BD Campylobacter Bloodfree Selective Medium

PODŁOŻE NA PŁYTKACH
GOTOWE DO UŻYCIA —
INSTRUKCJA UŻYTKOWANIA
PA-254095.08
Wersja: Mar 2013
BD Campylobacter Bloodfree Selective Medium
PRZEZNACZENIE
BD Campylobacter Bloodfree Selective Medium jest selektywnym podłożem służącym do
izolacji szczepów bakterii z rodzaju Campylobacter z próbek kału ludzkiego.
ZASADY I OBJAŚNIENIE PROCEDURY
Metoda mikrobiologiczna.
Wykazano, że rodzaj Campylobacter obejmuje gatunki będące ważnymi patogenami
powodującymi zakażenia jelitowe, takie jak biegunka oraz ostre zapalenie żołądkowo-jelitowe.1-3
W obszarach rolnych oraz krajach mniej rozwiniętych bakterie z rodzaju Campylobacter
przewyższają ilościowo patogeny jelitowe rodzaju Salmonella. C. jejuni uznaje się za
najczęstszą przyczynę sporadycznego bakteryjnego zapalenia jelit na całym świecie.1
Najczęściej izolowanym gatunkiem jest Campylobacter jejuni, natomiast C. coli, C. lari i inne
występują rzadziej.
W celu izolacji bakterii Campylobacter opracowano kilka selektywnych podłoży. Wszystkie
pierwsze podłoża zawierały krew, konieczną do absorpcji rodników i nadtlenków, które mogły
hamować wzrost mikroaerofilnych bakterii z rodzaju Campylobacter. W późniejszym okresie
krew, która nie jest niezbędnym składnikiem odżywczym dla tych organizmów, zastępowano
innymi wprowadzanymi materiałami.4,5 Badania porównawcze z podłożami niezawierającymi
krwi oraz z podłożami z krwią wykazały wyższość podłoży bez krwi, zawierających węgiel
drzewny, nad podłożami z krwią, które zwiększały stopień tolerancji organizmów na tlen.4,5 W
celu zahamowania wzrostu flory towarzyszącej stosowano monoterapię lub terapie skojarzone
antybiotykami. Bolton i wsp. opracowali kombinację dezoksycholanu i cefoperazonu, która
wykazała się zdolnością hamowania większości drobnoustrojów oprócz C. jejuni, C. fetus, C. coli
i C. lari.4,5
W podłożu BD Campylobacter Bloodfree Selective Medium jako źródła azotu zastosowano
ekstrakt wołowy oraz dwa różnego rodzaju peptony. Kombinacja aktywowanego węgla
drzewnego, siarczanu żelaza (II) oraz pirogronianu sodu zastępują krew.1,2,7 Węgiel drzewny
działa jako substancja adsorbująca wiele składników toksycznych, natomiast siarczan żelaza
oraz pirogronian są substancjami redukującymi. Dezoksycholan oraz cefoperazon są stosowane
w celu hamowania normalnej flory jelitowej.
ODCZYNNIKI
Podłoża BD Campylobacter Bloodfree Selective Medium i BD Campylobacter Bloodfree
CTA Agar zawierają następujące podłoże podstawowe:
Skład* w przeliczeniu na litr wody oczyszczonej
Ekstrakt wołowy
10,0 g/L
Peptony
10.0
Chlorek sodu
5.0
Węgiel drzewny (aktywowany)
4.0
Hydrolizat kazeiny
3.0
Dezoksycholan sodu
1.0
Siarczan żelaza (II)
0.25
Pirogronian sodu
0.25
Cefoperazon
32,0 mg/L
Agar
12,0 g/L
pH 7,4 ±0,2
*Skorygowany i/lub uzupełniony zgodnie z wymaganiami, których celem jest spełnienie
kryteriów wydajności.
PA-254095.08
-1-
ŚRODKI OSTROŻNOŚCI
. Wyłącznie do zastosowań profesjonalnych.
Nie należy używać płytek, jeżeli są na nich widoczne oznaki skażenia mikrobiologicznego,
odbarwienia, wyschnięcia, pęknięcia lub inne oznaki pogorszenia jakości.
Procedury aseptycznej techniki pracy z produktem, zagrożenia biologiczne oraz usuwanie
zużytego produktu opisano w dokumencie OGÓLNA INSTRUKCJA DOTYCZĄCA
STOSOWANIA.
WARUNKI I OKRES PRZECHOWYWANIA
Dostarczone płytki należy przechowywać w zaciemnionym pomieszczeniu, w temperaturze od 2
do 8°C, w oryginalnych opakowaniach w formie rękawa, aż do momentu użycia. Nie zamrażać i
nie przegrzewać. Płytki należy wykorzystać do posiewu bakterii przed upływem daty ważności
(zobacz etykietę na opakowaniu) i inkubować zgodnie z zalecanymi czasami inkubacji.
