Monoclonal Mouse Anti-Human Smooth Muscle Myosin

Monoclonal Mouse
Anti-Human
Smooth Muscle Myosin Heavy Chain
Clone SMMS-1
Nr kat. M3558
Przeznaczenie
Do diagnostyki In vitro.
Skrócone informacje i objaśnienia
Łańcuch ciężki miozyny mięśni gładkich (Smooth muscle myosin heavy chain, SM-MHC) jest cytoplazmatycznym białkiem strukturalnym,
stanowiącym główny składnik aparatu kurczliwego komórek mięśni gładkich. Ekspresja miozyny mięśni gładkich jest regulowana w trakcie
rozwoju. Miozyna pojawia się we wczesnych etapach rozwoju mięśniówki gładkiej i jest specyficzna dla komórek rozwijających się w
kierunku mięśni gładkich1,2. Zidentyfikowano dwie izoformy łańcucha ciężkiego miozyny mięśni gładkich, które oznaczono symbolami MHC-1
i MHC-23,4.
Zobacz dokument „Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych” firmy Dako lub następujące części instrukcji do
systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie
preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia
metody.
Odczynnik dostarczany
Przeciwciało przeciwko ciężkiemu łańcuchowi miozyny ludzkich mięśni gładkich, SMMS-1 jest mysim przeciwciałem monoklonalnym
dostarczanym w postaci płynnej jako supernatant z hodowli tkankowej (zawierający bydlęce osocze płodowe) dializowany wobec 0,05 mol/l
buforu Tris/HCl o pH 7,2 z dodatkiem 0,015 mol/l azydku sodu.
Izotyp: IgG1, kappa
Klon: SMMS-11
Stężenie mysich przeciwciał IgG (mg/l): Zob. etykieta na fiolce.
Przeciwciało przeciwko miozynie mięśni gładkich, SMMS-1 można stosować w oznaczeniach metodą LSAB przeprowadzanych na tkance
utrwalonej formaliną i zatopionej w parafinie w rozcieńczeniach od 1:50 do 1:100. Powyższe wartości stanowią jedynie wytyczne; optymalne
rozcieńczenia powinny być określone indywidualnie przez każde laboratorium.
Immunogen
Surowy wyciąg z ludzkiej macicy1
Swoistość
Przeciwciało Monoclonal anti-smooth muscle myosin heavy chain, SMMS-1 reaguje zarówno z izoformą MHC-1 (205 kD), jak i MHC-2 (200
kD) w analizie metodą Western blot1 wyciągów z ludzkiej aorty.
Materiały wymagane, ale niedostarczane
Zobacz „Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych” firmy Dako i/lub instrukcje do systemu detekcji.
Środki ostrożności
1. Odczynniki są przeznaczone dla przeszkolonych Użytkowników.
2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. Stężenie NaN3 występujące w
produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub miedzią, wchodzącymi w skład
instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali. Przy usuwaniu resztek odczynnika używać dużych ilości
wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się azydków w instalacji kanalizacyjnej.
3. Podobnie jak w przypadku każdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, należy stosować odpowiednie procedury
postępowania.
4. Należy stosować właściwe wyposażenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą bądź oczami.
5. Niewykorzystane odczynniki należy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i ogólnokrajowymi.
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie należy używać odczynników po upływie terminu ważności podanego na fiolce. Jeżeli odczynniki
są przechowywane w warunkach innych niż podane na ulotce dołączanej do opakowania, Użytkownik powinien je zweryfikować. Nie ma
jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności tego produktu. Dlatego równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od
pacjentów należy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie można wyjaśnić
różnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, należy się skontaktować z działem wsparcia
technicznego firmy Dako.
(114109-002)
303343PL_001 str. 1/3
Przygotowanie próbek
Skrawki parafinowe
Przeciwciało przeciwko miozynie mięśni gładkich, SMMS-1 można stosować do oznaczania skrawków parafinowych preparatów tkankowych
utrwalonych w formalinie.
W celu uzyskania optymalnych wyników barwienia odparafinowane skrawki tkankowe należy poddać działaniu enzymu proteolitycznego, a
następnie przeprowadzić odsłanianie epitopów. W celu uzyskania lepszej adhezji skrawków tkankowych do szkiełek podstawowych, zaleca
się stosowanie szkiełek Silanized Slides (nr kat. S3003). Odparafinowane skrawki tkankowe należy najpierw przez 5-10 minut poddać
działaniu łagodnego roztworu enzymu. Zalecanym enzymem proteolitycznym jest enzym Proteinase K (nr kat. S3004), który należy
rozcieńczyć w stosunku 1:500 w roztworze 0,05 mol/l buforu Tris/HCl o pH 7,6 do ostatecznego rozcieńczenia 0,04 mg/ml.
Po trawieniu proteolitycznym skrawki tkankowe należy wystawić na działanie temperatury. Jeżeli stosuje się metodę łaźni wodnej, zarówno
naczynie Coplina zawierające bufor cytrynianowy w stężeniu 0,01 mol/l o pH 6,0, jak i łaźnię wodną należy wstępnie ogrzać do 95-99 °C. Po
ustabilizowaniu się temperatury należy umieścić skrawki tkankowe w naczyniu Coplina, zawierającym podgrzany bufor. Następnie skrawki
należy ogrzewać przez 40 minut. Użycie zamiast 0,01 mol/l buforu cytrynianowego roztworu Target Retrieval Solution (nr kat. S1700)
poprawia wyniki barwienia i pozwala skrócić czas inkubacji. W tym przypadku czas inkubacji w łaźni wodnej można skrócić do 20 minut. Po
zadziałaniu temperaturą należy odczekać 20 minut, aż naczynie z buforem oraz szkiełka podstawowe ostygną do temperatury pokojowej.
