Les Rotavirus sont reconnus comme les agents les plus - Bio-Rad

PASTOREX® ROTAVIRUS 30 TESTÓW NR KAT. 52200
Rotawirusy są najczęstszym czynnikiem etiologicznym ostrego zapalenia jelit. Podczas ostrej fazy zakażenia następuje wydzielanie
8
wielkich ilości cząstek wirusa z kałem (10 cząstek/gram kału).
ZASADA METODY
Cząstki lateksu, opłaszczone immunoglobulinami (IgG) królika, skierowanymi przeciwko rotawirusowi, ulegają aglutynacji w obecności
rotawirusów w kale.
Kontrolą jest lateks opłaszczony immunoglobulinami (IgG) królika nie immunizowanego.
ODCZYNNIKI
R1
Rozcieńczalnik
Lateks
R2
R3
R4
•
•
•
Kontrola ujemna
Lateks obojętny + 0.015 M NaN3
1 butelka 75 ml
1 butelka z kroplomierzem 1.5 ml
(czarny lub brązowy)
1 butelka z kroplomierzem 1.5 ml (biały)
Antygen
Kontrola dodatnia antygenu + 0.015 M NaN3
1 butelka z kroplomierzem 0.5 ml (żółty)
Jednorazowe szkiełka do aglutynacji
Jednorazowe drewniane aplikatory
30 szkiełek
Bufor do rozcieńczeń + 0.015 M NaN3
Lateks przeciwko rotawirusowi + 0.015 M NaN3
Wszystkie odczynniki są gotowe do użycia.
Data ważności jest podana na każdej etykiecie.
Przechowywać w temp. +2-8°C; nie zamrażać odczynników.
INNE NIEZBĘDNE MATERIAŁY
• Pipety pasterowskie • Pipety 50 µl • Próbówki serologiczne
• Wirówka • Filtry Ø = 0.80 µl • Vortex
OSTRZEŻENIA
Wszystkie odczynniki zawierają azydek sodu. Azydek sodu może reagować z miedzią i ołowiem w kanalizacji, tworząc wybuchowe azydki
metali. Aby zapobiec gromadzeniu się azydków w rurach, po wylaniu odczynników do zlewu należy spłukać zlew dużą ilością wody.
PROCEDURA
1) Pobranie i przygotowanie próbki
•
Pobrać kał do jałowego pojemnika.
•
Rozcieńczyć próbkę kału 1:10 w buforze do rozcieńczeń - R1 ( 0.25 g kału w 2.5 ml R1).
•
Wymieszać na worteksie przez 1 minutę.
•
Odwirować zawiesinę przy 1000 rpm przez 10 minut.
Aglutynację wykonać z supernatantu.
Uwaga: W przypadku bardzo śluzowego kału, mimo wirowania, trudno jest otrzymać przejrzysty supernatant. Wtedy zaleca się
przefiltrowanie śluzowej części supernatantu przez filtr o średnicy 0.80 µ.
2) Reakcja aglutynacji
•
Dobrze wymieszać (np. na worteksie) zawartość dwóch fiolek z lateksem R2 i R3.
•
Na osobne pola szkiełka do aglutynacji nanieść 1 kroplę R2 i 1 kroplę R3.
•
Do kropli każdego odczynnika dodać 50 µl supernatantu.
•
Wymieszać drewnianym aplikatorem.
•
Obserwować aglutynację, przez 2 minuty rotacyjnie poruszając szkiełkiem.
3) Interpretacja wyników
Reakcja dodatnia
Reakcja wątpliwa; powtórzyć test
Reakcja ujemna
Pole testowe
Supernatant + R2
Aglutynacja
Aglutynacja
Zawiesina jednorodna
KONTROLA JAKOŚCI
Okresowo kontrolować jakość odczynników przy pomocy dodatniej kontroli R4:
•aglutynacja R4 z R2 •brak aglutynacji R4 z R3.
SWOISTOŚĆ
Odczynniki nie dają żadnych reakcji krzyżowych z bakteriami i innymi wirusami, występującymi w kale.
Pole kontrolne
Supernatant + R3
Zawiesina jednorodna
Aglutynacja
Zawiesina jednorodna
LITERATUR
1. Chrystie I.L., Totterdel B. and Banatvala J.E. Asymptomatic endemic rotavirus infections in the newborn. Lancet. 1978;I;1176-1178.
2. Fattal-German M., Martinez L et German A. Étude de l’excrétion des rotavirus chez les nourrissons. Aspects virologiques et immunologiques.
Ann. Pharm. Franç. 1984; 42:227-233.
3. German A. et Fattal-German M. Études virologiques et immunologiques de l’excrétion des rotavirus chez les enfants. Bull. Acad. Red. Paris.
1984;1-2:243-248.
4. Groupe de travail scientifique sur les diarrhées virales Diarrhée à rotavirus. Bull. OMS. 1985:63:237-238.
5. Kapikian A.Z., Flores J., Hoshino Y., Class R.I., Midthun K., Goaziglia M. and Chanock R.M. Rotavirus: the major etiologic agent of severe infantile
diarrhea may be controlled by a “Jennerian” approach to vaccination. J.Infect. Dis.1985;153:815-822.
Novamed Ltd.
POB 53231 Jerusalem 91531
Irsaël
Tel 972-2-6781861
Fax 972-2-6781852
MedNet GmbH
Eschstrasse 19, D-48167
Muenster, Germany
Tel 49-250686440
Fax 49-250684422
DISTR.
Bio- Rad
3, bd Raymond Poincaré
92430 Marnes la coquette
France
Tel +33 1 47 95 60 00
Fax +33 1 47 95 91 33