streszczenie - Konferencja BioMedTech Silesia

Materiały konferencyjne BioMedTech SILESIA 2016 I BioMedTech SILESIA CONFERENCE 2016
JUNIOR - STRONA 2722
Klaudia Simka, Agnieszka Nowak, Celina Kruszniewska-Rajs, Urszula Mazurek. Ekspresja kaspaz
w fibroblastach skóry traktowanych adalimumabem. Wydział Farmaceutyczny z Oddziałem
Medycyny Laboratoryjnej w Sosnowcu, Śląski Uniwersytet Medyczny w Katowicach, Katedra i Zakład
Biologii Molekularnej.
Opiekun pracy: prof. dr hab. n.med. Urszula Mazurek
STRESZCZENIE
Adalimumab jest w pełni humanizowanym przeciwciałem monoklonalnym, stosowanym między
innymi w leczeniu ciężkich postaci łuszczycy, choroby Leśniowskiego-Crohna, a także reumatoidalnego
zapalenia stawów. Mechanizm działania tego leku opiera się na wiązaniu i unieczynnieniu TNF-α, który
odgrywa kluczową rolę w etiopatogenezie tych chorób. Istnieją liczne doniesienia, iż terapia anty-TNF
wpływa również na ekspresję genów kodujących białka związane z procesem apoptozy, w tym kaspazy.
Kaspazy to wewnątrzkomórkowe enzymy proteolityczne, które odgrywają kluczową rolę w procesie
programowanej śmierci komórki – apoptozy. Co więcej, uczestniczą również w takich procesach jak
proliferacja, dyferencjacja komórek, a także indukcja procesu zapalnego. Zaburzona ekspresja genów
kodujących kaspazy może doprowadzić do zachwiania równowagi komórkowej, przejawiając się
nadmierną lub niedostateczną apoptozą, a także reakcją zapalną organizmu. Takie zaburzenia mogą
stać się przyczyną licznych procesów chorobowych, w tym nowotworów i chorób
neurodegeneracyjnych.
Celem doświadczenia była ocena ekspresji genów kodujących kaspazy pod wpływem adalimumabu
oraz ocena zróżnicowania ekspresji tych genów w zależności od czasu ekspozycji komórek na badany
lek.
Materiałem do badań były ludzkie fibroblasty skóry, które zostały poddane 2-, 8- i 24-godzinnej
ekspozycji na adalimumab. Kolejnym etapem była ekstrakcja całkowitego RNA z wykorzystaniem
metody fenolowo-chloroformowej. Do wyznaczenia profilu ekspresji badanych genów wykorzystano
technikę mikromacierzy oligonukleotydowych (HG- U133A_2, Affymetrix).
Analiza 25transkryptów kodujących kaspazy wykazała znamienną statystycznie zmianę ekspresji 11
transkryptów. Zaobserwowano wzrost ekspresji kaspaz prozapalnych: 1 i 4 oraz kaspaz efektorowych:
3 i 6. Natomiast ekspresja kaspaz inicjatorowych: 2 i 9 uległa wyciszeniu. Zmianę ekspresji
zaobserwowano już po 2 godzinach od podania leku, jednakże największe zróżnicowanie w stosunku
do kontroli wystąpiło po 8 godzinnej ekspozycji komórek na badany lek. Po 24 godzinach profil
ekspresji kaspaz wrócił niemal do normy.
Adalimumab wpływa na ekspresję kaspaz w fibroblastach skóry, czego skutkiem może być indukcja
procesu zapalnego oraz zaburzenia procesu apoptozy. Poziom transkrypcji kaspaz jest zależny od czasu
ekspozycji komórek na badany lek.
Praca została wykonana z wykorzystaniem Infrastruktury PL-Grid i programu GeneSpring 12.6.1.