M44 MICROGEN E Coli

MICROGEN®E. coli O157
PRZEZNACZENIE TESTU
MICROGEN® E.coli O157 jest szybkim testem aglutynacji lateksowej przeznaczonym do wstępnej identyfikacji
E. coli z grupy serologicznej O157 hodowanej na stałych podłoŜach wybiórczych z próbek ludzkiego kału lub
z Ŝywności. Test pozwala na szybkie odróŜnienie E. coli O157 od innych serotypów E. coli i drobnoustrojów
izolowanych z kału od pacjentów z biegunką. Zestaw jest przeznaczony jedynie do profesjonalnego uŜytku.
ZASADA TESTU
Cząsteczki lateksowe pokryte są przeciwciałami przeciw lipopolisacharydowemu antygenowi somatycznemu
(ściana komórkowa) E. coli O157. Kiedy uczulone cząsteczki lateksu zmiesza się z zawiesiną zawierającą antygen
E. coli O157, zachodzi czuła i swoista reakcja immunochemiczna, powodując aglutynację rozproszonych
cząsteczek lateksowych w agregaty łatwo widoczne gołym okiem.
SKŁAD TESTU
M44a Odczynnik lateksowy: 2,5 ml
Cząsteczki lateksowe pokryte króliczymi przeciwciałami dla E. coli O157. Utrwalone 0,099% azydkiem sodowym
(niebieska nakrętka).
M44b Kontrolny odczynnik lateksowy: 2,5 ml
Cząsteczki lateksowe pokryte króliczymi przeciwciałami nie reagującymi z E. coli O157. Utrwalone 0,099%
azydkiem sodowym (czarna nakrętka).
M40 0,85% izotoniczny roztwór soli: 5 ml
Utrwalony 0,099% azydkiem sodowym (biała nakrętka).
Instrukcja uŜycia
Jednorazowe karty reakcyjne
Jednorazowe patyczki do mieszania
DODATKOWE MATERIAŁY WYMAGANE, ALE NIE WCHODZĄCE W SKŁAD ZESTAWU
• ezy bakteriologiczne
• płytki z agarem MacConkey’a zawierające 1% D-sorbitolu zamiast laktozy (Agar MacConkey’a
z sorbitolem).
ŚRODKI OSTROśNOŚCI
Bezpieczeństwo:
1. Odczynniki dostarczone w zestawie słuŜą jedynie do diagnostyki in vitro.
2. Azydek sodowy uŜywany jako konserwant w zestawie odczynników moŜe reagować z ołowianą
i miedzianą armaturą, tworząc potencjalnie wybuchowe azydki metali. Utylizować zalewając duŜą
objętością wody, aby zapobiec osadzaniu się azydków.
3. Odpowiednie środki ostroŜności naleŜy podjąć podczas pracy i usuwania potencjalnych organizmów
patogennych. OdkaŜać materiał zakaźny podchlorynem sodowym w końcowym stęŜeniu 3% przez 30
min. Płynne ścieki zawierające kwas powinno się neutralizować przed dalszą obróbką.
MICROGEN®E. coli O157
Strona 1
Środki proceduralne:
1. MICROGEN® E.coli O157 powinien być uŜywany zgodnie z dołączoną instrukcją.
2. Pozwolić wszystkim odczynnikom na osiągnięcie temperatury pokojowej przed uŜyciem.
3. Nie rozcieńczać Ŝadnego odczynnika z zestawu.
4. Nie mieszać odczynników z róŜnych partii i zestawów.
5. Nie zamraŜać Ŝadnych odczynników.
6. UwaŜać, Ŝeby zakraplacz z odczynnikiem lateksowym nie dotknął próbek bakteryjnych.
7. Przed uŜyciem upewnić się, Ŝe karta reakcyjna jest czysta i sucha.
8. Upewnić się, Ŝe odpowiednią uwagę poświęcono rozdziałowi „Kontrola jakości”.
9. Zachować ostroŜność podczas zapisywania wyników aglutynacji. Reakcje, które są zbyt silne lub
„włókniste” mogą nie być prawdziwą aglutynacją.
PRZECHOWYWANIE I TERMIN WAśNOŚCI
MICROGEN® E.coli O157 powinien być przechowywany w temp. 2 - 8°C, kiedy nie jest uŜywany. Zestawu nie
naleŜy uŜywać po upływie daty waŜności wydrukowanej na naklejce na kartonie.
