BIOIMAGER Pathway 885 - Katedra Biochemii Klinicznej

PRACOWNIA BIOLOGII MOLEKULARNEJ I PATOGENÓW
ZAKŁAD BIOCHEMII KLINICZNEJ (+48 12 424-87-92)
BD Pathway 855 High-Content Cell Analysis Workflow
w komórkach nerwowych. Ilościowa analiza wyników prowadzona jest przy
pomocy oprogramowania opartego na programie Microsoft Excel, Attovision 7.1.
Mikroskop fluorescencyjny o wysokiej przepustowości, BD Pathway
855
Mikroskop fluorescencyjny BD Pathway 855 umożliwia obrazowanie
zarówno komórek utrwalonych, jak i żywych. Instrument jest wyposażony w dwie
lampy rtęciowe, które pozwalają na obrazowanie w dużym zakresie długości fal
(340nm–750nm), 16 filtrów oraz opcję obrazowania konfokalnego. Komórki
obrazowane są na płytkach wielodołkowych (96 lub 384) oraz na szkiełkach
mikroskopowych. Preparaty przeznaczone do badania umieszczane są w komorze,
w której możliwa jest kontrola ciepła i zawartości CO2 dzięki czemu mogą być
analizowane funkcje przyżyciowe komórek. W komorze znajduje się też specjalne
ramię, które pozwala na dodawanie wybranych czynników w trakcie
doświadczenia (np. jako czynnik indukujący wypływ wapnia w komórce, czy
zmianę potencjału błonowego mitochondriów).
Pomiary fluorescencji prowadzone na płytce wielodołkowej umożliwiają
jednoczasowe monitorowanie wybranych procesów biologicznych w kilku
powtórzeniach oraz w wielu różnych warunkach inkubacji. Analiza obrazu
obejmuje ocenę parametrów fluorescencji takich, jak jej intensywność czy
ziarnistość, w wybranych obszarach komórki (np. jądro, cytoplazma, obszar
okołojądrowy itd.). Tym sposobem można klasyfikować wybrane cechy
morfologiczne komórek, badać zmiany lokalizacji fluorescencji, obserwować
zmiany przyżyciowe w odpowiedzi na zadany czynnik czy zmianę warunków
inkubacji. Istnieje również opcja oceny ilości i długości wypustek dendrytycznych
PRZYKŁADY WYKORZYSTANIA MIKROSKOPU BD Pathway 855
•
•
barwienie komórek utrwalonych
-
ilościowe obrazowanie zmian ekspresji białek, np. białka PAT,
czy białka stresu retikulum endoplazmatycznego (Alexa488,
Cy3, FITC, GFP) oraz stopień akumulacji lipidów w kroplach
lipidowych (Bodipy, LD540);
-
ilościowa ocena translokalizacji wewnątrzkomórkowej białek.
barwienie komórek przyżyciowe
-
jakościowa i ilościowa analiza zmian potencjału błon
mitochondrialnych - reakcja typu end-point (TMRM, JC-1)
-
ilościowe obrazowanie zmian wypływu jonów wapnia - reakcja
kinetyczna (Fura2)
KATEDRA BIOCHEMII KLINICZNEJ UNIWERSYTET JAGIELLOŃSKI COLLEGIUM MEDICUM, 31-501 KRAKÓW, UL. KOPERNIKA 15A, TELEFON: +48 12 421 40 06