krążki do oznaczania wrażliwości bakterii na antybiotyki - Bio-Rad

krążki do oznaczania wrażliwości bakterii na antybiotyki - Bio-Rad

KRĄŻKI DO OZNACZANIA WRAŻLIWOŚCI BAKTERII NA ANTYBIOTYKI
50 KRĄŻKÓW W RURCE
OZNACZANIE WRAŻLIWOŚCI NA LEKI PRZECIWBAKTERYJNE
1- ZNACZNIE KLINICZNE
Krążki są przeznaczone do półilościowego oznaczania wrażliwości in vitro na antybiotyki i chemioterapeutyki
bakterii szybko rosnących oraz niektórych trudno rosnących gatunków metodą dyfuzji w podłożu agarowym.
Metoda oparta na wystandaryzowanej procedurze wydanej przez WHOc, została zaadoptowana jako
powszechnie stosowany standard przez CLSI/NCCLSd i CA-SFMe (aktualizowany na bieżąco).
Najnowsze wytyczne, dotyczące wykonania testu wrażliwości oraz interpretacji wyników, znajdują się w
ostatniej edycji Standardów BSACf.
2- ZASADA METODY
Oznaczanie wrażliwości bakterii na antybiotyki metodą dyfuzyjno-krążkową polega na naniesieniu bibułowych
krążków nasyconych antybiotykiem lub chemioterapeutykiem w określonym stężeniu na powierzchnię
odpowiedniego podłoża agarowego(A) na płytkach Petriego, uprzednio zaszczepionego wykalibrowanym
inokulum(A) czystej i młodej hodowli badanego szczepu bakterii. Po inkubacji dokonuje się pomiaru średnicy
(A)
stref zahamowania wzrostu bakterii wokół poszczególnych krążków i porównuje z wartościami granicznymi
dla badanych antybiotyków, w celu zaklasyfikowania szczepu bakteryjnego jako wrażliwy, średnio-wrażliwy lub
oporny na dany preparat antybakteryjny. Wielkość strefy zahamowania wzrostu jest proporcjonalna do
wrażliwości badanego szczepu na dany lek.
(A) Zgodnie z najnowszymi rekomendacjami BSACf.
3- POSTAĆ TESTU
Krążki produkowane przez Bio-Rad mają średnicę 6.5 mm i wykonane są z wysokiej jakości bibuły
impregnowanej roztworami antybiotyków o dokładnie określonym stężeniu.
Krążki z każdej strony są wyraźnie oznakowane 1-3 literowym symbolem (patrz tabela 1). Krążki znajdują się w
rurkach po 50 krążków, umieszczonych w wodoszczelnym opakowaniu z pochłaniaczem wilgoci.
Tabela 1. Krążki do oznaczania lekowrażliwości w ofercie firmy BioRad.
Amoxicillin / Amoksycylina
Ampicillin / Ampicylina
Cefotaxime / Cefotaksym
Cefoxitin / Cefoksytyna
Cefuroxime / Cefuroksym
Chloramphenicol / Chloramfenikol
Ciprofloxacin / Ciprofloksacyna
Colistin / Kolistyna
Erythromycine / Erytromycyna
Gentamicin (high load) /
Gentamycyna o wysokim stężeniu
Levofloxacin / Lewofloksacyna
Linezolid / Linezolid
Metronidazole / Metronidazol
Neomycin / Neomycyna
Netilmicin / Netylmycyna
Nitrofurantoin / Nitrofurantoina
Norfloxacin / Norfloksacyna
Penicillin / Penicylina
Rifampicin / Rifampicyna
Tetracycline / Tetracyklina
Trimethoprim
Vancomycin / Wankomycyna
STĘŻENIE
SYMBOL
OPAKOWANIE
NR KAT.
2 μg
25 μg
5 μg
10 μg
5 μg
10 μg
1 μg
25 μg
5 μg
200 μg
AMX 2
AM 25
CTX
FOX 10
CXM 5
C 10
CIP 1
CS
E5
GEN 200
4 x 50 krążków
4 x 50 krążków
4 x 50 krążków
4 x 50 krążków
4 x 50 krążków
4 x 50 krążków
4 x 50 krążków
4 x 50 krążków
4 x 50 krążków
4 x 50 krążków
67838
67668
67718
67928
67728
67758
67678
67748
67738
67768
1 μg
10 μg
5 μg
10 UI
10 μg
200 μg
2 μg
1 IU
2 μg
10 μg
2,5 μg
5 μg
LVX 1
LZD 10
MTR
N
NET 10
FT
NOR
P1
RA 2
TE 10
TMP 2.5
VA 5
4 x 50 krążków
4 x 50 krążków
4 x 50 krążków
4 x 50 krążków
4 x 50 krążków
4 x 50 krążków
4 x 50 krążków
4 x 50 krążków
4 x 50 krążków
4 x 50 krążków
4 x 50 krążków
4 x 50 krążków
67778
67878
67898
67888
67798
67688
67698
67788
67808
67818
67708
67828
1
4- PRZECHOWYWANIE
Podana data ważności odnosi się wyłącznie do krążków w nieotwieranym opakowaniu, przechowywanym
zgodnie z zaleceniami producenta. Data ważności i numer serii znajdują się na etykiecie (na rurce z krążkami
oraz na opakowaniu zewnętrznym).
