BD MacConkey Agar without Salt

PODŁOŻE NA PŁYTKACH
GOTOWE DO UŻYCIA —
INSTRUKCJA UŻYTKOWANIA
PA-256009.01
Wersja poprawiona: Kwi
2013
BD MacConkey Agar without Salt
PRZEZNACZENIE
BD MacConkey Agar without Salt jest różnicującym podłożem przeznaczonym do izolowania
Enterobacteriaceae, gronkowców i enterokoków z próbek klinicznych, takich jak mocz.
ZASADY I OBJAŚNIENIE PROCEDURY
Metoda mikrobiologiczna.
Zwykłe podłoże MacConkey Agar, takie jak BD MacConkey II Agar, stosuje się do wybiórczej
izolacji bakterii z rodziny Enterobacteriaceae i niektórych drobnoustrojów niefermentujących.1,2
Zahamowanie wzrostu bakterii Gram-dodatnich wynika głównie z obecności fioletu
krystalicznego. W odróżnieniu od zwykłego podłoża MacConkey Agar, podłoże BD MacConkey
Agar without Salt nie hamuje wzrostu bakterii Gram-dodatnich, takich jak paciorkowce jelitowe i
gronkowce, gdyż nie zawierają fioletu krystalicznego.2
W podłożu BD MacConkey Agar without Salt źródłem składników odżywczych są peptony.
Sole kwasów żółciowych działają jak słabe inhibitory wzrostu bakterii pochodzenia innego niż
jelitowe i przyczyniają się do hamowania stopniowego wzrostu kolonii bakterii z rodzaju Proteus.
Laktoza wraz z czerwienią obojętną służy jako wskaźnik fermentacji laktozy. Na obu podłożach,
w zależności od zdolności izolatu do fermentacji laktozy, powstają kolonie od bezbarwnych do
pomarańczowych albo kolonie różowe. Zwiększoną zdolność do hamowania stopniowego
wzrostu kolonii bakterii z rodzaju Proteus uzyskano dzięki brakowi soli. Zatem ta pożywka jest
szczególnie polecana do analizy ilościowej bakterii obecnych w moczu.
ODCZYNNIKI
Skład* w przeliczeniu na litr wody oczyszczonej
Peptony
20,0 g
Laktoza
10,0
Sole kwasów żółciowych
5,0
Czerwień obojętna
0,075
Agar
12,0
pH
7,4 ± 0,2
*Skorygowany i/lub uzupełniony zgodnie z wymaganiami, których celem jest spełnienie
kryteriów wydajności.
ŚRODKI OSTROŻNOŚCI
. Wyłącznie do zastosowań profesjonalnych.
Nie należy używać płytek, jeżeli są na nich widoczne oznaki skażenia mikrobiologicznego,
odbarwienia, wyschnięcia, pęknięcia lub inne oznaki pogorszenia jakości.
Procedury aseptycznej techniki pracy z produktem, zagrożenia biologiczne oraz usuwanie
zużytego produktu opisano w dokumencie OGÓLNA INSTRUKCJA DOTYCZĄCA
STOSOWANIA.
WARUNKI I OKRES PRZECHOWYWANIA
Dostarczone płytki należy przechowywać w zaciemnionym pomieszczeniu, w temperaturze od
2 do 8°C, w oryginalnych opakowaniach w formie rękawa, aż do momentu użycia. Nie
zamrażać i nie przegrzewać. Płytki należy wykorzystać do posiewu bakterii przed upływem daty
ważności (zobacz etykietę na opakowaniu) i inkubować zgodnie z zalecanymi czasami inkubacji.
Płytki z otwartego zestawu 10 płytek można zużyć w ciągu tygodnia, pod warunkiem
przechowywania w czystym miejscu w temperaturze od 2 do 8°C.
PA-256009.01
-1-
KONTROLA JAKOŚCI PRZEZ UŻYTKOWNIKA
Reprezentatywne próbki podłoża zaszczepia się hodowlami wymienionych niżej szczepów
(szczegółowe informacje — patrz dokument OGÓLNA INSTRUKCJA DOTYCZĄCA
STOSOWANIA). Hodowlę należy inkubować w warunkach tlenowych przez 18 – 14 godzin w
temperaturze 35 – 37°C. Nie inkubować w atmosferze wzbogaconej dwutlenkiem węgla.
