GC/C-IRMS

Rozróżnianie steroidów endogennych od
egzogennych za pomocą GC/C/IRMS
Rys historyczny
pocz. XX w.
Pierwsze badania antydopingowe u koni wyścigowych
(Warszawa, Budapeszt, Wiedeń)
1910 Alfons Bukowski (1858-1921) wykazał obecność
alkaloidów
w ślinie koni
1967 Utworzenie Komisji Medycznej Międzynarodowego
Komitetu
Olimpijskiego (MKOl)
– zakaz stosowania stymulantów i narkotyków
1999 Powołanie Światowej Agencji Antydopingowej (WADA)
2004 Przejęcie przez WADA (od MKOl) kontroli nad światowym
systemem antydopingowym
doop w dialekcie flamandzkim oznacza każdą lepką substancję używaną jako
smar lub środek pobudzający; napój kolonistów holenderskich
(wywar z ziół + proch strzelniczy) – jego picie dooping
1889
W jednym z angielskich słowników słowem doping opisano mieszaninę
opium i narkotyków stosowana u koni
1933
Termin doping pojawił się w leksykonach sportowych
1999
Deklaracja Lozańska w Sprawie Dopingu w Sporcie:
Doping - stosowanie podstępu (w postaci substancji lub metody)
potencjalnie niebezpiecznego dla zdrowia sportowców i/lub
umożliwiającego poprawę uzyskiwanych przez nich wyników lub obecność
w organizmie sportowca substancji, lub stwierdzenie stosowania metody,
znajdujących się na liście dołączonej do Kodeksu Antydopingowego Ruchu
Olimpijskiego
S1. ŚRODKI ANABOLICZNE
S2. HORMONY I POKREWNE SUBSTANCJE
S3. BETA-2 AGONIŚCI
S4. ANTAGONIŚCI I MODULATORY HORMONÓW
S5. DIURETYKI I INNE ŚRODKI MASKUJĄCE
S6. STYMULANTY
S7. NARKOTYKI
S8. KANABINOIDY
S9. GLUKOKORTYKOSTEROIDY
M1. METODY POPRAWIAJĄCE TRANSPORT TLENU
M2. MANIPULACJE CHEMICZNE I FIZYCZNE
M3. DOPING GENETYCZNY
P1. ALKOHOL
P2. BETA-BLOKERY
S1. ŚRODKI ANABOLICZNE
S2. HORMONY I POKREWNE SUBSTANCJE
S3. BETA-2 AGONIŚCI
S4. ANTAGONIŚCI I MODULATORY HORMONÓW
S5. DIURETYKI I INNE ŚRODKI MASKUJĄCE
S6. STYMULANTY
S7. NARKOTYKI
Zabronione na zawodach
S8. KANABINOIDY
S9. GLUKOKORTYKOSTEROIDY
M1. METODY POPRAWIAJĄCE TRANSPORT TLENU
M2. MANIPULACJE CHEMICZNE I FIZYCZNE
M3. DOPING GENETYCZNY
P1. ALKOHOL
P2. BETA-BLOKERY
tylko w niektórych dyscyplinach
Analityka
GRUPA
ANALIZA
stymulanty
narkotyki
SAA
b2-agoniści
diuretyki
hormony
peptydowe
HPLC/UV
GC/NPD-FID
GC/MS
GC/MS
IDENT.
GC/MS
GC/MS
hCG
GC/MS
GC/HRMS
Analityka
GRUPA
ANALIZA
stymulanty
narkotyki
SAA
b2-agoniści
diuretyki
hormony
peptydowe
HPLC/UV
GC/NPD-FID
GC/MS
GC/MS
IDENT.
GC/MS
GC/MS
GC/MS
GC/HRMS
glikokortykosteroidy
hCG
Analityka
LC/MS/MS
GRUPA
ANALIZA
stymulanty
narkotyki
SAA
b2-agoniści
diuretyki
hormony
peptydowe
HPLC/UV
GC/NPD-FID
GC/MS
GC/MS
IDENT.
GC/MS
GC/MS
GC/MS
GC/HRMS
glikokortykosteroidy
hCG
Analityka
LC/MS/MS
GRUPA
stymulanty
narkotyki
SAA
b2-agoniści
diuretyki
hormony
peptydowe
ANALIZA
GC/MS
IDENT.
GC/HRMS
glikokortykosteroidy
hCG
SAA
C
A
D
B
Schemat pierścieniowy
perhydrocyklopentanofenantrenu
CH3 OH
CH3
CH3
O
OH
CH3
O
Testosteron
(4-androsten-17b-ol-3-on)
Epitestosteron
(4-androsten-17-ol-3-on)
CH3 OH
CH3
O
Testosteron
1
CH3 O
CH3
O
2
Androstendion
2
4
3
CH3 O
CH3 O
CH3
CH3
OH
OH
H
Etiocholanolon
1 - 17b-hydroxysteroidowa dehydrogenaza
2 - 3-hydroxysteroidowa dehydrogenaza
3 - 5b-reduktaza
4 - 5-reduktaza
H
Androsteron
Analityka
Wskaźnik T/E (testosteron/epitestosteron)
Kryterium WADA
4
GC/C/IRMS
Analiza GC/MS
T/E>4,0
potwierdzenie
T/E
GC/C-IRMS
T/E<4,0
wynik negatywny
GC/C/IRMS
GC, gas chromatography – chromatograf gazowy
C, combustion – spalanie, komora spalania
IRMS, isotope ratio mass spectometry – izotopowy spektrometr mas
komora spalania
CH3 OH
CH3
O
+ 850 °C
Cn Hx Oy
CH3 OH
CH3
O
y CO2
+
x/2 H2O
Izotopowa Spektrometria Mas
Konstrukcja spektrometrów IRMS umożliwia równoczesny pomiar natężeń
prądów jonowych molekuł izotopowych zawierających mierzone izotopy.
Trzy mierzone prądy jonowe reprezentujące stosunki m/q równe 44, 45 i 46, są
budowane przez następujące molekuły izotopowe:
I 44 = 12C16O2
I 45 = 13C16O2; 12C16O17O
I 46 = 12C16O18O; 12C17O2; 13C16O17O
Stosunki izotopowe:
r45 = I 45/ I 44
r46 = I 46/ I 44
12C
neutrony: 6
protony: 6
/ 13 C
neutrony: 7
protony: 6
98,89 %
1,11 %
PRZYGOTOWANIE PRÓBEK
MATERIAŁ DO BADAŃ
MOCZ
PRZYGOTOWANIE PRÓBEK
hydroliza,
ekstrakcja
Analiza IRMS
frakcja 1 i 4
frakcja 3 i 5
WYNIK
endogenny
egzogenny
androsteron
-28,7‰
-31,9 ‰
etiocholanolon
-29,8 ‰
-33,7 ‰
11-ketoetiocholanolon
11-hydroksyandrosteron
pregnandiol
pregnantriol