Następnie należy je przepłukać dokładnie wodą destylowaną i umieścić w buforze.
Skrawki mrożone i rozmazy komórkowe
Przeciwciało przeciwko miozynie mięśni gładkich, SMMS-1, można także stosować do znakowania skrawków mrożonych lub rozmazów
komórkowych.
Procedura barwienia
Należy postępować według zalecanej procedury dla danego systemu do detekcji.
Interpretacja barwienia
Przeciwciała przeciwko ciężkiemu łańcuchowi miozyny mięśni gładkich dają cytoplazmatyczny wzór barwienia.
Charakterystyka wyników
Komórki normalne
Stwierdzono, że w skrawkach kriostatowych ludzkich tkanek płodowych płodów 10- i 20-tygodniowych przeciwciało monoclonal anti-smooth
muscle myosin, clone SMMS-1 barwi rozwijające się mięśnie gładkie aorty oraz trzewną mięśniówkę gładką tchawicy, jelita cienkiego,
przełyku i macicy1. Wykazano dodatnie barwienie immunologiczne przeciwciałami SMMS-1 w skrawkach kriostatowych trzewnej i
naczyniowej mięśniówki gładkiej ludzi dorosłych, ale nie komórek nabłonka, śródbłonka czy fibroblastów tkanki łącznej. Stwierdzono, że w
obrębie aorty ludzi dorosłych, komórek błony środkowej o większości komórek mięśni gładkich warstwy podśródbłonkowej błony
wewnętrznej dochodzi do ekspresji miozyny mięśni gładkich1. W skrawkach kriostatowych prawidłowego gruczołu sutkowego wykazano, że
przeciwciało SMMS-1 barwi mięśniówkę gładką naczyń oraz komórki mioepitelialne zrazików, przewodów i zatok mlekonośnych5. Dodatnie
barwienie z przeciwciałem SMMS-1 wykazywały także komórki mioepitelialne przewodów i gronek prawidłowego gruczołu sutkowego
rutynowo opracowanego histopatologicznie6. Okołogronkowe i okołoprzewodowe komórki mioepitelialne rutynowo utrwalonej ślinianki
barwiły się SMMS-1 dodatnio, natomiast komórki przewodów wykazały brak reaktywności7.
Komórki nowotworowe
Wykazano, że przeciwciało przeciwko miozynie mięśni gładkich znakuje warstwy niezmienionych komórek mioepitelialnych obecnych w
łagodnych i śródnabłonkowych zmianach złośliwych sutka. Warstwy komórek mioepitelialnych łagodnych nowotworów, takich jak złożone
zmiany sklerotyczne i brodawczaki, wykazywały się dodatnim barwieniem przez SMMS-1, podczas gdy w przypadku wewnątrztorbielowych
raków brodawczakowatych nie stwierdzano immunobarwienia komórek mioepitelialnych. Stwierdzono ekspresję miozyny w komórkach
mioepitelialnych na obrzeżach przewodów i gronek zajętych przez przewodowego raka śródnabłonkowego. Nie wykryto komórek
mioepitelialnych w inwazyjnym raku sutka, a reaktywność przeciwciała przeciwko miozynie mięśni gładkich była ograniczona do komórek
podścieliska, które barwiły się tylko w niewielkim odsetku testowanych guzów5. Opisywano także, że przeciwciało SMMS-1 znakuje
nowotworowo zmienione mioepitelium gruczolaków wielopostaciowych ślinianki7.
Piśmiennictwo
1. Frid MG, et al. Phenotypic changes of human smooth muscle cells during development: Late expression of heavy caldesmon and
calponin. Dev Biol 1992; 153:185
2. Glukhova MA, et al. Developmental changes in expression of contractile and cytoskeletal proteins in human aortic smooth muscle. J
Biol Chem 1990; 265(22):13042
3. Borrione AC, et al. Myosin heavy-chain isoforms in adult and developing rabbit vascular smooth muscle. Eur J Biochem 1989; 183:413
4. Sartore S, et al. Myosin heavy-chain isoforms in human smooth muscle. Eur J Biochem 1989; 179:79
5. Lazard D, et al. Expression of smooth muscle-specific proteins in myoepithelium and stromal myofibroblasts of normal and malignant
human breast tissue. Proc Natl Acad Sci USA 1993; 90:999
6. Wang NP, et al. Monoclonal antibodies (MAbs) to novel myoepithelium-associated proteins can distinguish between benign and
malignant lesions of the breast. US Canad Acad Pathol Abstr 1996; 26:135
7. Savera AT, et al. Immunolocalization of smooth muscle-specific proteins (SMSPs) in pleomorphic adenomas. US Canad Acad Pathol
Abstr 1996; 104:603
(114109-002)
303343PL_001 str. 2/3
(114109-002)
303343PL_001 str. 3/3