MLL FISH DNA Probe, Split Signal Nr kat. Y5401

MLL FISH DNA Probe, Split Signal
Nr kat. Y5401
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Sonda MLL FISH, Split Signal jest przeznaczona do wykrywania translokacji obejmujących gen MLL na
chromosomie 11q23 przy zastosowaniu techniki fluorescencji hybrydyzacyjnej in situ (FISH). Podczas
stosowania sondy na próbkach cytologicznych zaleca się stosowanie zestawu Dako Cytology FISH Accessory
Kit, nr kat. K5499.
Interpretację wyników powinien przeprowadzić pracownik uprawniony do wykonywania takich badań w oparciu
o historię choroby pacjenta oraz inne testy diagnostyczne.
Wstęp
Ludzki gen MLL (1) (znany równieŜ pod nazwą ALL-1, HTRX1 i HRX (2, 3, 4)) składa się z 37 eksonów
obejmujących ~100 kb na chromosomie 11 pasma q23 (5, 6). Białko MLL jest hipotetycznym czynnikiem
transkrypcyjnym i zawiera szereg istotnych domen: domenę represji transkrypcyjnej, domenę aktywacji i dwa
typy domen wiąŜących DNA (sekwencje typu haka AT wiąŜące mały rowek DNA i palec cynkowy wiąŜący duŜy
rowek DNA (7). Translokacje obejmujące MLL rozrywają gen pomiędzy dwa typy sekwencji wiąŜących DNA.
Sekwencje haka AT i domena represji pozostają na chromosomie 11, podczas gdy palce cynkowe i domena
aktywacji, albo zostają utracone, albo podlegają translokacji na inny chromosom (7). Translokację MLL
zidentyfikowano z róŜnymi parami chromosomowymi (8). Dwie sondy DNA stosowane do wykrywania za
pomocą rozszczepienia sygnału FISH translokacji obejmującej gen MLL są przeznaczone do hybrydyzacji
fragmentów przed i za wspólnym regionem przerwania grupy. Współlokalizacja sond daje sygnał Ŝółty,
natomiast zdarzenia translokacji w regionie powodują rozszczepienie sygnału na oddzielny zielony
(fluoresceina) i czerwony (czerwień teksańska, Texas Red) sygnał.
Cel (czerwony)
Sonda DNA znakowana Texas Red (MLL-TR) wiąŜe się do segmentu centromeru 239 kb, do regionu
przerwania grupy MLL na chromosomie 11q23.
Cel (zielony)
Sonda DNA znakowana fluoresceiną (za MLL- Flu) wiąŜe się do segmentu telomeru 513 kb, do regionu
przerwania grupy MLL na chromosomie 11q23.
Odstęp pomiędzy sondami
Odstęp pomiędzy MLL-TR a MLL-Flu wynosi 28 kb.
Odczynnik dostarczony
Sonda MLL FISH DNA Probe, Split Signal stanowi mieszaninę dwóch sond DNA znakowanych fluorochromem
z nieznakowanymi sondami blokującymi PNA. Sondy DNA znajdujące się w mieszaninie obejmują sondę
znakowaną fluoresceiną (MLL-Flu) oraz sondę znakowaną Texas Red (MLL-TR) i naleŜy je stosować wraz z
zestawem Dako Cytology FISH Accessory Kit, nr kat. K5499 na próbkach cytologicznych. Odczynnik jest
dostarczany w postaci płynnej w roztworze hybrydyzacji zawierającym 45% formamid, 10% siarczan dekstranu,
300 mmol/L NaCl, 5 mmol/L fosforan i środek blokujący. Jedna fiolka zawiera 200 µL wystarczające na
wykonanie 20 testów (10 µL na test).
Swoistość
98,5%. Określona jako średnia z 6 niezaleŜnych zliczeń 1050 komórek z normalnej krwi obwodowej.
Czułość
96,9%. Określona jako średnia z 6 niezaleŜnych zliczeń 1050 komórek w linii komórek o dodatniej translokacji
RS4;11 (9).
Wartość graniczna
Podczas liczenia 50 komórek, próbki z ponad 4 zdarzeniami rozszczepionych sygnałów naleŜy uwaŜać za
dodatnie w zakresie translokacji MLL. Swoistość i czułość sondy zapewnia, Ŝe 99% wszystkich próbek
zawierających poniŜej 2% komórek ze zdarzeniami rozszczepienia sygnału zostanie scharakteryzowanych jako
ujemne w zakresie translokacji, natomiast 99% wszystkich próbek zawierających ponad 12% komórek ze
zdarzeniami rozszczepienia sygnału zostanie scharakteryzowanych jako dodatnie w zakresie translokacji. W
przypadku wątpliwości naleŜy wykonać ponowne zliczenie próbki.