• Rurki z krążkami należy przechowywać w oryginalnym opakowaniu w temp. +2-8°C w suchym miejscu.
• Przed otwarciem opakowanie z krążkami musi osiągnąć do temp. pokojową (18-30°C). Po wyjęciu
potrzebnej liczby krążków, pozostałe schować do lodówki.
• Nie używać krążków po upływie terminu przydatności. W przypadku krążków, które były pozostawione w
temp. pokojowej (18-30°C) ponad 8 godzin, nastawić antybiogramy wzorcowe przed dalszym
(5)
użytkowaniem .
• Krążki pozostające w dyspenserze powinny być przechowywane w temp. +2-8°C w suchym miejscu, z
pochłaniaczem wilgoci wewnątrz.
W otwartym opakowaniu lub w dyspenserze, krążki są stabilne przez 6 tygodni (przechowywane zgodnie z
zaleceniami z pochłaniaczem wilgoci) za wyjątkiem krążków nasączonych antybiotykiem, oznaczonych
symbolem
, których okres stabilności, wyrażony w tygodniach, oznaczony jest we wnętrzu symbolu.
5- INNE NIEZBĘDNE MATERIAŁY
•
•
•
•
•
•
Dyspenser krążków
na 6 krążków
nr kat. # 50271
na 8 krążków
nr kat. # 50270
na 12-16 krążków
nr kat. # 50295
Podłoża mikrobiologiczne zgodnie z najnowszymi zaleceniami BSACf
Odczynniki
Szczepy wzorcowe bakterii
Wzorzec gęstości inokulum: 0.5 w skali McFarlanda
Sprzęt laboratoryjny do oznaczania wrażliwości na antybiotyki metodą dyfuzyjno-krążkową
6- ZALECENIA DLA UŻYTKOWNIKA
Należy postępować zgodnie z najnowszymi wytycznymi BSACf. Zawsze należy przestrzegać zasad
bezpieczeństwa pracy z materiałem zakaźnym. Wykorzystane hodowle i wszystkie zanieczyszczone nimi
materiały poddać sterylizacji.
7- PROCEDURA
•
Próbki: Testu wrażliwości nie należy wykonywać na podłożach z bezpośrednio wysianym materiałem
klinicznym. Stosowane do testu inokulum bakterii powinno być przygotowane wg zaleceń BSACf z czystej,
młodej hodowli.
• Każdy etap oznaczenia wrażliwości na antybiotyki powinien być wykonywany zgodnie z instrukcjami BSACf:
sporządzenie wystandaryzowanego inokulum, wysiew na płytki Petriego, dobór i układ na płytce
odpowiednich krążków, temperatura i czas inkubacji oraz interpretacja wyników.
Należy przestrzegać zasad Dobrej Praktyki Laboratoryjnej.
8- INTERPRETACJA WYNIKÓW
•
•
•
Należy dokładnie zmierzyć średnicę strefy zahamowania wzrostu bakterii wokół krążka i porównać z
wartościami granicznymi BSACf.
Od wielkości strefy zahamowania wzrostu w porównaniu z wartością graniczną zależy ocena wrażliwości
szczepu (wrażliwy, średnio-wrażliwy lub oporny) na dany antybiotyk lub chemioterapeutyk.
Kryteria te są na bieżąco aktualizowane w nowych edycjach standardów BSACf.
9- KONTROLA JAKOŚCI
Aktywność krążków należy systematycznie kontrolować nastawiając antybiogramy dla następujących szczepów
wzorcowych:
•
•
•
•
•
Escherichia coli ATCC 25922
Staphylococcus aureus ATCC 25923
Staphylococcus aureus NCTC 6571
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853
Enterococcus faecalis ATCC 29212
2
W tabeli 2 podano akceptowane strefy zahamowania wzrostu w metodzie dyfuzyjno-krążkowej dla
wymienionych szczepów referencyjnych zgodnie ze standardem BSACf.
