0843 Polyclonal Rabbit Anti-Human Prostate-Specific

0843
Polyclonal Rabbit
Anti-Human
Prostate-Specific Antigen
Nr kat. A0562
Przeznaczenie
Do diagnostyki in vitro.
Polyclonal Rabbit Anti-Human Prostate-Specific Antigen, nr kat. A0562, jest stosowane do identyfikacji
ludzkiego antygenu gruczołu krokowego (PSA) za pomocą immunoprecypitacji w Ŝelu, technik
immunohistochemicznych (1,2) i immunoblotów (2,3). Przeciwciało to jest przydatne w identyfikacji guzów
gruczołu krokowego, zwłaszcza niskozróŜnicowanych nowotworów (4). Interpretacja kliniczna dodatniego lub
ujemnego odczynu musi być uzupełniona przez ocenę morfologiczną, wykonanie odpowiednich prób
kontrolnych i interpretowana przez doświadczonego patologa w kontekście historii choroby pacjenta i innych
badań diagnostycznych.
Synonim antygenu
Human kallikrein 3 (hK3) (5).
Streszczenie
i informacje ogólne
Prostate-Specific Antigen (PSA) jest białkiem o masie 33 kDa, naleŜącym do proteaz rodziny kalikrein (6). Jest
pierwotnie produkowany przez nabłonek prostaty i nabłonek wyścielający gruczołów okołocewkowych (5), ydzielany
w stęŜeniach 0,5-2,0 g/L do płynu nasiennego, gdzie poprzez trawienie głównych białek Ŝelujących upłynnia Ŝel
powstający po ejakulacji. Pięć do sześciu izoenzymów PSA moŜna wydzielić w płynie nasiennym przez
ogniskowanie izoelektryczne I chromatografię jonowymienną (6). Z prawidłowej i przerośniętej prostaty PSA
przedostaje się do płynu pozakomórkowego I dyfunduje do krwi, gdzie jego stęŜenie jest przeciętnie million razy
niŜsze niŜ w płynie nasiennym. W raku prostaty zmienia się architektura i polaryzacja komórek nabłonka, co
prowadzi do aktywnego wydzielania PSA do przestrzeni pozakomórkowej i do krąŜęnia, a to powoduje
podwyŜszone stęŜenie PSA w surowicy (6).
PSA ulega silnej ekspresji zarówno w prawidłowej, jak I w nowotworowej tkance prostaty. ChociaŜ moŜna go
uznać za antygen swoisty dla prostaty, ekspresja PSA I/lub genów dla niego została wykryta na niskim
poziomie w tkankach innych niŜ prostata, na przykład w prawidłowej tkance sutka (5, 6), guzach sutka, mleku,
surowicy kobiet, endometrium, guzach nadnerczy i nowotworach pierwotnych nerek (5).
Odczynnik dostarczony
Oczyszczona frakcja globulinowa surowicy króliczej, w formie płynnej. Zawiera 0,1 mol/L NaCl, 15 mmol/L NaN3.
StęŜenie białka g/L: patrz etykietka na fiolce.
RóŜnice w mianie pomiędzy poszczególnymi seriami A0562 nie przekraczają 10%. Uzyskano to dzięki
doprowadzaniu miana kaŜdej serii do stałej wartości próby referencyjnej, przechowywanej w temp. -80oC.
Immunogen
PSA izolowany z mieszaniny próbek ludzkiego nasienia.
Swoistość
Przeciwciało reaguje z ludzkim antygenem swoistym dla prostaty. Ślady zanieczyszczających przeciwciał
zostały usunięte przez adsorbcję w fazie stałej z białkami ludzkiego osocza.
Swoistość przeciwciała została potwierdzona następująco:
Immunoelektroforeza krzyŜowa: W immunoelektroforezie krzyŜowej z uŜyciem 12,5 µL przeciwciała A0562 na
cm2 Ŝelu po rozdzieleniu 2 µL ludzkiego płynu nasiennego, po wybarwieniu Coomassie Brilliant Blue powstaje
tylko jeden łuk precypitacyjny, odpowiadający ludzkiemu PSA. Nie obserwowano reakcji po uŜyciu12,5 µL
przeciwciała A0562 na cm2 Ŝelu po rozdzieleniu 2 µL ludzkiej surowicy.
Środki ostroŜności
1. Do stosowania przez osoby przygotowane zawodowo.
2. Produkt zawiera azydek sodowy (NaN3), odczynnik chemiczny silnie toksyczny w czystej postaci. W stęŜeniu
obecnym w produkcie, chociaŜ nie klasyfikowanym jako niebezpieczne, azydek sodowy moŜe reagować z
elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, tworząc silnie wybuchowe pochodne lub azydki tych
metali. Przy usuwaniu odpadów przepłukać spływ duŜą ilością wody, aby uniknąć tworzenia się azydków.
3. Jak w przypadku kaŜdego materiału biologicznego naleŜy stosować odpowiednie procedury.
4. Produkt moŜe być stosowany w róŜnych technikach i w zestawieniu z róŜnymi typami próbek i materiałów, a
zatem kaŜde laboratorium powinno ustalić własny system kontroli jakości.
5. NaleŜy stosować właściwe wyposaŜenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą
bądź oczami.
6. Niewykorzystany odczynnik naleŜy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi.
Przechowywanie
(106749-004)
Przechowywać w temp. 2-8oC. Nie uŜywać po upływie daty waŜności wskazanej na opakowaniu. Jeśli produkt
był przechowywany w warunkach innych niŜ wskazane, uŜytkownik musi sprawdzić jakość produktu. Nie ma
wyraźnych oznak wskazujących na niestabilność produktu, dlatego równocześnie z próbkami badanymi
powinno się oznaczać wiarygodną kontrolę. JeŜeli uzyskuje się nieoczekiwane wyniki bez zmiany procedur
laboratoryjnych i moŜna podejrzewać, Ŝe dzieje się to z winy przeciwciała, naleŜy skontaktować się z serwisem
technicznym firmy Dako.
