The leaf spotting of Crassula multicava and potential

ZESZYTY NAUKOWE
INSTYTUTU SADOWNICTWA I KWIACIARSTWA IM. SZCZEPANA PIENIĄŻKA
TOM 18
2010
PLAMISTOŚĆLIŚCI CRASSULA MULTICAVA I MOŻLIWOŚCI
CHEMICZNEJ OCHRONY
The leaf spotting of Crassula multicava and potential methods of their
chemical control
Alicja Saniewska , Anna Jarecka-Boncela,
Marian Saniewski
Instytut Sadownictwa i Kwiaciarstwa im. Szczepana Pienią
ż
ka
ul. Pomologiczna 18, 96-100 Skierniewice
e-mail: [email protected]
ABSTRACT
The aim of this work was to determine the cause of leaf spotting of Crassula
multicava and potential methods of their control. The leaves of succulent Crassula
multicava growing in greenhouse conditions showed disease symptoms, yellow and
gradually browning spots, and the disease was caused by Pestalotiopsis guepinii. The
strobilurin fungicides, azoxystrobin (Amistar 250 SC), kresoxim-methyl (Discus 500
WG) and chlorotalonil with addition of zinc (Gwarant 500 SC) greatly inhibited the
growth of Pestalotiopsis guepinii. Total inhibition of the mycelium growth was observed
when azoxystrobin at concentration of 6 μg/cm³ was added. Kresoxim-methyl and
chlorotalonil with addition of zinc at a concentration of 10 μg/cm³ limited the mycelium
growth in 98% and 80% respectively. The inhibitory effect was greater for azoxystrobin
than kresoxim-methyl and chlorotalonil. Preventively and curatively used of synthetic
analogs of strobilurins and Gwarant greatly limited the development of Pestalotiopsis
guepinii.
Key words: Crassula multicava, Pestalotiopsis guepinii, azoksystrobin, krezoksymmetylu, control
208 Zeszyty Naukowe Instytutu Sadownictwa i Kwiaciarstwa im. Szczepana Pienią
ż
ka, tom 18
WSTĘP
Crassula multicava to krzaczasty, bylinowy sukulent o owalnych,
szaro-zielonych liś
ciach, ś
rednicy okoł
o 8 cm. Liczne grona mał
ych
gwiaź
dzistych, różowych kwiatów na wydł
uż
onych pę
dach pojawiająsię
wiosną
.
W uprawie szklarniowej w latach 2007-2008 notowano symptomy
suchej brą
zowej plamistoś
ci na liś
ciach Crassula multicava; początkowo
drobne żół
te plamki, stopniowo brą
zowiejąi obejmująznacznączęś
ć
górnej i dolnej strony liś
ci (fot. 1).
Celem pracy był
a identyfikacja patogena powodują
cego plamistoś
ć
liś
ci Crassula multicava oraz ocena fungicydów, syntetycznych analogów
strobiluryny substancji wytwarzanej przez Strobilurus tenacellus (Pers.
Fr.) Sing. i Oudemansiella mucida (Schrad. ex Fr.) Höhn. w ograniczaniu
rozwoju choroby.
MATERIAŁI METODY
Izolacja grzybów. Fragmenty (okoł
o 5 mm) chorych liś
ci, po ich
powierzchniowym odkaż
eniu, wykł
adano na pożywkę ziemniaczanoglukozową(PDA-Merck), po 10 szt. na szalkęi inkubowano w temperaturze 20-25 oC. Wyrastające kolonie grzybów przeszczepiano na skosy,
a po wyroś
nię
ciu segregowano makroskopowo na grupy. Wybrane izolaty
z poszczególnych grup po doprowadzeniu do kultur jednozarodnikowych
oznaczano do gatunku, posł
ugują
c sięmonografiami i opracowaniami
autorów Arx (1974), Barnett (1960) i Sutton (1980).
