docĆWICZENIE 6 Barwniki roślinne Ekstrakcja barwników
download 
Reklamacja Transkrypt
ĆWICZENIE 6 Barwniki roślinne Ekstrakcja barwników
ĆWICZENIE 6 Barwniki roślinne Ekstrakcja barwników asymilacyjnych Potrzebne odczynniki i materiały na 1 zespół (x5 na 1 grupę ćwiczeniową): 400 mg - zhomogenizowany w ciekłym azocie proszek z natki pietruszki 6 ml - etanol 96% 2x probówki plastikowe typu Falcon na 15 ml 5x probówki szklane 2x pipetka plastikowa 2x stojak: na probówki (1x) i odczynniki (1x) wrząca łaźnia wodna wirówka waga laboratoryjna Wykonanie Do dwóch plastikowych probówek na 15 ml odwazyć po 200 mg zhomogenizowanego wcześniej w ciekłym azocie proszku z natki pietruszki. Do pierwszej wlać 6 ml wody destylowanej a do drugiej 6 ml 96% etanolu. Obie probówki wstawić na 5 min do wrzącej łaźni wodnej a następnie odwirować przez 5 min. Z każdej z probówek pobrac delikatnie nadsącz (tak aby nie naruszyć peletu) do czystych szklanych probówek. Porównac zabarwienie ekstraktu wodnego i etanolowego. Następnie ekstrakt etanolowy rozpipetować po ok 2 ml do trzech kolejnych pobówek i pozostawic do dalszych doświadczeń. Rozpuszczalnik Zabarwienie H20 Etanol 96% Rozpuszczalność chlorofilu Potrzebne odczynniki i materiały na 1 zespół (x5 na 1 grupę ćwiczeniową): ekstrakt etanolowy z poprzedniego doswiadczenia 3 ml – benzyna ekstrakcyjna 1x probówka szklana 2x pipetka plastikowa 2x stojak: na probówki (1x) i odczynniki (1x) Wykonanie Do jednej z probówek z alkoholowym ekstraktem chlorofilu z poprzedniego doświadczenia dolać około 1,5 razy więcej benzyny ekstrakcyjnej, przez chwilę mocno wytrząsać, a następnie probówkę odstawić do statywu do ponownego rozdzielenia się mieszaniny. Zanotować zabarwienie górnej i dolnej warstwy cieczy. Warstwa górna dolna Rozpuszczalnik Zabarwienie Barwniki asymilacyjne 18 Reakcja chlorofilu z zasadami Potrzebne odczynniki i materiały na 1 zespół (x5 na 1 grupę ćwiczeniową): ekstrakt etanolowy z pierwszego doswiadczenia 2,5 ml – benzyna ekstrakcyjna 0,5 ml - 10% NaOH 1x probówka szklana 3x pipetka plastikowa 2x stojak: na probówki (1x) i odczynniki (1x) wrząca łaźnia wodna Wykonanie Do 2 ml etanolowego ekstraktu chlorofilu z pierwszego doświadczenia dodać 0,5 ml roztworu zasady sodowej, wymieszać i wstawić na 2 min do wrzącej łaźni wodnej. Po ochłodzeniu roztworu dodać 2,5 ml benzyny ekstrakcyjnej, wstrząsnąć i odstawić probówkę do rozdzielenia się warstw cieczy. Zanotować zabarwienie górnej i dolnej warstwy cieczy. Porównac zabarwienie warstw z poprzednim doswiadczeniem Warstwa Rozpuszczalnik Zabarwienie Barwniki asymilacyjne górna dolna Reakcja chlorofilu z kwasami Potrzebne odczynniki i materiały na 1 zespół (x5 na 1 grupę ćwiczeniową): ekstrakt etanolowy z pierwszego doswiadczenia 1 ml – 10% HCl 2 kryształki - octan miedzi 2x probówka szklana 2x pipetka plastikowa 2x stojak: na probówki (1x) i odczynniki (1x) wrząca łaźnia wodna Wykonanie Do probówki z 2 ml etanolowego ekstraktu chlorofilu z doświadczenia pierwszego dodać 5-6 kropli 10% kwasu solnego i dokładnie wymieszać. Zanotować zabarwienie ekstraktu. Część roztworu odlać do czystej probówki i pozostawić dla kontroli, a do pozostałej objętości wrzucić 2 kryształki octanu miedzi i ogrzać na wrzącej łaźni wodnej. Porównać zabarwienia roztworów. Roztwór ekstrakt alkoholowy chlorofilu ekstrakt + kwas feofityna + octan miedzi Barwa roztworu 19 Chromatografia bibułowa barwników asymilacyjnych 200 mg proszku z liści szpinaku odważyć w probówce na 7 ml. Zalać 4 ml 96% alkoholem etylowym . Wytrząsać przez kilka minut. Przesączyć do probówki przez bibułę filtracyjną umieszczoną w lejku. Ekstrakt przechowywać w łaźni lodowej w ciemności. Na pasek bibuły o szerokości 1.5 cm i długości 20 cm nanieść kapilarą wyciąg barwników z liści w następujący sposób: 2 cm od końca paska bibuły nanosić krople barwników do momentu aż powstanie linii. Zostawić bibułę do wysuszenia. Zabieg nanoszenia powtórzyć kilka razy aż powstanie ciemnozielona linia grubości kilku mm. Do szklanej probówki nalać 2-3 cm3 mieszaniny rozwijającej: eter naftowy+aceton 9:1. Włożyć pasek bibuły do probówki i zanurzamy koniec paska tak aby pasek barwników był nad roztworem rozwijającym. Po rozwinięciu chromatogramu wyjąć bibułę i wysuszyć. Właściwości antocyjanin i betacyjanidyn Potrzebne odczynniki i materiały na 1 zespół (x5 na 1 grupę ćwiczeniową): 200 mg - zhomogenizowany w ciekłym azocie proszek z liści kapusty czerwonej 200 mg - zhomogenizowany w ciekłym azocie proszek z buraka czerwonego 2x probówki plastikowe typu Falcon na 15 ml 1 ml 10% HCl 1 ml 10% NaOH 6x probówki szklane 5x pipetka plastikowa 2x stojak: na probówki (1x) i odczynniki (1x) wrząca łaźnia wodna wirówka waga laboratoryjna 20 Wykonanie Do dwóch plastikowych probówek na 15 ml odwazyć: do pierwszej 200 mg zhomogenizowanego wcześniej w ciekłym azocie proszku z z liści kapusty czerwonej, do drugiej 200 mg zhomogenizowanego wcześniej w ciekłym azocie proszku z buraka czerwonego. Do każdej probówki wlać 6 ml wody destylowanej. Obie probówki wstawić na 5 min do wrzącej łaźni wodnej a następnie odwirować przez 5 min. Przygotować sześć szklanych probówek. Do probówki nr 1, 2 i 3 dodac delikatnie po ok. 2 ml nadsączu (tak aby nie naruszyć peletu) z roztworu wodnego z liści kapusty, a do probówek nr 4, 5 i 6 po ok. 2 ml nadsączu z wodnego roztworu z buraka. Następnie do probówek 1 i 4 dodać 6 kropli 10% HCl, do probówek 2 i 5 dodać 6 kropli wody destylowanej, do probówek 3 i 6 dodać 6 kropli 10% NaOH. Porównać zabarwienie w probówkach. 21