A0562/PL/MER/21.08.08 str. 1/2
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
IMMUNOHISTOCHEMIA
Przygotowanie próbek
Skrawki parafinowe: Przeciwciało moŜe być zastosowane do znakowania tkanki utrwalonej w formalinie i
zatopionej w parafinie. Konieczne jest wstępne odsłonięcie epitopów przez podgrzewanie. Skrawki tkankowe
nie powinny wysychać podczas całej procedury barwienia immunohistochemiczne.
Procedura barwienia
Rozcieńczenie: Polyclonal Rabbit Anti-Human Prostate-Specific Antigen, nr kodu A0562 moŜe być uŜywane w
zakresie rozcieńczeń 1:150-1:300, gdy się go uŜywa na skrawki ludzkiej prostaty utrwalane formaliną i
zatapiane w parafinie i stosując 30 min. inkubację z pierwszym przeciwciałem w temperaturze pokojowej.
Optymalne warunki mogą się róŜnić zaleŜnie od próbki i metod jej przygotowania, i powinny zostać dobrane w
kaŜdym laboratorium. Zalecaną kontrolą negatywną jest Dako Rabbit Immunoglobulin Fraction (adsorbowana w
fazie stałej), nr kodu X0936, rozcieńczona do takiego samego stęŜenia białka jak roztwór pierwszego
przeciwciała. Jeśli nie udowodniono trwałości przeciwciała w danej metodzie, zaleca się rozcieńczanie go tuŜ
przed uŜyciem lub rozcieńczanie w Dako Antibody Diluent, nr kodu S0809.
Uwidocznienie: Zalecane są zestawy odczynnikowe Dako LSAB™+/HRP, nr kodu K0679, oraz zestaw Dako
EnVision™+/HRP, nr kodu K4008 i K4010. Procedura wykonania jest opisana w kaŜdym z zestawów.
Szczególne ograniczenia
produktu
Informowano, Ŝe przeciwciało słabo znakuje niektóre komórki przewodów wyprowadzających i komórki
kanalików w nerkach, komórki kanalikowe w śliniankach przyusznych I niektóre komórki trzustki (7).
Interpretacja odczynu
Przeciwciała dają odczyn cytoplazmatyczny.
Opis wyników
Normalne tkanki: przeciwciało silnie znakuje nabłonek prostaty. Nie obserwowano barwienia w 34 innych
ludzkich tkankach, w tym w mózgu, skórze, mięśniach, nerwach, sutku, węzłach chłonnych, śledzionie, grasicy
ani w róŜnych częściach układu oddechowego, pokarmowego, moczowego i rozrodczego (7).
Tkanki patologiczne: wszystkie 60 przebadanych raków prostaty (Gleason 3-5) wykazywało dodatnie rozmyte
barwienie. Odsetek komórek PSA-dodatnich był >95% w 57/60 przypadków raka (4). Przeciwciało znakowało
3/15 (20%) raków przewodowych sutka /7 (28%) raków apokrynowych sutka wykazywało plamkowe obszary
komórek immunoreaktywnych (7). Spośród 310 nowotworów nieprostatowych, w tym 40 raków sutka, 40 raków
płuca, 40 raków jelita grubego, 40 raków nerek, 40 raków urotelialnych, 30 przypadków metaplazji
gruczołowych pęcherza moczowego, 40 rakowiaków i 40 nowotworów ślinianek wszystkie były negatywne w
reakcji z przeciwciałem. JednakŜe silne rozproszone barwienie obserwowano wzdłuŜ nie zmienionych
nowotworowo przewodów wyprowadzających ślinianek w 27/30 (90%) przypadków guzów ślinianek. RównieŜ
13/40 (32%) łagodnych torbieli nasiennych wykazywało barwienie cytoplazmatyczne (4).
Literatura
1.
Gillespie JW, Best CJM, Bichsel VE, Cole KA, Greenhut SF, Hewitt SM, et al. Technical advance.
Evaluation of non-formalin tissue fixation for molecular profiling studies. Am J Pathol 2002;160:449-57.
2.
Meng FJ, Shan A, Jin L, Young CYF. Short communication: The expression of a variant prostate-specific
antigen in human prostate. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev 2002;11:305-9.
3.
Qian Y, Sensibar JA, Zelner DJ, Schaeffer AJ, Finlay JA, Rittenhouse HG, Lee C. Two-dimensional gel
electrophoresis detects prostate-specific antigen-α1-antichymotrypsin complex in serum but not in
prostatic fluid. Clin Chem 1999;43:352-9.
4.
Varma M, Morgan M, Jasani B, Tamboli P, Amin MB. Polyclonal anti-psa is more sensitive but less
specific than monoclonal anti-psa. Implications for diagnostic prostaic pathology. Am J Clin Pathol
2002;118:202-7.
5.
Polascik TJ, Oesterling JE, Partin AW. Prostate specific antigen: a decade of discovery – what we have
learned and where we are going [Review]. J Urol 1999;162:293-306.
6.
Stenman U-H, Leinonen J, Zhang W-M, Finne P. Prostate-specific antigen. Cancer Biol 1999;9:83-93.
7.
Alanen KA, Kuopio T, Koskinen PJ, Nevalainen TJ. Immunohistochemical labelling for prostate specific
antigen in non-prostatic tissues. Path Res Pract 1996;192:233-7.
Objaśnienia symboli
(106749-004)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Numer serii
Sprawdź w instrukcji
stosowania
ZuŜyć przed
Producent
A0562/PL/MER/21.08.08 str. 2/2
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17