Ocena chorobotwórczoś
ci wybranych izolatów grzybów. Do
doś
wiadczeńwybrano po 10 izolatów pozyskanych gatunków; Alternaria
alternata (Fr.) Keissler, Botrytis cinerea Pers., Fusarium oxysporum
Schlecht. i Pestalotiopsis guepinii (Desm.) Stey. Krąż
ki grzybni o ś
rednicy
3 mm wycinano z 7-dniowych kultur rosną
cych na pożywce PDA
i nanoszono na odkaż
one liś
cie Crassula multicava. Inokulowane liś
cie
ukł
adano na siatce polietylenowej w tacach wył
ożonych bibuł
ąfiltracyjną
nasączonąwodądestylowaną
. Kuwety przykrywano foliąaluminiową
w celu zwię
kszenia wilgotnoś
ci. Liś
cie inkubowano w temperatutze 25 oC.
Do oceny chorobotwórczoś
ci każ
dego z badanych izolatów uż
yto 40 liś
ci.
Plamistoś
ćliś
ci Crassula multicava i możliwoś
ci chemicznej ochrony
209
Doś
wiadczenie wykonano w dwóch seriach w odstę
pie 30 dni. Po 10
dniach inkubacji wykonano pomiary dł
ugoś
ci nekrozy.
Wzrost grzybni Pestalotiopsis guepinii (C-8) in vitro. W pierwszym
etapie okreś
lano wpł
yw rodzaju pożywki na wzrost grzybni. Badania
prowadzono na pożywkach: agarowo-ziemniaczano-glukozowej (PDA),
fasolowej zestalonej agarem (LBA), maltozowej (Malt-extract-agar)
i poż
ywce mineralnej Czapka zestalonej agarem (CzDA) w temperaturze
o
20 C. Pożywka z największym przyrostem liniowym grzybni posł
uż
ył
a do
okreś
lenia wpł
ywu temperatury na wzrost grzybni, z okreś
leniem
temperatury optymalnej dla wzrostu i rozwoju patogena. Na ś
rodek szalki
Petriego o ś
rednicy 90 mm nanoszono 3 mm krą
ż
ek grzybni pobrany z 7dniowej kultury, po czym szalki umieszczano w termostatach w temperaturze od 7 oC do 35 oC na 8 dni. W czasie inkubacji mierzono ś
rednicę
grzybni. Na podstawie pomiarów obliczono powierzchnię grzybni.
Doś
wiadczenie prowadzono w dwóch seriach, stosując po 5 szalek dla
każ
dej poż
ywki.
Oddział
ywanie pochodnych strobiluryny w ograniczaniu wzrostu
i rozwoju Pestalotiopsis guepinii in vitro. Do badańuż
yto azoksystrobinę
– substancjęaktywnąpreparatu Amistar 250 SC i krezoksym-metylu –
substancjęaktywnąfungicydu Discus 500 WG. Jako preparat standardowy
zastosowano chlorotalonil z dodatkiem cynku jako mikroelementu
(Gwarant 500 SC).
Doś
wiadczenie A – Oddział
ywanie preparatów na wzrost grzybni
Pestalotiopsis guepinii in vitro. Preparaty dodawano do pożywki PDA
w iloś
ci 2, 4, 6, 8, 10, 50, 100, 250, 500, 750 i 1000 μg·cm-³. Tak
przygotowane szalki z poż
ywką szczepiono krą
żkami grzybni
Pestalotiopsis guepinii (izolat C-8) o ś
rednicy 3 mm. Po 2, 4, 6 i 8 dniach
o
inkubacji w temperaturze 25 C mierzono ś
rednicęgrzybni w dwóch
prostopadł
ych kierunkach. Doś
wiadczenie wykonano w 2 seriach,
używają
c po 5 szalek dla każ
dego stęż
enia.
Doś
wiadczenie B – Oddział
ywanie preparatów stosowanych
profilaktycznie i interwencyjnie w ograniczaniu rozwoju Pestalotiopsis
guepinii na liś
ciach Crassula multicava w warunkach laboratoryjnych.