Płytki z otwartego zestawu 10 płytek można zużyć w ciągu tygodnia, pod warunkiem
przechowywania w czystym miejscu w temperaturze od 2 do 8°C.
KONTROLA JAKOŚCI PRZEZ UŻYTKOWNIKA
Reprezentatywne próbki podłoża zaszczepia się hodowlami wymienionych niżej szczepów
(szczegółowe informacje — patrz dokument OGÓLNA INSTRUKCJA DOTYCZĄCA
STOSOWANIA). Płytki inkubuje się w temperaturze od 35 do 37°C przez 42 do 48 h w
atmosferze mikroaerobowej (np. w pojemnikach BD GasPak wyposażonych w woreczki
systemu pojemników BD GasPak EZ Campy Container System Sachets).
Szczepy
BD Campylobacter Bloodfree Selective Medium
C. jejuni subsp. jejuni ATCC 33291
Wzrost; szare kolonie, mogą się rozrastać
Campylobacter fetus DSM 5361
Wzrost; szare kolonie
Escherichia coli ATCC 25922
Częściowe lub całkowite zahamowanie wzrostu
Enterococcus faecalis ATCC 29212
Częściowe lub całkowite zahamowanie wzrostu
Proteus mirabilis ATCC 14153
Częściowe lub całkowite zahamowanie wzrostu
Bez posiewu
Połyskująca czerń
Proszę zwrócić uwagę, że na tym podłożu wzrost grzybów nie będzie hamowany.
PROCEDURA
Dostarczane materiały
Podłoże BD Campylobacter Bloodfree Selective Medium dostarczane jest na 90 mm
płytkach Stacker. Sprawdzane pod względem obecności drobnoustrojów
Materiały niedostarczane
Pomocnicze pożywki hodowlane, odczynniki oraz wyposażenie laboratoryjne zgodne z
wymaganiami.
Typy próbek
Świeże próbki kału lub wymazy z odbytu pochodzące od pacjentów z podejrzeniem zakażenia
gatunkami Campylobacter. Podłoże może być także stosowane do izolowania z mięsa i innych
próbek żywności (patrz także CHARAKTERYSTYKA WYDAJNOŚCIOWA I OGRANICZENIA
PROCEDURY). Należy stosować próbki kału, wymazy i próbki pokarmów pobrane nie
wcześniej niż przed 24 – 48 godzinami.
Wymazy z odbytu należy umieścić w odpowiednim podłożu transportowym (np. Cary Blair).2
Jeżeli próbki nie będą natychmiast przetwarzane, należy umieścić je w podłożu transportowym
w temperaturze 4 do 8°C. Chronić przed wysychaniem i wystawianiem na działanie tlenu.
Procedura testowa
Jak najszybciej po otrzymaniu próbek z laboratorium należy wykonać posiewy celem izolacji na
podłoże BD Campylobacter Bloodfree Selective Medium. Mięso lub inne środki spożywcze
należy posiekać lub zhomogenizować, a następnie inokulować na podłożu bezpośrednio lub po
wykonaniu zawiesiny w małej ilości bulionu z peptonem.
PA-254095.08
-2-
Jeżeli materiał jest hodowany bezpośrednio z wymazu, można przetoczyć wacik po niewielkiej
powierzchni na krawędzi płytki, a następnie począwszy od tego inokulowanego obszaru
pociągnąć smugi. Opisywano zastosowanie specjalnej techniki filtracji w celu przygotowania
próbek, a następnie inokulowanie na selektywne lub nieselektywne podłoże.2,3
Inkubować inokulowane płytki, chroniąc je przed światłem słonecznym, w temperaturze 35 ±2°C
lub 42 ±2°C i w środowisku o zmniejszonym stężeniu tlenu oraz zwiększonym stężeniu
dwutlenku węgla (=mikroaerobowym). Inkubacja w temperaturze 42°C hamuje wzrost bakterii
Campylobacter jejuni subsp. doylei oraz wielu innych gatunków. Większość organizmów
izolowanych na tym podłożu osiąga najlepszy wzrost w temperaturze 35 ±2° C. Atmosferę
mikroaerobową można uzyskać stosując torebki systemu pojemników BD GasPak EZ Campy
Container System Sachets w pojemnikach BD GasPak lub stosując system BD GasPak EZ
CampyPouch System. Inną metodą uzyskania odpowiedniej atmosfery jest usunięcie powietrza
z pojemników BD GasPak z odpowietrzeniem i napełnienie ich gazami z butli. Zazwyczaj
wystarcza 2- lub 3-dniowy okres inkubacji, ale wykazano, że 5 do 7 dni inkubacji zwiększa liczbę
izolatów.2
Wyniki
Po 42 do 48 h inkubacji w środowisku mikroaerobowym należy szukać na płytkach kolonii
gatunku Campylobacter. Świeże izolaty, a w szczególności izolaty C. jejuni na tych i innych
podłożach dla rodzaju Campylobacter mają tendencję do rozrastania się wszerz, natomiast inne
gatunki Campylobacter mogą wytwarzać kolonie wypukłe. Dodatni test oksydazowy oraz
Gram-ujemne pałeczki zakrzywione lub w kształcie skrzydeł mewy po wybarwieniu metodą
Grama są kolejnymi wskazówkami udanej izolacji bakterii. Aby potwierdzić identyfikację,
konieczne jest przeprowadzenie innych testów.2
CHARAKTERYSTYKA WYDAJNOŚCIOWA I OGRANICZENIA PROCEDURY
BD Campylobacter Bloodfree Selective Medium jest zatwierdzonym podłożem służącym do
izolacji gatunku Campylobacter z próbek ludzkiego kału, a także materiałów pochodzenia
nieklinicznego, takich jak mięso i inne środki spożywcze.