Szczepy
Escherichia coli
ATCC 25922
Proteus mirabilis
ATCC 12453
Salmonella Typhimurium
ATCC 14028
Shigella flexneri
ATCC 12022
Enterococcus faecalis
ATCC 29212
Staphylococcus aureus
ATCC 25923
Bez posiewu
Wzrost
Kolonie barwy od różowej do czerwonej; mogą być otoczone
strefami wytrącenia osadu soli kwasów żółciowych, podłoże
barwy od różowej do czerwonej
Kolonie jasnobrązowe, stopniowy wzrost zredukowany;
podłoże barwy od żółtej do pomarańczowej
Kolonie jasnobrązowe, podłoże barwy od żółtej do
pomarańczowej
Kolonie jasnobrązowe, podłoże barwy pomarańczowej
Małe kolonie barwy czerwonawej
Małe lub średnie kolonie barwy różowej
Czerwonawopomarańczowe, nieznacznie opalizujące
PROCEDURA
Dostarczane materiały
BD MacConkey Agar Without Salt, dostarczane na płytkach 90 mm Stacker. Sprawdzane pod
względem obecności drobnoustrojów.
Materiały niedostarczane
Pomocnicze pożywki hodowlane, odczynniki oraz wyposażenie laboratoryjne zgodne z
wymaganiami.
Typy próbek
Podłoże BD MacConkey Agar Without Salt zasadniczo można stosować do wszystkich próbek
pochodzenia klinicznego. Jednak głównym zastosowaniem jest badanie moczu (patrz także
CHARAKTERYSTYKA WYDAJNOŚCIOWA I OGRANICZENIA PROCEDURY). Można
stosować mocz ze strumienia środkowego lub z cewnika bądź mocz pobrany drogą nakłucia
nadłonowego. Podczas pobierania próbek moczu należy przestrzegać zasad techniki aseptycznej.
Mocz należy posiać pasmowo bezpośrednio na podłożu nie później niż 2 godziny po pobraniu
bądź przechowywać w lodówce (nie dłużej niż przez 24 godziny), aby uniknąć nadmiernego
wzrostu czynników zakaźnych i zanieczyszczających przed zaszczepieniem podłoża.
Procedura testowa
Pobrać próbkę nierozcieńczonego, dobrze wymieszanego moczu za pomocą ezy kalibrowanej
(0,01 lub 0,001 mL). Upewnić się, czy objętość próbki zaczerpnięta ezą jest właściwa.
Wykonać posiew próbki pojedynczym pociągnięciem przez środek płytki, a następnie
dodatkowo rozprowadzić tak zaszczepione inokulum. 6-9
W przypadku posiewu na omawianych podłożach próbek innych niż mocz posiać pasmowo
w celu uzyskania pojedynczych kolonii. Innym sposobem, jeżeli materiał jest hodowany
bezpośrednio z wymazu, jest przetoczenie wymazówki po niewielkiej powierzchni krawędzi
płytki, a następnie posiew pasmowy z zaszczepionego obszaru w celu uzyskania pojedynczych
kolonii.
Należy również wykonać posiew wszystkich próbek na płytce z podłożem agarowym z krwią,
takim jak BD Columbia Agar with 5% Sheep Blood, w celu wykrycia izolatów o wysokich
wymaganiach odżywczych, które mogą nie rosnąć na podłożu BD MacConkey Agar Without
Salt. Inkubować płytkę z podłożem agarowym z krwią w atmosferze tlenowej wzbogaconej
CO2, natomiast podłoże MacConkey Agar — w powietrzu z otoczenia, w temperaturze od 35
do 37°C, przez okres od 24 do 48 h.
PA-256009.01
-2-
Wyniki
Po inkubacji drobnoustroje fermentujące laktozę, takie jak E. coli, będą mieć postać kolonii
barwy od różowej do czerwonej i mogą być otoczone mętnym, różowym osadem kwasów
żółciowych. Drobnoustroje niefermentujące laktozy, takie jak Proteus spp., będą bezbarwne.
Mikroorganizmy niefermentujące laktozy mogą zmieniać zabarwienie podłoża na
żółtawobeżowe, natomiast czerwonawopomarańczowe zabarwienie pod wpływem wzrostu
organizmów fermentujących laktozę zmienia się na kolor różowy. Gronkowce tworzą na obu
podłożach kolonie barwy od bladoróżowej do różowej, natomiast paciorkowce jelitowe — małe,
czerwone kolonie. Ostateczna identyfikacja izolowanych szczepów wymaga wykonania
dodatkowych testów biochemicznych.
