224
Wzrost; kolonie bezbarwne do beżowych
Shigella flexneri ATCC 12022
Wzrost; kolonie bezbarwne
Enterococcus faecalis
Częściowe lub całkowite zahamowanie wzrostu
ATCC 29212
Staphylococcus aureus
Częściowe lub całkowite zahamowanie wzrostu
ATCC 25923
Bez posiewu
Jasnoróżowe, nieznacznie opalizujące
PROCEDURA
Dostarczane materiały
Podłoże BD MacConkey II Agar (płytki Stacker o śr. 90 mm). Sprawdzane pod kątem
obecności mikroorganizmów.
Materiały niedostarczane
Pomocnicze pożywki hodowlane, odczynniki i wyposażenie laboratoryjne zgodnie z
wymaganiami.
Typy próbek
Opisywany produkt jest selektywnym podłożem do izolowania szczepów z rodziny
Enterobacteriaceae i innych pałeczek Gram-ujemnych. Nadaje się do badania wszystkich typów
próbek pochodzenia klinicznego oraz materiałów pochodzenia nieklinicznego (zobacz także
CHARAKTERYSTYKA WYNIKÓW I OGRANICZENIA DOTYCZĄCE PROCEDURY).
Procedura testowa
Wykonać posiew próbki możliwie jak najszybciej po dostarczeniu materiału do laboratorium.
Płytka do posiewu służy przede wszystkim do izolowania czystych kultur z próbek
zawierających florę mieszaną.
Ewentualnie, jeżeli materiał jest posiewany bezpośrednio z wymazówki, należy przetoczyć
wymazówkę po niewielkiej powierzchni na krawędzi płytki, a następnie wykonać posiew przez
PA-254025.07
-2-
rozprowadzenie po podłożu. Należy wykonać posiew także na podłoże nieselektywne, takie jak
Columbia Agar with 5% Sheep Blood, w celu wykrycia innych drobnoustrojów występujących w
próbce.
Płytki inkubuje się bez dostępu światła w temperaturze 35 ± 2°C (w przypadku podłoża
MacConkey II Agar nie należy stosować atmosfery wzbogaconej CO2), przez okres 18–24
godz., a w razie konieczności dłużej.
Wyniki
Typowa morfologia kolonii otrzymywanych na podłożu BD MacConkey II Agar:
Drobnoustroje
Wzrost
E. coli
Kolonie różowe do różowoczerwonych (wokół kolonii może
występować osad soli żółciowych)
Enterobacter, Klebsiella Kolonie śluzowe, różowe
Proteus
Kolonie bezbarwne, zahamowanie stopniowego wzrostu
pojedynczych kolonii*
Salmonella, Shigella
Kolonie bezbarwne. Zabarwienie podłoża: pomarańczowe do
bursztynowego
Pseudomonas
Kolonie nieregularne, bezbarwne do różowych
Następuje częściowe lub całkowite zahamowanie wzrostu bakterii Gram-dodatnich.
CHARAKTERYSTYKA WYNIKÓW I OGRANICZENIA DOTYCZĄCE PROCEDURY
BD MacConkey II Agar jest jednym ze standardowych podłoży stosowanych do wykonywania
pierwszego posiewu próbek pochodzenia klinicznego oraz materiałów pochodzenia
nieklinicznego. Na opisywanym podłożu obserwuje się wzrost wszystkich bakterii z rodziny
Enterobacteriaceae oraz innych pałeczek Gram-ujemnych, np. Pseudomonas i pokrewnych.5-9
Nie występuje natomiast wzrost bakterii niefermentujących oraz innych pałeczek
Gram-ujemnych wrażliwych na składniki podłoża. Przed zastosowaniem opisywanego podłoża
do izolacji konkretnych drobnoustrojów należy się zapoznać z odpowiednimi pozycjami
piśmiennictwa.5,9
Według niektórych doniesień, w przypadku inkubacji agaru MacConkey’a w atmosferze
wzbogaconej CO2 dochodzi do zahamowania wzrostu niektórych gatunków Enterobacteriaceae
oraz Pseudomonas aeruginosa.10
Wprawdzie pewne testy diagnostyczne można wykonywać bezpośrednio na opisywanym
podłożu, jednak w celu przeprowadzenia pełnej identyfikacji konieczne jest wykonanie badania
biochemicznego oraz, jeśli jest to wskazane, badania immunologicznego z użyciem czystych
hodowli. Należy zapoznać się z odpowiednim piśmiennictwem.5-7,9
PIŚMIENNICTWO
1. MacConkey, A.T. 1900. Note on a new medium for the growth and differentiation of the Bacillus coli
communis and the Bacillus typhi abdominalis. The Lancet, Part II:20.
2. MacConkey, A. 1905. Lactose-fermenting bacteria in faeces. J. Hyg. 5:333-379.
3. Levine, M., and H.W. Schoenlein. 1930. A compilation of culture media for the cultivation of
microorganisms. The Williams & Wilkins Company, Baltimore.
4. MacFaddin, J.F. 1985. Media for isolation-cultivation- identification-maintenance of medical bacteria,
vol. I. Williams & Wilkins, Baltimore.
5. Baron, E.J., L.R. Peterson, and S.M. Finegold. 1994. Bailey & Scott's diagnostic microbiology, 9th ed.
Mosby-Year Book, Inc., St. Louis.
6. Farmer III, J.J. 2003. Enterobacteriaceae: introduction and identification. In: Murray, P. R., E. J.
Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed.
American Society for Microbiology, Washington, D.C.
7. Downes, F.P., and K. Ito. 2001. Compendium of methods for the microbiological examination of
foods. 4th edition. American Public Health Association (APHA). Washington, D.C. USA.
8. Thomson, R.B., and J.M. Miller. 2003. Specimen collection, transport, and processing: bacteriology.
In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of
clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
9. Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). 2003. Manual of
clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
10. Mazura-Reetz, G., T.R. Neblett, and J.M. Galperin. 1979. MacConkey agar: CO2 vs. ambient
incubation, abstr. C 179, p. 339. Abstr. 79th Annu. Meet. Am. Soc. Microbiol. 1979.
PA-254025.07
-3-
PAKOWANIE / DOSTĘPNOŚĆ
BD MacConkey II Agar
Nr katalogowy 254025
Nr katalogowy 254078
Gotowe podłoża na płytkach hodowlanych, 20
płytek
Gotowe podłoża na płytkach hodowlanych, 120
płytek
DODATKOWE INFORMACJE
W celu uzyskania dodatkowych informacji należy się skontaktować z lokalnym przedstawicielem
firmy BD.
Becton Dickinson GmbH
Tullastrasse 8 – 12
D-69126 Heidelberg/Germany
Phone: +49-62 21-30 50
Fax: +49-62 21-30 52 16
[email protected]
http://www.bd.com
http://www.bd.com/europe/regulatory/
ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection
BD, BD Logo and all other trademarks are the property of Becton, Dickinson and Company. © 2014 BD
PA-254025.07
-4-