Liś
cie pobierano z roś
lin zdrowych uprawianych w warunkach szklarniowych. Profilaktycznie opryskano izolowane liś
cie zawiesiną
preparatów (w stę
żeniach podanych w tabeli), a następnie po osuszeniu
210 Zeszyty Naukowe Instytutu Sadownictwa i Kwiaciarstwa im. Szczepana Pienią
ż
ka, tom 18
inokulowano je krąż
kami 7-dniowej grzybni Pestalotiopsis guepinii
oś
rednicy 3 mm rosną
cej na pożywce PDA. Interwencyjnie stosowano
preparaty po 2 dniach od inokulacji krą
ż
kami grzybni Pestalotiopsis
guepinii, tj. na liś
cie z widocznymi objawami porażenia. Po inokulacji
i zaprawieniu w preparatach liś
cie ukł
adano na siatce polietylenowej
w kuwetach wył
oż
onych wilgotnąbibuł
ąi przykrywano szczelnie folią
aluminiową
. Po 7 i 12 dniach inkubacji w temp. 25 oC mierzono ś
rednicę
nekrozy. Dla każ
dego preparatu testowano 40 liś
ci (10 liś
ci w 4
powtórzeniach). Doś
wiadczenie wykonano w dwóch seriach w odstę
pie 30
dni.
Uzyskane wyniki opracowano statystycznie, posł
ugują
c sięmetodą
analizy wariancji. Do oceny istotnoś
ci różnic mię
dzy ś
rednimi uż
yto testu
t-Duncana, przyjmują
c poziom istotnosci 5%.
WYNIKI I DYSKUSJA
Z chorych liś
ci Crassula multicava z objawami brą
zowej zgorzelowej
plamistoś
ci izolowano gł
ównie Alternaria alternata (Fr.) Keissler, Botrytis
cinerea Pers., Fusarium oxysporum Schlecht. i Pestalotiopsis guepinii
(Desm.) Stey. Przeprowadzone testy chorobotwórczoś
ci wykazał
y, że
gł
ówną przyczyną począ
tkowo drobnych żół
tych plam stopniowo
brązowieją
cych i obejmujących znacznączęś
ćpowierzchni górnej i dolnej
strony liś
cia jest grzyb Pestalotiopsis quepinii. W warunkach zwię
kszonej
wilgotnoś
ci na brą
zowych plamach obserwowano ciemne drobne
wzniesienia skupień zarodników konidialnych Pestalotiopsis quepinii.
Wszystkie badane izolaty patogena wywoł
ywał
y objawy plamistoś
ci na
liś
ciach Crassula multicava. Stwierdzono zróżnicowanie w ich wirulencji.
Dł
ugoś
ćplam nekrotycznych w następstwie poraż
enia badanymi izolatami
Pestalotiopsis quepinii mierzona po 14 dniach inkubacji liś
ci w tempeo
raturze 25 C wahał
a sięod 8 cm do 25 cm. Spoś
ród badnych izolatów
najbardziej agresywny w rozwoju choroby okazałsięizolat C-8, który
używano w dalszych badaniach.
Minimalny wzrost grzybni izolatu C-8 Pestalotiopsis guepinii
obserwowano w temperaturze 7-10 oC oraz w 30 oC (rys. 1). Grzybnia
badanego izolatu rozwijał
a sięnajszybciej w temperaturze 20-25 oC.
Maksimum wzrostu grzybni stwierdzono w temperaturze 25 oC po 2, 4 i 7
Plamistoś
ćliś
ci Crassula multicava i możliwoś
ci chemicznej ochrony
211
70
2 dni (days)
4 dni (days)
6 dni (days)
60
50
40
2
Surface of mycelium (cm ) after days of incubation
Powierzchnia grzybni (cm2) po danich inkubacji
dniach inkubacji (rys. 1). Najlepsząpoż
ywkądla wzrostu Pestalotiopsis
guepinii okazał
a siępoż
ywka PDA i Malt-extract-agar. Nieco sł
abszy
wzrost obserwowano na poż
ywce LBA, a najwolniej przebiegałwzrost
liniowy grzybni na poż
ywce Czapka.
