apoptoza [tryb zgodności]

Cytometryczne techniki badania apoptozy:
analiza zmian morfologicznych
FSC/SSC
zmiany konformacji błon komórkowych
AnnV
zmiany przepuszczalności błon komórkowych
PI
7-AAD
detekcja zburzeń funkcji mitochondriów•lipofilne barwniki fluorescencyjne akumulujące się w
błonach mitochondriów
JC-1, DIOC, Rodamina123, CMXRos
•ilościowe wiązanie kardiolipiny w wewnętrznych błonach
mitochondriów przez barwnik
NAO
Cytometryczne techniki badania apoptozy
ocena aktywności kaspaz
•przeciwciała monoklonalne wykrywające aktywna formę kaspaz
•fluorescencyjne substraty kaspaz (dla kaspazy -3,-6,-8,-9)
•wykrywanie przeciwciałami zdegradowanych substratów kaspaz PARP
• wykrywanie florescencyjnego produktu uwalnianego z podawanego
substratu pod wpływem działania kaspazy (Ac-DEVD-AMC),
•FLICA znakowane fluorescencyjnie specyficzne inhibitory kaspaz
detekcja fragmentacji DNA
•TUNEL (dUDP)
•BrDU
•Analiza profilu DNA z użyciem PI
Annexin V and PI Staining to Determine Early
and Late Apopotic Events
Necrosis Late
apoptosis
Early
apoptosis
http://www.imgenex.com
ZNAKOWANIE APOPTOZY AnnV/PI
PI
6,85%
42,01%
AnnV
APOPTOZA-- ZNAKOWANIE AnnV
APOPTOZA
MACS&MORE,Vol8-2/2004
APOPTOZA ZNAKOWANIE JCJC-1
Fl2
Ctrl
R2
R2
R3
R3
R4
R4
Fl1
CYKL KOMÓRKOWY
Ewa Kozłowska
TUNEL ASSAY
BIOSOURCE,Method Booklet 3
APOPTOZA
znakowanie pęknięć w DNA
Przy pomocy BrdU
liczba komórek
HISTOGRAM
Intensywność fluorescencji
APOPTOZA - TUNEL ASSAY
BIOSOURCE,Method Booklet 3