M46 MICROGEN Campylobacter lateks

M46 MICROGEN® Campylobacter
PRZEZNACZENIE TESTU
M46 MICROGEN® Campylobacter jest szybkim testem aglutynacji lateksowej przeznaczonym do
potwierdzenia identyfikacji enteropatogennych, termofilnych bakterii z rodzaju Campylobacter, wyhodowanych na
wybiórczych podłoŜach stałych z próbek kału od pacjentów z podejrzeniem bakteryjnego zapalenia jelit. Test jest
przeznaczony wyłącznie do profesjonalnego uŜytku laboratoryjnego.
ZASADA TESTU
Cząsteczki lateksowe pokryte są króliczymi immunoglobulinami skierowanymi przeciw preparatom
antygenowym z wybranych serotypów Campylobacter jejuni. Kiedy uczulone cząstki lateksu zmiesza się z zawiesiną
zawierającą antygeny enteropatogennych szczepów Campylobacter, zajdzie czuła i swoista reakcja
immunochemiczna, powodując aglutynację drobnych zawieszonych cząstek lateksowych w agregaty, które łatwo
zobaczyć gołym okiem.
SKŁAD ZESTAWU
M46a Lateks testowy: 2,5 ml
Cząsteczki lateksu pokryte króliczymi przeciwciałami przeciw antygenom Campylobacter. Konserwowane
0,099% azydkiem sodowym (niebieska nakrętka).
M46b Lateks kontrolny: 2,5 ml
Cząsteczki lateksu pokryte niespecyficznymi immunoglobulinami króliczymi. Konserwowane 0,099% azydkiem
sodowym (Ŝółta nakrętka).
M46c Kontrola dodatnia: 1,0 ml
Zawiesina inaktywowanych antygenów Campylobacter reagująca z lateksem testowym i nie reagująca z lateksem
kontrolnym. Konserwowane 0,099% azydkiem sodowym (czarna nakrętka).
M46d Rozcieńczalnik do próbek: 50 ml
0,85% roztwór izotoniczny soli konserwowany 0,099% azydkiem sodowym (biała nakrętka).
Instrukcja uŜycia
Jednorazowe karty reakcyjne
Jednorazowe patyczki do mieszania
DODATKOWE MATERIAŁY WYMAGANE, ALE NIE WCHODZĄCE W SKŁAD ZESTAWU
• ezy bakteriologiczne
• płytki z pół-wybiórczym stałym podłoŜem agarowym dla Campylobacter (Preston Blood Free Agar)
• jednorazowe plastykowe probówki (pojemność 1 ml)
• anaerostaty do zapewnienia mikroaerofilnych warunków hodowli
• cieplarka na 42°C (jeŜeli nie ma, moŜe być cieplarka na 37°C)
ŚRODKI OSTROśNOŚCI
Bezpieczeństwo:
1. Odczynniki dostarczone w zestawie słuŜą jedynie do diagnostyki in vitro.
2. Azydek sodowy uŜywany jako konserwant w zestawie odczynników moŜe reagować z ołowianą
i miedzianą armaturą, tworząc potencjalnie wybuchowe azydki metali. Utylizować zalewając duŜą
objętością wody, aby zapobiec osadzaniu się azydków.
3. Odpowiednie środki ostroŜności naleŜy podjąć podczas pracy i usuwania potencjalnych organizmów
patogennych. OdkaŜać materiał zakaźny podchlorynem sodowym w końcowym stęŜeniu 3% przez 30
min. Płynne ścieki zawierające kwas powinno się neutralizować przed dalszą obróbką.
4. Kontrola dodatnia została inaktywowana w czasie procesu wytwarzania. Jednak powinno się w czasie
pracy z nią zachować takie środki ostroŜności, jak podczas pracy z materiałem potencjalnie zakaźnym.
M46 MICROGEN® Campylobacter
Strona 1
Środki proceduralne:
1. MICROGEN® Campylobacter powinien być uŜywany zgodnie z dołączoną instrukcją.
2. Pozwolić wszystkim odczynnikom na osiągnięcie temperatury pokojowej przed uŜyciem.
3. Nie rozcieńczać Ŝadnego odczynnika z zestawu.
4. Nie mieszać odczynników z róŜnych partii i zestawów.
5. Nie zamraŜać Ŝadnych odczynników.
6. UwaŜać, Ŝeby zakraplacz z odczynnikiem lateksowym nie dotknął próbek bakteryjnych.
7. Przed uŜyciem upewnić się, Ŝe karta reakcyjna jest czysta i sucha.
PRZECHOWYWANIE I TERMIN WAśNOŚCI
MICROGEN® Campylobacter powinien być przechowywany w temp. 2 - 8°C, kiedy nie jest uŜywany. Zestawu
nie naleŜy uŜywać po upływie daty waŜności wydrukowanej na naklejce na kartonie.