Podłoże BD Campylobacter Bloodfree Selective Medium hamuje wzrost rodzaju Arcobacter
cryaerophilus i A. skirrowii.6
Nie należy stosować tego podłoża w celu wykonywania hodowli pochodnych z hodowli próbek
krwi podejrzanych o zakażenie bakteriami z rodzaju Camplylobacter. W takim przypadku należy
zamiennie zastosować podłoże BD Columbia Agar with 5% Sheep Blood lub inną
nieselektywną płytkę agaru krwawego lub czekoladowego w środowisku mikroaerobowym w
temperaturze 32 do 37°C.
Liczba gatunków z rodzaju Campylobacter i pokrewnych drobnoustrojów, które są czynnikami
zakaźnymi jest duża, a ich wrażliwość na antybiotyki stosowane jako inhibitory w podłożach
izolacyjnych jest zmienna. Ponadto drobnoustroje te do wzrostu mogą wymagać różnych
temperatur inkubacji. Może być konieczna inokulacja kilku różnych podłoży izolacyjnych oraz w
różnych temperaturach.2 Dlatego przed rutynowym stosowaniem pożywki do hodowli rzadko
izolowanych lub nowo opisanych drobnoustrojów należy sprawdzić jej przydatność przez
wyhodowanie czystych kultur danego organizmu.
PIŚMIENNICTWO
1. Nachamkin, I., Blaser, M.J., and L.S. Thompkins. 1992. Campylobacter jejuni: current status
and future trends. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
2. Fitzgerald, C, and Nachamkin, I. 2007. Campylobacter and Arcobacter. In: Murray, P. R., E.
J. Baron, J.H. Jorgensen, M.L. Landry, and M.A. Pfaller (ed.). Manual of clinical
microbiology, 9th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
3. Engberg, J. et al. 2000. Prevalence of Campylobacter, Arcobacter, Helicobacter, and
Sutterella spp. in human fecal samples as estimated by a reevaluation of isolation methods
for campylobacters. J. Clin. Microbiol. 38: 286-291.
4. Hutchinson, D. N.and P. J. Bolton. 1984. Letter, J. Clin. Pathol. 37: 956–957.
5. Bolton, F.J., Hutchinson, D.N., and D. Coates. 1984. Blood-free selective medium for
isolation of Campylobacter jejuni from feces. J. Clin. Microbiol. 19: 169-171.
PA-254095.08
-3-
6. Aspinal, S.T. et al. 1993. Selective medium for thermophilic campylobacters including
Campylobacter upsaliensis. J. Clin. Pathol. 46: 829-831.
PAKOWANIE/DOSTĘPNOŚĆ
BD Campylobacter Bloodfree Selective Medium
Nr kat. 254403
Gotowe podłoża na płytkach hodowlanych, 20 sztuk
Nr kat. 254095
Gotowe podłoża na płytkach hodowlanych, 120 sztuk
DODATKOWE INFORMACJE
W celu uzyskania dodatkowych informacji należy skontaktować się z lokalnym przedstawicielem
firmy BD.
Becton Dickinson GmbH
Tullastrasse 8 – 12
D-69126 Heidelberg/Germany
Phone: +49-62 21-30 50
Fax: +49-62 21-30 52 16
[email protected]
http://www.bd.com
http://www.bd.com/europe/regulatory/
ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection
BD, BD Logo and all other trademarks are the property of Becton, Dickinson and Company.
PA-254095.08
-4-
© 2013 BD