Tabela 2
Stężenie
KONTROLA
JAKOŚCI
Amoxicillin / Amoksycylina
Ampicillin / Ampicylina
Cefotaxime / Cefotaksym
Cefuroxime / Cefuroksym
Chloramphenicol / Chloramfenikol
Ciprofloxacin / Ciprofloksacyna
Colistin / Kolistyna
Erythromycine / Erytromycyna
Levofloxacin / Lewofloksacyna
Linezolid / Linezolid
Neomycin / Neomycyna
Netilmicin / Netylmycyna
Nitrofurantoin / Nitrofurantoina
Norfloxacin / Norfloksacyna
Penicillin / Penicylina
Rifampicin / Rifampicyna
Tetracycline / Tetracyklina
Trimethoprim
Vancomycin / Wankomycyna
Gentamycyna 200 μg:
Linezolid 10 μg:
Metronidazol 5 μg:
Cefoksytyna 10 μg:
Zakres wielkości stref zahamowania (mm)
E.coli
ATCC 25922
2 μg
25 μg
5 μg
5 μg
10 μg
1 μg
25 μg
5 μg
1 μg
10 μg
10 μg
10 μg
200 μg
2 μg
1 IU
2 μg
10 μg
2,5 μg
5 μg
P.aeruginosa
ATCC 27853
S.aureus
ATCC 25923
S.aureus
NCTC 6571
29-34
21-28
26-32
20-29
31-37
16-20
24-30
16-20
24-29
19-27
17-22
22-29
28-34
22-26
23-27
32-36
22-28
25-31
20-24
26-30
21-27
22-28
20-26
29-36
29-36
26-35
20-28
13-17
E.faecalis ATCC 29212 (22-27 mm)
E.faecalis ATCC 29212 (24-29 mm)
(jedynie standard wewnętrzny) Clostridium perfringens ATCC 13124 (≥ 18 mm)
Clostridium sporogenes ATCC 19404 (≥ 30 mm)
(jedynie standard wewnętrzny) Staphylococcus aureus ATCC 25923 (22-28 mm)
Staphylococcus aureus NCTC 6571 (24-30 mm)
10- KONTROLA JAKOŚCI PRODUCENTA
Odczynniki zostały przygotowane zgodnie z Systemem Jakości, poczynając od materiałów wyjściowych, aż do
ostatecznego produktu komercyjnego.
Odczynniki każdej serii podlegają oznaczeniu kontrolnemu i są dopuszczane do użytkowania, jeśli spełniają
wymagane kryteria. Bio-Rad posiada protokoły produkcji i kontroli jakości każdej serii.
11- OGRANICZENIA METODY
•
Określenie kategorii klinicznej szczepu (oporny, średnio-wrażliwy, wrażliwy) często zależy od różnicy 1
milimetra w wielkości strefy zahamowania wzrostu, co odpowiada marginesowi błędu laboratorium.
•
Stosowane są również inne niż wymienione w Tabeli 2 preparaty przeciwbakteryjne. Wynik testów
wrażliwości dla preparatów bez ustalonych zakresów wielkości stref należy interpretować w sposób
wyłącznie jakościowy na podstawie obecności lub braku określonej strefy zahamowania wzrostu. Należy
notować wielkość każdej strefy.
•
Prawidłowe wykonanie testu wrażliwości zależy nie tylko od aktywności krążków, lecz i od szeregu innych
czynników, jak stosowane inokulum, szczepy wzorcowe, podłoża, oraz sposób przechowywania krążków.
•
Ostateczna interpretacja testu wrażliwości, podobnie jak innych testów laboratoryjnych, nie powinna opierać
się na pojedynczym wyniku, lecz uwzględniać także dane kliniczne, oraz wyniki testów biochemicznych,
cytologicznych i immunologicznych.
3
12- BIBLIOGRAFIA
1. World Heath Organization Expert Committee on Biological Standardization. 1992. Technical report series
822. W-H.O., Geneva.
2. National Committee for Clinical Laboratory Standards. 2000. Approved standard M2-A7. Performance
standards for antimicrobial susceptibilitity tests, 7th ed. NCCLS, Wayne, Pa.
3. National Committee for Clinical Laboratory Standards. 2002. NCCLS document M100-S12. Performance
standards for antimicrobial susceptibilitity testind, 12th informational, Wayne, Pa.
4. Comité de l’antibiogramme. 2002. French Society of Microbiolgoy.
5. V. Loncle-Provot, E. Keller, M.O. Gourdin, M.L. Garrigues, Etude de la stabilité des disques antibiotiques
dans les conditions d'utilisation en routine, 18th interdisciplinary meeting on anti-infectious chemotherapy,
Paris, dec.3/4 1998.
c WHO : World Health Organization
d CLSI/NCCLS : Clinical and Laboratory Standards Institute / National Committee for Clinical Laboratory
Standards
e CA-SFM : Comité de l’Antibiogramme de la Société Française de Microbiologie
f BSAC: British Society for Antimicrobial Chemotherapy
Bio-Rad
3, boulevard Raymond Poincaré
92430 Marnes-la-Coquette France
Tel. : +33 (0) 1 47 95 60 00
Fax : +33 (0) 1 47 41 91 33
01/2006
4