30
20
10
0
7
10
15
20
25
30
35
Temperatura °C – Temperature °C
Rysunek 1. Wpł
yw temperatury na wzrost [cm2] grzybni Pestalotiopsis guepinii
na poż
ywce agarowo-ziemniaczano-glukozowej (PDA-Merck) – Influence of
2
temperature on the mycelium [cm ] growth of Pestalotiopsis guepinii on potato
dextrose agar medium (PDA-Merck)
Stwierdzono, ż
e w odciętych zdrowych liś
ciach Crassula multicava
trzymanych na ś
wietle w pozycji naturalnej lub odwróconej nastę
pował
o
nagromadzanie sięantocyjanów o barwie czerwono-fioletowej, natomiast
w odcię
tych zainfekowanych liś
ciach przez Pestalotiopsis guepinii trzymanych w tych samych warunkach antocyjany nie tworzył
y sięw odległ
oś
ci okoł
o 4-8 mm od zainfekowanych plam (Saniewski i wsp. 2007).
W warunkach in vitro pochodne strobiluryny wykazał
y silnie
fungitoksyczny wpł
yw na wzrost liniowy grzybni Pestalotiopsis guepinii
(tab. 1). Azoksystrobina w stęż
eniu 2 μg/cm³ hamował
a wzrost grzybni
patogena w 99%, a w stęż
eniu 6 μg/cm³ wystą
pił
o cał
kowite zahamowanie
wzrostu grzybni. Krezoksym-metylu i chlorotalonil z dodatkiem cynku
212 Zeszyty Naukowe Instytutu Sadownictwa i Kwiaciarstwa im. Szczepana Pienią
ż
ka, tom 18
jako mikroelementu w stęż
eniu 10 μg·cm -³ ograniczałwzrost grzybni
odpowiednio w 98% i 80%. Należ
y jednak dodać
, ż
e stosowane wyż
sze
stęż
enia tych ś
rodków nie zahamował
y cał
kowicie wzrostu grzybni
patogena (tab. 1).
T abe l a 1
Wpł
yw pochodnych strobiluryny i preparatu Gwarant na wzrost [cm 2] grzybni in
vitro Pestalotiopsis guepinii – Influence of synthetic analogs of strobilurins and
Gwarant on the mycelium [cm 2] in vitro growth of Pestalotiopsis guepinii
2
Traktowanie
Treatment
Stęż
enie
Concentration
μg/cm³
Powierzchnia kolonii grzybni [cm ] po dniach
inkubacji
2
Surface of mycelium growth [cm ] after days
incubation
2
4
6
10
100
250
500
1000
3,4 b
0,3 a
0,2 a
0,2 a
0,0 a
0,0 a
20,6 d
4,0 c
4,4 c
0,9 b
0,5 ab
0,5 ab
47,8 e
9,5 d
9,5 d
2,0 c
1,0 bc
0,9 bc
Amistar 250 EC
Amistar 250 EC
Amistar 250 EC
Amistar 250 EC
Amistar 250 EC
2
6
10
50
100
0,0 a
0,0 a
0,0 a
0,0 a
0,0 a
0,0 a
0,0 a
0,0 a
0,0 a
0,0 a
0,5 b
0,2 a
0,0 a
0,0 a
0,0 a
Discus 500 WG
Discus 500 WG
Discus 500 WG
Discus 500 WG
Discus 500 WG
10
100
250
500
1000
0,0 a
0,0 a
0,0 a
0,0 a
0,0 a
0,3 a
0,3 a
0,2 a
0,1 a
0,1 a
0,8 bc
0,7 b
0,7 b
0,6 b
0,6 b
Kontrola – Control
Gwarant 500 SC
Gwarant 500 SC
Gwarant 500 SC
Gwarant 500 SC
Gwarant 500 SC
Objaś
nienie: ś
rednie w kolumnach oznaczone tąsamąliterąnie róż
niąsięistotnie przy
(5%); wielokrotny test t-Duncana; Explanation: means in columns followed by the same
letter do not differ at 5% level of significance; Duncan's multiple range test
Pochodne strobiluryny stosowane profilaktycznie silnie ograniczał
y
rozwój Pestalotiopsis guepinii na liś
ciach Crassula multicava
w porównaniu z liś
ć
mi kontrolnymi nieopryskiwanymi. Efekt ochronny
preparatu chlorotalonil z dodatkiem cynku byłnieco sł
abszy niżpochodne
strobiluryny, jednak równieżsilnie ograniczałrozwój choroby (tab. 2).