PRÓBKI
Próbki kału naleŜy posiać na wybiórcze płytki agarowe bez krwi (Preston Blood Free Agar) w ilości 0,2 – 0,3 g
materiału na płytkę. Płytki powinny być inkubowane w atmosferze mikroaerofilnej w 42°C przez 48 godz.
Kolonie o morfologii przypominającej Campylobacter naleŜy pobrać i sprawdzić testem MICROGEN®
Campylobacter (zob. niŜej).
SPOSÓB WYKONANIA
Kontrola jakości:
Aby potwierdzić, Ŝe odczynniki działają prawidłowo, naleŜy za kaŜdym razem, kiedy uŜywa się zestaw, wykonać
następujący sprawdzian z kontrolą dodatnią:
1. Dodać po jednej 50 µl kropli kontroli dodatniej do 2 oddzielnych pól na karcie testowej.
2. NaleŜy obie krople sprawdzić z lateksem testowym i kontrolnym, jak opisano w „Sposobie wykonania
testu” poniŜej.
3. NaleŜy podejrzewać degradację odczynnika, jeŜeli:
• Brak reakcji między lateksem testowym i kontrolą dodatnią LUB reakcja wykazuje znaczny
spadek nasilenia z upływem czasu.
• Lateks kontrolny reaguje z kontrolą dodatnią.
• Odczynnik lateksowy staje się bezbarwny lub tworzy kłaczki, które nie znikają po delikatnym
wytrząsaniu.
Sposób wykonania testu:
1. Doprowadzić wszystkie odczynniki do temperatury pokojowej. Delikatnie wytrząsnąć odczynniki
lateksowe, aby otrzymać jednorodną zawiesinę.
2. Nanieść po 50 µl rozcieńczalnika do próbek na dwa pola na czystej, suchej karcie reakcyjnej.
3. Przy pomocy ezy pobrać kilka kolonii o morfologii przypominającej Campylobacter. JeŜeli wzrost na płytce
jest skąpy, pobrać bakterie przy pomocy wymazówki. Zmieszać bakterie z kaŜdą z dwu kropli
rozcieńczalnika do próbek na karcie reakcyjnej, aby powstała jednorodna zawiesina.
4. Dodać 1 kroplę (50 µl) lateksu kontrolnego do zawiesiny bakteryjnej na jednym polu karty. Podobnie
dodać 1 kroplę (50 µl) lateksu testowego do drugiej zawiesiny bakteryjnej.
5. Zmieszać zawiesiny bakteryjne z odczynnikami lateksowymi uŜywając patyczki do mieszania,
zaczynając od lateksu kontrolnego. Rozprowadzić mieszaninę na całym polu na karcie reakcyjnej.
6. Obracać delikatnie kartę, utrzymując płynne zawiesiny w ciągłym ruchu przez 3 minuty. Obserwować,
czy zachodzi aglutynacja.
7. Odczytać wyniki (zob. INTERPRETACJA PONIśEJ).
8. Wyrzucić zuŜyte karty i patyczki do mieszania do odpowiedniego środka dezynfekcyjnego.
M46 MICROGEN® Campylobacter
Strona 2
INTERPRETACJA WYNIKÓW
Na reakcję aglutynacji wskazuje widoczna agregacja cząstek lateksu. Nasilenie reakcji moŜe być róŜne i moŜna je
oznaczyć zgodnie z następującą skalą:
+
++
+++
reakcja - drobne, ale łatwo zauwaŜalne ziarnistości na mlecznym tle
reakcja - grube ziarnistości na mlecznym tle
reakcja - intensywne kłaczki cząsteczek wokół brzegów pola, na przejrzystym tle.
Wyniki MICROGEN® Campylobacter powinny być interpretowane w następujący sposób:
Reakcja z lateksem
testowym
+
Reakcja z lateksem
kontrolnym
–
–
–
+
+
Interpretacja
Obecny Campylobacter
Campylobacter nieobecny w wystarczającej
ilości, aby wykryć go przy pomocy testu
Niespecyficzna aglutynacja. Wynik
niepewny*
*Próbka, która powoduje aglutynację lateksu kontrolnego, nie moŜe być badana MICROGEN® Campylobacter
OGRANICZENIA TESTU
1. Wyniki powinny być interpretowane przez lekarza w połączeniu z wszystkimi dostępnymi informacjami
klinicznymi i laboratoryjnym.
2. Nieswoista autoaglutynacja z lateksem kontrolnym nie wyklucza obecności Campylobacter, ale wynik
powinien być podany jako niejednoznaczny. Próbka powinna zostać zbadana inną metodą.
3. Bardzo małe ilości Campylobacter mogą dawać ujemny wynik testu. Powinno się uŜywać 48 - godz.
hodowle, aby zmaksymalizować wzrost bakterii.