Środki ostroŜności
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Odczynnik zawiera ≥25-<50% formamid i ≥1-<3% chlorek sodu. Produkt jest oznaczony następującymi
symbolami:
(128828-001)
P04170PL_01_Y540129-2/2015.10 p. 1/2
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Niebezpieczeństwo
H360D
P201
P280
MoŜe działać szkodliwie na dziecko w łonie matki.
Przed uŜyciem zapoznać się ze specjalnymi środkami ostroŜności..
Stosować rękawice ochronne. Nosić okulary ochronne lub ochronę twarzy. Stosować
odzieŜ ochronną.
W PRZYPADKU naraŜenia lub styczności: Zwrócić się o pomoc lekarską.
Przechowywać pod zamknięciem.
Zawartość i pojemnik usuwać zgodnie z lokalnymi, regionalnymi, krajowymi i
międzynarodowymi przepisami.
P308 + P313
P405
P501
Przechowywanie
Przechowywać w ciemnym miejscu w temp. 2-8 °C. Nie stosować po upływie terminu
waŜności podanego na opakowaniu. JeŜeli odczynniki są przechowywane w warunkach
innych niŜ podane na ulotce dołączanej do opakowania, UŜytkownik powinien je
zweryfikować. Nie ma jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności tego
produktu. Z tego względu jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od pacjentów,
naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego
wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych,
gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem wsparcia
technicznego firmy Dako.
Piśmiennictwo
1. Ziemin-van der Poel S, McCabe NR, Gill HJ, Espinosa R III, Patel Y, Harden A, et al. Identification of a
gene, MLL, that spans the breakpoint in 11q23 translocations associated with human leukemias. Proc Natl
Acad Sci USA 1991;88:10735-9.
2. Gu Y, Nakamura T, Alder H, Prasad R, Canaani O, Cimino G, et al. The t(4;11) chromosome translocation
of human acute leukemias fuses the ALL-1 gene, related to Drosophila trithorax, to the AF-4 gene. Cell
1992;71:701-8.
3. Djabali M, Selleri L, Parry P, Bower M, Young BD, Evans GA. A trithorax-like gene is interrupted by
chromosome 11q23 translocations in acute leukaemias. Nat Genet 1992;2:113-8.
4. Tkachuk DC, Kohler S, Cleary ML. Involvement of a homolog of Drosophila trithorax by 11q23
chromosomal translocations in acute leukemias. Cell 1992;71:691-700.
5. Nilson I, Löchner K, Siegler G, Greil J, Beck JD, Fey GH, et al. Exon/intron structure of the human ALL-1
(MLL) gene involved in translocations to chromosomal region 11q23 and acute leukaemias. Br J Haematol
1996;93:966-72.
6. Marschalek R, Nilson I, Löchner K, Greim R, Siegler G, Greil J, et al. The structure of the human ALL1/MLL/HRX gene. Leuk Lymphoma 1997;27:417-28.
7. Zeleznik-Le NJ, Harden AM, Rowley JD. 11q23 translocations split the "AT-hook" cruciform DNA-binding
region and the transcriptional repression domain from the activation domain of the mixed-lineage leukemia
(MLL) gene. Proc Natl Acad Sci USA 1994;91:10610-4.
8. van der Burg M, Poulsen TS, Hunger SP, Beverloo HB, Smit EME, Vang-Nielsen K, et al. Split-signal FISH
for detection of chromosome aberrations in acute lymphoblastic leukemia using a new PNA-based blocking
method. Leukemia 2004;18:895-908.
9. Cell line RS4;11 provided by DSMZ-German Collection of Microorganisms and Cell Cultures,
Braunschweig, Germany.
Objaśnienia s ymboli
(128828-001)
N umer katalogo wy
Te mp eratur a
p rzech owywa nia
ZuŜyć przed
Wyrób med yczny do
d iag nostyki in vitro
C hro nić prze d świa tł em
Prod ucen t
Sp rawd zić w instrukcj i
stoso wan ia
N umer ser ii
Piktog ram GHS
(dzia ł środ ki stro Ŝn ości)
P04170PL_01_Y540129-2/2015.10 p. 2/2
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17