Preparaty zastosowane interwencyjnie do opryskania liś
ci z objawami
Plamistoś
ćliś
ci Crassula multicava i możliwoś
ci chemicznej ochrony
213
plamistoś
ci od 2 mm do 4 mm ograniczał
y rozwój choroby w okoł
o 50%
(tab. 3).
T abe l a 2
Wpł
yw pochodnych strobiluryny i preparatu Gwarant stosowanych profilaktycznie na rozwój Pestalotiopsis guepinii na liś
ciach Crassula multicava –
Influence of synthetic analogs of strobilurins and Gwarant preventively applied
on the development of Pestalotiopsis guepinii on Crassula multicava leaves
Traktowanie
Treatment
Stęż
enie
Concentration
[%]
Kontrola – Control
Gwarant 500 SC
Amistar 250 EC
Amistar 250 EC
Discus 500 WG
Discus 500 WG
0,2
0,05
0,1
0,03
0,06
Dł
ugoś
ćnekrozy po dniach inkubacji
Length of necrosis after days of incubation
[mm]
7
12
11,1 c
3,6 b
1,8 a
1,6 a
1,8 a
1,6 a
25,2 c
4,8 b
2,3 a
2,3 a
1,9 a
1,9 a
Objaś
nienie: Patrz tabela 1; Explanation see Table 1.
T abe l a 3
Wpł
yw pochodnych strobiluryny i preparatu Gwarant zastosowanych interwencyjnie na rozwój Pestalotiopsis guepinii na liś
ciach Crassula multicava –
Influence of synthetic analogs of strobilurins and Gwarant applied curatively on
the development of Pestalotiopsis guepinii on Crassula multicava leaves
Dł
ugoś
ćnekrozy po 2 Dł
ugoś
ćnekrozy po 7 dniach
dniach od inokulacji od opryskania liś
ci ś
rodkami
Stę
ż
enie
Traktowanie
liś
ci
ochrony
Concentration
Treatment
Length of necrosis after Length of necrosis after 7
[%]
2 days inculation leaves
days spraying leves
[mm]
[mm]
Kontrola – Control
4,2 a
28,4 b
Gwarant 500 SC
0,2
2,6 a
13,1 a
Amistar 250 EC
0,05
3,2 a
13,1 a
Amistar 250 EC
0,1
3,5 a
14,1 a
Discus 500 WG
0,03
2,0 a
17,1 a
Discus 500 WG
0,06
3,0 a
16,1 a
Objaś
nienie: Patrz tabela 1; Explanation: see Table 1
Wcześ
niejsze badania wykazał
y wysokąskutecznoś
ćfungicydów
strobilurynowych w zwalczaniu mię
dzy innymi rdzy chryzantemy
214 Zeszyty Naukowe Instytutu Sadownictwa i Kwiaciarstwa im. Szczepana Pienią
ż
ka, tom 18
Puccinia horiana (Wojdył
a 2007), rdzy wierzby Melampsora epitea
(Wojdył
a 2008a), mą
czniaka prawdziwego różSphaerotheca pannosa var.