PRÓBKI
Materiały od pacjentów (kał z domieszką krwi) powinno się posiać na Agar MacConkey’a z sorbitolem
(zawierający 1% D-sorbitolu zamiast laktozy). Inkubować tlenowo przez 18 - 24 godz. w 35 - 37°C. Potencjalnie
toksyczne szczepy E. coli O157:H7 rosną jako bezbarwne kolonie (nie fermentujące sorbitolu), morfologicznie
inne od innych szczepów E. coli. Trzeba pamiętać, Ŝe inne bakterie mogą rosnąć na tym podłoŜu i dawać kolonie
o podobnym wyglądzie do E. coli O157, np. E. hermanii, P. stuartii (zob. ograniczenia uŜycia).
SPOSÓB WYKONANIA
Kontrola jakości:
Aby potwierdzić, Ŝe odczynniki działają prawidłowo, naleŜy za kaŜdym razem, kiedy uŜywa się zestaw, wykonać
następujące sprawdziany:
1. Odczynnik kontrolny
Dodać 1 kroplę lateksu testowego MICROGEN® E.coli O157 (M44a) i 1 kroplę lateksu kontrolnego
(M44b) do 2 oddzielnych pól na karcie testowej. Dodać 1 kroplę soli fizjologicznej (M40) do kaŜdej
kropli lateksu i wymieszać kaŜdą zawiesinę lateksu z solą oddzielnie, rozprowadzając płyn na całej
wewnętrznej powierzchni zaznaczonego pola. Obracać kartę delikatnie przez 30 sekund i obserwować,
czy wystąpi aglutynacja na obu polach. JeŜeli aglutynacja wystąpi, albo lateks, albo sól fizjologiczna daje
niespecyficzną aglutynację i powinno się ten odczynnik wyrzucić.
2. Kontrola dodatnia
Przygotować jednolitą zawiesinę znanego szczepu E. coli O157 na 2 polach karty testowej (zob. Sposób
wykonania testu poniŜej). Obracać delikatnie kartę przez 30 sekund i obserwować, czy wystąpi aglutynacja.
JeŜeli nie ma aglutynacji na Ŝadnym polu, dodać 1 kroplę lateksu testowego MICROGEN® E.coli O157
(M44a) na jedno pole i jedna kroplę lateksu kontrolnego (M44b) na drugie. Obracać kartę delikatnie
przez 2 minuty i obserwować, czy zachodzi aglutynacja. Na polu zawierającym lateks testowy powinna
zajść wyraźna aglutynacja, podczas gdy na polu zawierającym lateks kontrolny nie powinna zajść
aglutynacja. JeŜeli nie zaszły takie reakcje, odczynniki mogą być nieaktywne lub zanieczyszczone
i powinno się je wyrzucić.
Sposób wykonania testu:
1. Nanieść po 1 kropli (30 µl) soli fizjologicznej (M40) na dwa pola na czystej, suchej karcie reakcyjnej.
2. Przy pomocy ezy pobrać kilka podejrzanych kolonii E. coli z płytki agarowej MacConkey z sorbitolem.
Wybierać tylko kolonie bezbarwne, których morfologia przypomina morfologię E. coli.
3. Zawiesić kolonie w dwóch kroplach soli na karcie reakcyjnej, aby otrzymać gęstą, jednorodną zawiesinę.
Rozprowadzić zawiesinę wewnątrz powierzchni pola testowego.
4. Obracać delikatnie kartę przez 30 sekund i obserwować, czy zachodzi aglutynacja lub wykłaczanie. JeŜeli
zawiesina pozostaje jednorodna, przejść do punktu 5. JeŜeli zawiesina jest „włóknista” lub „ziarnista”,
próbki nie moŜna badać testem MICROGEN® E.coli O157, poniewaŜ moŜe on dawać fałszywie
dodatnią aglutynację, kiedy doda się lateks. W tym przypadku naleŜy uŜyć alternatywna metodę
badawczą.
5. Delikatnie wytrząsnąć kaŜdy odczynnik lateksowy, aby otrzymać jednorodną zawiesinę.
6. Dodać 1 kroplę lateksu testowego MICROGEN® E.coli O157 do jednej z zawiesin bakteryjnych, a do
drugiej jedną kroplę lateksu kontrolnego MICROGEN® E.coli O157. Nie pozwolić, Ŝeby zakraplacz
MICROGEN®E. coli O157
Strona 2
z lateksem dotknął zawiesiny bakteryjnej.