CHARAKTERYSTYKA WYDAJNOŚCIOWA I OGRANICZENIA PROCEDURY
Podłoże BD MacConkey Agar Without Salt jest przeznaczone do izolowania wielu
mikroorganizmów wykazujących wzrost w warunkach tlenowych, takich jak Enterobacteriaceae,
Pseudomonas i inne niefermentujące pałeczki Gram ujemne, enterokoki, gronkowce i wiele
innych organizmów izolowanych z moczu lub innych próbek klinicznych oraz materiałów
nieklinicznych takich jak żywność.2-6
Paciorkowce i inne drobnoustroje wymagające do wzrostu krwi lub surowicy mogą na
omawianym podłożu wykazywać brak wzrostu albo wyłącznie wzrost niewystarczający.
W związku z tym w przypadku podejrzenia występowania organizmów tego typu próbkę
należy zaszczepić także na podłożu agarowym z krwią lub agarze czekoladowym.
Na podłożu tym nie wykazują wzrostu patogeny układu moczowego i płciowego, takie jak
Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis, Chlamydia, Ureaplasma oraz inne organizmy
o wysokich wymaganiach odżywczych. Właściwe techniki wykrywania tych organizmów
przedstawiono w odpowiednich pozycjach piśmiennictwa.7-9
Pomimo że na opisywanej pożywce można wykonywać bezpośrednio różnicowanie na
podstawie fermentacji laktozy oraz pewne testy diagnostyczne, to w celu przeprowadzenia
pełnej identyfikacji konieczne jest wykonanie badań biochemicznych oraz, jeśli jest to
wskazane, badań immunologicznych z użyciem czystych hodowli.
Donoszono, że inkubacja na płytkach z podłożem MacConkey Agar przy zwiększonej
zawartości CO2 w atmosferze może hamować wzrost i odzysk wielu szczepów laseczek Gramujemnych.10
Identyfikacja szczepów wyizolowanych z tych podłoży wymaga wykonania dalszych testów
biochemicznych i/lub serologicznych.
PIŚMIENNICTWO
1. MacConkey, A. 1905. Lactose-fermenting bacteria in feces. J. Hyg. 5:333-379.
2. MacFaddin, 1985. Media for the isolation-cultivation-identification-maintenance of medical
bacteria: Williams and Wilkins, Baltimore.
3. Hitchins, A. D., P. A. Hartman, and E. C. D. Todd. 1992. Coliforms-Escherichia coli and its
Toxins, p. 325-369. In C. Vanderzant, and D. F. Splittstoesser (ed.), Compendium of
methods for the microbiological examination of foods, 3rd ed. American Public Health
Association, Washington. D.C.
4. Food and Drug Administration. 1995. Bacteriological analytical manual, 8th ed. AOAC
International. Gaithersburg, MD.
5. WHO. 1963. International Standards for Drinking Waters, 7th ed., Churchill Ltd. London.
6. DGHM. 1983. Verfahrensrichtlinien für die mikrobiologische Diagnostik, chapter 2.1. Fischer
Verlag, Stuttgart, Germany.
7. Barry, A.L., P.B. Smith, and M. Turck. 1975. Cumitech 2, Laboratory diagnosis of urinary tract
infections. Coordinating ed., T.L. Gavan. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
8. Thomson, R.B., and J.M. Miller. 2003. Specimen collection, transport, and processing:
bacteriology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken
(ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology,
Washington, D.C.
PA-256009.01
-3-
9. Clarridge, J.E., M.T. Pezzlo, and K.L. Vosti. 1987. Cumitech 2A, Laboratory diagnosis of
urinary tract infections. Coordinating ed., A.S. Weissfeld. American Society for Microbiology,
Washington, D.C.
10. Mazura-Reetz, G. T. Neblett, and J. M. Galperin. 1979. MacConkey Agar: CO2 vs. ambient
incubation. Abst. Ann. Mtg. American Society for Microbiology. C179.
PAKOWANIE/DOSTĘPNOŚĆ
BD MacConkey Agar Without Salt
Nr kat. 256009
Gotowe podłoża na płytkach hodowlanych, 20 płytek
Nr kat. 257286
Gotowe podłoża na płytkach hodowlanych, 120 płytek
DODATKOWE INFORMACJE
W celu uzyskania dodatkowych informacji należy skontaktować się z lokalnym przedstawicielem
firmy BD.
Becton Dickinson GmbH
Tullastrasse 8 – 12
D-69126 Heidelberg/Germany
Phone: +49-62 21-30 50
Fax: +49-62 21-30 52 16
[email protected]
http://www.bd.com
http://www.bd.com/europe/regulatory/
ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection
BD, BD Logo and all other trademarks are property of Becton, Dickinson and Company.
PA-256009.01
-4-
© 2013 BD