rose (Wojdył
a 2008b) oraz czarnej plamistoś
ci różDiplocarpon rosae
(Wojdył
a 2009). Azoksystrobina równieżcał
kowicie chronił
a wyż
lin
przed poraż
eniem przez Puccinia antirrhini (Saniewska 2000)
i Ornithogalum umbellatum przed Puccinia liliacearum (Saniewska
i Jarecka 2005). W literaturze istnieje wiele informacji o wysokiej
skutecznoś
ci grzybobójczej fungicydów typu strobiluryny. Jest to grupa
zwią
zków wykazują
ca dobre dział
anie zapobiegawcze i wyniszczają
ce.
Poza bezpoś
rednim hamują
cym wpł
ywem strobiluryny na grzyby zwią
zki
te zmieniająrównowagęhormonalnąw roś
linach (Grossmann i wsp.
1999).
Fot. 1. Plamistoś
ćliś
ci Crassula multicava powodowana przez Pestalotiopsis
guepinii. – Leaf spotting causes by Pestalotiopsis guepinii on Crassula multicava
WNIOSKI
Istnieje możliwoś
ćstosowania pochodnych strobiluryny zarówno do
profilaktycznej, jak i interwencyjniej ochrony Crassula multicava przed
Pestalotiopsis guepinii.
LITERATURA
A r x J.A. von 1974. The genera of fungi sporulating in pure culture. wyd. II.
Cramer. Lehre, Vaduz, 315 pp.
Plamistoś
ćliś
ci Crassula multicava i możliwoś
ci chemicznej ochrony
215
B a r n e t t H.L. 1960. Illustrated genera of imperfect fungi. Burgess Publishing
Company, Minn.
G r o s s m a n n K., K w i a t k o w s k i J ., G a s p a r G. 1999. Regulation of
phytohormone levels. leaf senescence and transpiration by the strobilurin
kresoxim-methyl in wheat (Triticum aestivum). J. Plant Physiol., 154:
805-808.
S a n i e w s k a A. 2000. Oddział
ywanie pochodnych strobiluryny na Puccinia
antirrhini Diet. et Holw. Progress in Plant Protection/Postepy w Ochronie
Roś
lin, 40 (2): 664-666.
S a n i e w s k a A., J a r e c k a A. 2005. Pochodne strobiluryny w ograniczaniu
rozwoju Puccinia liliacearum Duby, patogena Ornithogalum umbellatum L.
Progress in Plant Protection/Postepy w Ochronie Roś
lin, 45 (2): 1058-1060.
S a n i e w s k i M., S a n i e w s k a A., U r b a n e k H. 2007. Inhibition of the
anthocyanins accumulation in detached leaves of Crassula multicava
Lam. around the infected spots caused by Pestalotia sp. Zesz. Probl.
Post. Nauk Rol., 524: 393-400.
S u t t o n B.C. 1980. The Coelomycetes. Fungi Imperfecti with picnidia acervuli
and stromata. IMI, Kew, 661 pp: 263-266.
Wojdył
a A.T. 2007. Wpł
yw zwią
zków strobilurynowych na rozwój Puccinia
horiana. Progress in Plant Protection/Postepy w Ochronie Roś
lin,47 (2):
366-370.
Wojdył
a A.T. 2008a. Wpł
yw zwią
zków strobilurynowych na rozwój
Melampsora epitea. Progress in Plant Protection/Postepy w Ochronie
Roś
lin, 48 (2): 548-551.
Wojdył
a A.T. 2008b. Wpł
yw zwią
zków strobilurynowych na wystę
powanie
mą
czniaka prawdziwego róż
y (Sphaerotheca pannosa var. rosae). Zesz.
Probl. Post. Nauk Rol. 529: 263-269.
Wojdył
a A.T. 2009. Wpł
yw zwią
zków strobilurynowych na rozwój
Diplocarpon rosae. Progress in Plant Protection/Postepy w Ochronie
Roś
lin, 49 (1): 301-304.