7. Wymieszać zawiesiny osobnymi patyczkami dla kaŜdej kombinacji.
8. Obracać delikatnie kartę przez 2 minuty i obserwować oznaki aglutynacji. Na reakcję aglutynacji
wskazuje widoczna agregacja cząstek lateksu.
9. Wyrzucić uŜyte karty i patyczki do mieszania do odpowiedniego środka dezynfekcyjnego.
INTERPRETACJA WYNIKÓW
Wyniki testu MICROGEN® E.coli O157 powinno się interpretować w następujący sposób:
Lateks
testowy
+
–
+
–
Lateks
kontrolny
–
–
+
+
Interpretacja
Obecna E. coli O157
Nieobecna E. coli O157
Wynik niepewny aglutynacja
niespecyficzna
OGRANICZENIA TESTU
1. Wyniki powinny być interpretowane przez lekarza w połączeniu z wszystkimi dostępnymi informacjami
klinicznymi i laboratoryjnym.
2. Powinno się badać tylko czyste kolonie z podłoŜa MacConkeya z sorbitolem, które wykazują morfologię
kolonii typową dla E. coli.
3. Powinno się uŜyć konwencjonalne testy serologiczne z uŜyciem surowic O i H dla E. coli, aby
potwierdzić serotyp hodowli dodatniej z testem lateksowym.
4. Większość kolonii nie fermentujących sorbitolu na podłoŜu MacConkey’a z sorbitolem, dających dodatni
wynik testu lateksowego MICROGEN® E.coli O157, zidentyfikowano wstępnie jako E. coli O157:H7.
Jednak pewne inne szczepy E. coli O157 (np. H16) mogą takŜe rosnąć na tym podłoŜu w postaci nie
fermentujących sorbitolu kolonii i mogą takŜe dawać dodatnią aglutynację w tym teście.
5. Podczas gdy Test MICROGEN® E.coli O157 wykonano tak, aby zredukować wybiórczo normalne
reakcje krzyŜowe z E. hermanii, w rzadkich przypadkach mogą zdarzać się takie reakcje krzyŜowe. E.
hermanii moŜna odróŜnić od E. coli O157 na podstawie testów na fermentację cellobiozy, wzrost na
bulionie z KCN i wytwarzania Ŝółtego pigmentu.
Fermentacja cellobiozy
Wzrost na bulionie z KCN
śółty pigment
E. coli
–
–
–
E. hermanii
+
+
+
6. Zawiesiny z hodowli, które autoaglutynują, nie powinny być badane przy pomocy MICROGEN® E.coli
O157. Powinno się uŜywać metody alternatywne.
7. Szczepy dodatnie w teście lateksowym powinny być zidentyfikowane jako E. coli z uŜyciem
odpowiedniego zakresu testów biochemicznych.
8. Dodatni wynik aglutynacji lateksowej nie powinien być interpretowany jako izolacja wysoce
verotoksycznego szczepu E. coli O157. Wszystkie takie szczepy powinno się poddać następnym
odpowiednim testom na obecność toksyny.
CHARAKTERYSTYKA PORÓWNAWCZA
Wydajność kliniczną MICROGEN® E.coli O157 oznaczono w szpitalnym laboratorium mikrobiologicznym.
Posiano próbki kału z domieszką krwi od 474 pacjentów z biegunką, krwotocznym zapaleniem jelit lub zespołem
hemolityczno-mocznicowym. Z 47 posiewów wyrosły nie fermentujące sorbitolu kolonie, które dały pozytywne
dla E. coli O157 wyniki testu MICROGEN® E.coli O157 i drugiego dostępnego w handlu testu lateksowego.
Wszystkie kolonie potwierdzono jako E. coli O157 przy pomocy konwencjonalnych testów biochemicznych.
Czułość MICROGEN® E.coli O157 = 47/47 = 100%.
ODTWARZALNOŚĆ
Została potwierdzona odtwarzalność między seriami. Jest ona monitorowana poprzez sprawdzanie kaŜdej serii
na zdefiniowanym panelu próbek jako część procedury kontroli jakości produktu.
MICROGEN®E. coli O157
Strona 3
LITERATURA
1. Borczyk A., Lior H. i Cebin B. 1987 False positive identification of Escherichia coli in foods. Int. J.
Food. Protection 4: 347-349
.
GRASO Biotech
Krąg 4A. 83-200 Starogard Gdański
Dział Obsługi Klienta: 058 562 30 21, 058 562 56 61 do 64 wew. 30,
[email protected]; www.podloza.pl, www.grasobiotech.pl
MICROGEN®E. coli O157
Strona 4