62798_Platelia Candida Ag - Bio-Rad

56519-56524-64494
SABOURAUD AGAR
PODŁOŻE AGAROWE DO IZOLACJI GRZYBÓW
1- ZASTOSOWANIE
Podłoże Sabouraud jest przeznaczone do izolacji i hodowli grzybów.
Podłoże to zalecane jest do:
•
Izolacji grzybów z materiałów klinicznych nie zawierających towarzyszącej flory bakteryjnej. W przypadku
flory mieszanej preferuje się wysiew na:
- podłoże Sabouraud z chloramfenikolem
- podłoże Sabouraud z gentamycyną.
•
Hodowli grzybów do identyfikacji.
•
Testów jałowości produktów farmaceutycznych (podłoże płynne rekomendowane w Farmakopei
Francuskiej) oraz produktów spożywczych; w tych przypadkach próbówki z zaszczepionym podłożem należy
inkubować w cieplarce lub w temperaturze pokojowej przez 2 tygodnie.
Podłoże może także posłużyć jako baza do przygotowania podłoży wzbogaconych, np. z krwią lub witaminami.
2- ZASADA METODY
Podłoże Sabouraud zapewnia podstawowe czynniki (peptony i glukoza) umożliwiające wzrost grzybów.
3- POSTAĆ PODŁOŻA
•
Podłoże gotowe do użycia: (do rozlania)
- butelki 6 x 100 ml (SAB)
- skosy 25 x 8 ml
•
Podłoże w proszku:
- opakowanie 500 g
nr kat. 56519
nr kat. 56524
nr kat. 64494
4- PODSTAWOWE SKŁADNIKI (g/l wody destylowanej)
Podłoże agarowe przygotowane zgodnie ze składem podłoża C opisanym w Farmakopei Europejskiej (1).
Peptony
10
Glukoza
40
Agar
15
Przygotowanie podłoża:
Przed użyciem wstrząsnąć suche podłoże w pojemniku.
Rozpuścić 42 g proszku w 1 litrze jałowej wody destylowanej. Po 5 minutach dobrze wymieszać do uzyskania
jednorodnej zawiesiny. Ogrzewać, często mieszając, do zagotowania. Jeśli trzeba, doprowadzić pH do 5,8.
Wysterylizować w autoklawie w temp. 121°C przez 20 minut i rozlać do probówek lub na płytki.
5- PRZECHOWYWANIE
•
Podłoże gotowe użycia (do rozlania): w temperaturze +2 do 8°C
•
Podłoże w proszku: w szczelnie zamkniętym pojemniku, w suchym miejscu, w temperaturze +15 do 25°C.
Data ważności i numer serii znajduje się na opakowaniu.
6- PROCEDURA
Dostarczony materiał:
•
Podłoże agarowe Sabouraud.
Inokulacja:
Na podłoże można wysiać każdy materiał kliniczny. Należy zapoznać się z zaleceniami dotyczącymi
przechowywania materiałów biologicznych. (2).
Inkubacja:
Czas i temperatura inkubacji zależy od charakterystyki i typu badanych gatunków grzybów.
Warunki inkubacji określa użytkownik.
Temperatura:
Optymalną temperaturą do wykrywania grzybów w materiałach klinicznych jest 30-35°C. Inkubacja kilku podłoży
w różnych temperaturach (25-27°C, 30-35°C) jest uzasadniona w przypadku badania w kierunku określonych
gatunków grzybów.
Czas inkubacji:
Zależy głównie od rodzaju wysianego materiału oraz spodziewanych gatunków grzybów.
Najczęściej zaleca się:
•
W przypadku wszystkich materiałów klinicznych, badanych na obecność drożdżaków (z wyjątkiem
C.neoformans): inkubacja 24-72 godziny, codzienne oglądanie hodowli.
•
W przypadku głębokich materiałów klinicznych: inkubacja 1-2 tygodnie, codzienne oglądanie hodowli.
•
Hodowle zaszczepione materiałem pobranym ze skóry lub jej wytworów, badanie w kierunku dermatofitów:
inkubacja 3-4 tygodnie, oglądanie hodowli dwa razy w tygodniu.
•
Przy podejrzeniu zakażenia C.neoformans lub grzybami dimorficznymi, po wysianiu płynu mózgowordzeniowego lub innego materiału inkubacja 1 miesiąc, codzienne oglądanie hodowli.
Odczyt i interpretacja
•
Po inkubacji należy obserwować wzrost kolonii drobnoustrojów.
•
Reprezentatywne, pojedyncze kolonie grzybów należy pobrać do identyfikacji: określić cechy morfologiczne,
wykonać preparat mikroskopowy, testy biochemiczne i uzupełniające.
•
Identyfikację kolonii drożdżaków (białe, matowe, o średnicy 1-2 mm) można wykonać za pomocą testu
Auxacolor® 2 (nr kat. 56513).
7- KONTROLA JAKOŚCI
•
Podłoże gotowe do użytku jest przejrzyste, jasno-bursztynowe.
•
Podłoże w proszku ma beżową barwę.
•
Morfologia kolonii szczepów wzorcowych na podłożu Sabouraud:
SZCZEP
Candida albicans ATCC 26790
Candida tropicalis ATCC 750
Candida glabrata
Cryptococcus neoformans
Trichophyton rubrum
Trichophyton violaceum
Epidermophyton floccosum
Microsporum canis
Fusarium
WARUNKI INKUBACJI
24-48 godzin w temp. 30-35°C
24-48 godzin w temp. 30-35°C
24-48 godzin w temp. 30-35°C
24-48 godzin w temp. 30-35°C
7 dni w temp. 30-35°C
i 7 dni w temp. 20-25°C
7 dni w temp. 30-35°C
i 7 dni w temp. 20-25°C
7 dni w temp. 30-35°C
i 7 dni w temp. 20-25°C
7 dni w temp. 30-35°C
i 7 dni w temp. 20-25°C
7 dni w temp. 30-35°C
i 7 dni w temp. 20-25°C
RODZAJ WZROSTU
Wzrost dobry
Wzrost dobry
Wzrost dobry
Wzrost dobry
Kolonie meszkowate, rewers
pigmentowany czerwono-brązowy
Wzrost dobry, pigment fioletowy
Kolonie pudrowane, rewers
pigmentowany czerwono-brązowy
Wzrost dobry, kolonie skórzaste,
rewers pigmentowany
pomarańczowo-żółty
Wzrost dobry, pigment fioletowy
8- KONTROLA JAKOŚCI PRODUCENTA
Każdy produkt Bio-Rad został przygotowany zgodnie z systemem jakości, poczynając od materiałów
wyjściowych, aż do ostatecznego produktu komercyjnego.
Każda seria ostatecznego produktu podlega oznaczeniu kontrolnemu i jest dopuszczona do użytku, jeśli spełnia
wymagane kryteria. Bio-Rad posiada protokoły produkcji i kontroli jakości każdej serii.
9- OGRANICZENIA METODY
•
Przegrzanie podłoża o kwaśnym pH powoduje utratę utwardzających właściwości agaru.
10- BIBLIOGRAFIA
1. Pharmacopée Européenne, Addendum 4.2 de la IVe édition, 2002, p. 2841.
2. Basic Laboratory Procedures in Clinical Bacteriology. World Health Organization. Geneva.1991. 1st edition.
Bio-Rad
3, boulevard Raymond Poincaré
92430 Marnes-la-Coquette France
Tel. : +33 (0) 1 47 95 60 00
Fax : +33 (0) 1 47 41 91 33
11/2003
2