CHARAKTERYSTYKA PORÓWNAWCZA
Oznaczono MICROGEN® Campylobacter jako test potwierdzający identyfikację hodowli dwóch niezaleŜnych
centrach zewnętrznych oraz we własnym laboratorium. Ogółem 527 próbek kału posiano na płytki z agarem
wybiórczym i inkubowano 48 godz., a kolonie badano przy pomocy MICROGEN® Campylobacter.
Metody
referencyjne
dodatnie
ujemne
ogółem
Czułość:
Swoistość:
Skuteczność:
MICROGEN® Campylobacter
dodatnie
ujemne
143
2
1
381
144
383
ogółem
145
382
527
potwierdzono
zakres
143/145 = 98,6%
381/382 = 99,7%
524/527 = 99,4%
Swoistość MICROGEN®
mikroorganizmów:
Campylobacter
drobnoustrój
Termofilne Campylobacter:
C. jejuni
C. jejuni ssp. doylei
C. coli
C. upsaliensis
C. laridis
C. fetus
liczba
szczepów
37
3
4
13
1
2
badając
szeroki
wyhodowanych
Wynik MICROGEN® Campylobacter
reakcja
dodatni
ujemny
nieswoista
37
3
4
13
1
2
0
0
0
0
0
0
M46 MICROGEN® Campylobacter
0
0
0
0
0
0
Strona 3
Nie – termofilne Campylobacter:
C. concisus
C. hyointestinalis
C. sputorum faecalis
C. curvis
Ściśle spokrewnione bakterie:
Helicobacter pylori
Helicobacter fellinae
Helicobacter cinaedi
Arcobacter butzleri
Arcobacter skirrowii
5
3
1
2
0
0
0
0
3
3
0
2
2 (słaba)
0
1 (słaba)
0
12
5
4
4
1
2 (słaba)
0
2
0
0
10
5
2
4
1
0
0
0
0
0
Inne niespokrewnione bakterie:
Providencia stuartii
Providencia alcaligenes
Escherichia coli
Pseudomonas aeruginosa
Citrobacter spp.
Citrobacter freundii
Paciorkowce α
Paciorkowce β
Klebsiella pneumoniae
Klebsiella edwardsii
Proteus mirabilis
Proteus vulgaris
Salmonella spp
Salmonella (Grupa B)
Salmonella (Grupa C)
Salmonella flexneri
Shigella dysenteriae
Shigella sonnei
Aeromonas hydrophila
Staphylococcus aureus
Enterobacter agglomerans
Yersinia enterocolitica
Clostridium difficile
Vibrio spp.
Vibrio cholera
Vibrio parahaemolyticus
Hafnia alvei
Acinetobacter spp.
Acinetobacter baumanii
DroŜdŜaki
1
1
5
2
9
1
2
1
1
1
2
3
11
1
1
1
1
1
1
1
2
1
1
3
1
1
1
1
1
1
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
1
1
5
2
9
1
2
1
1
1
2
3
11
1
1
1
1
1
1
1
2
1
1
3
1
1
1
1
0
1
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
1 (silna)
0
Wszystkie badane termofilne Campylobacter reagowały z MICROGEN® Campylobacter. Nie - termofilne
Campylobacter nie reagowały, chociaŜ 3 z 11 badanych szczepów wykazywały słaba nieswoistą aglutynację
Z grupy ściśle spokrewnionych bakterii, 2 z 12 szczepów Helicobacter pylori słabo reagowały w teście, a 2 szczepy
Helicobacter cinaedi reagowały krzyŜowo.
Przebadano równieŜ szeroki zakres niespokrewnionych bakterii. śadne nie reagowały testem, oprócz 1 szczepu
Acinetobacter baumanii, który dawał silną nieswoistą aglutynację.
POWTARZALNOŚĆ
Powtarzalność wewnątrz serii ustalono, badając czułość produktu z jednej serii dla seryjnych rozcieńczeń
antygenu referencyjnego oraz dodatniej kontroli z zestawu przy 3 róŜnych okazjach. Miana końcowe otrzymane
dla referencyjnych/kontrolnych antygenów były identyczne we wszystkich trzech rozcieńczeniach.
M46 MICROGEN® Campylobacter
Strona 4
Odtwarzalność między seriami ustalano, badając czułość 3 serii produktu wobec seryjnych rozcieńczeń
antygenu referencyjnego i kontroli dodatnich z zestawów. Nie zaobserwowano Ŝadnych znaczących róŜnic
między końcowym mianem pomiędzy trzema seriami.
DODATEK
Preston Blood Free Agar, nr kat. 1255.
GRASO Biotech
Krąg 4A. 83-200 Starogard Gdański
Dział Obsługi Klienta: 058 562 30 21, 058 562 56 61 do 64 wew. 30,
[email protected]; www.podloza.pl, www.grasobiotech.pl
M46 MICROGEN® Campylobacter
Strona 5