Monoclonal Rabbit Anti-Human AMACR Klon 13H4 Nr kat

Monoclonal Rabbit
Anti-Human AMACR
Klon 13H4
Nr kat. M3616
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Przeciwciała Monoclonal Rabbit Anti-Human AMACR, klon 13H4, są przeznaczone do stosowania w
immunohistochemii. Przeciwciała te są przydatne w identyfikacji gruczolakoraka gruczołu krokowego (1-9).
Interpretacja kliniczna wystąpienia lub braku barwienia musi być uzupełniona przez badania morfologiczne, z
wykorzystaniem odpowiednich prób kontrolnych i powinna być przeprowadzana przez doświadczonego patologa,
z uwzględnieniem historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych.
Synonimy antygenu
P504S, alpha methylacyl coenzyme A racemase (1, 2).
Podsumowanie
i wyjaśnienie
Monoklonalne królicze przeciwciała przeciwko AMACR (alpha methylacyl coenzyme A racemase) rozpoznają białko
złoŜone z 382 aminokwasów, zidentyfikowane z zastosowaniem biblioteki cDNA metodą subtrakcyjną, w połączeniu
z masowym badaniem w kierunku raka gruczołowego gruczołu krokowego przy uŜyciu mikromacierzy (1). Białko
AMACR, znane równieŜ jako P504S, jest enzymem uczestniczącym w biosyntezie kwasów Ŝółciowych i
β-oksydacji kwasów tłuszczowych o łańcuchach rozgałęzionych (10). Ekspresja AMACR występuje w komórkach
śródnabłonkowego raka gruczołu krokowego o duŜym stopniu złośliwości histologicznej (HGPIN) i raka
gruczołowego gruczołu krokowego, ale w mniejszych lub niewykrywalnych ilościach białko to obecne jest takŜe w
komórkach nabłonka gruczołowego prawidłowego gruczołu krokowego i łagodnych rozrostach tego gruczołu (1-9).
AMACR ulega ekspresji w normalnych komórkach nabłonka, innych niŜ gruczołu krokowego oraz rakach
wywodzących się spoza gruczołu krokowego (2, 11-23).
Patrz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące
części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z
zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości,
7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia metody.
Odczynnik
dostarczony
Monoklonalne przeciwciało królicze jest dostarczane w postaci płynnej jako nadsącz hodowli komórkowej
(zawierający płodową surowicę bydlęcą), dializowany wobec roztworu Tris/HCl o stęŜeniu 0,05 mol/l, pH 7,2 i
azydku sodu o stęŜeniu 0,015 mol/l. Produkt zawiera białko stabilizujące.
Klon: 13H4 (1-3).
StęŜenie króliczych lg [mg/l]: Patrz: informacja podana na etykiecie fiolki.
StęŜenie białek w róŜnych partiach moŜe się róŜnić bez wpływu na rozcieńczenie optymalne. W celu
zapewnienia jednolitości odczynów immunohistochemicznych wykonywanych przy uŜyciu róŜnych partii
produktu, miano kaŜdej partii jest porównywane i dostosowywane do partii referencyjnej.
Immunogen
Rekombinowane białko AMACR o pełnej długości (1).
Swoistość
Swoistość monoklonalnych przeciwciał króliczych przeciwko AMACR badano metodami immunocytochemicznymi i
przy uŜyciu analizy Western blot. Przeciwciała przeciwko AMACR wiązały swoiście utrwalane w formalinie
komórki HEK293 z nadekspresją AMACR, ale nie reagowały z komórkami transfekowanymi pustym plazmidem.
W testach Western blot lizatów z preparatów pierwotnego raka gruczołu krokowego, królicze przeciwciało
monoklonalne przeciwko AMACR zidentyfikowało białko o masie 54 kD, która odpowiada przewidywanej masie
cząsteczkowej AMACR (3).
Środki ostroŜności
1.
Do stosowania przez wyszkolony personel.
2.
Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek
sodu, zastosowany w produkcie w stęŜeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, moŜe
reagować z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie
wybuchowych azydków metali. Po usunięciu spłukać duŜą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się
azydku metalu w kanalizacji.
3.
Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych, naleŜy stosować
właściwe procedury postępowania.
(108085-003)
4.
W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą naleŜy nosić odpowiednie osobiste wyposaŜenie ochronne.
5.
Niewykorzystany roztwór utylizować zgodnie z lokalnymi, wojewódzkimi i krajowymi rozporządzeniami.
305835PL_002 p. 1/4
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2–8 °C. Nie stosowa ć po upływie terminu waŜności podanym na fiolce. Jeśli
odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane powyŜej, uŜytkownik musi zweryfikować takie
warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na niestabilność produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem
próbek pochodzących od pacjenta, naleŜy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. W wypadku nieoczekiwanego
wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się
problem z przeciwciałem, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako.
Przygotowanie próbek
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Skrawki parafinowe:
Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie.
W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny
wyschnąć.
Wymagane jest poddanie odparafinowanych skrawków tkankowych cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER).
Optymalne wyniki uzyskuje się po wstępnej obróbce tkanek metodą HIER przy uŜyciu roztworu Dako Target
Retrieval Solution, pH 9 (nr. katalogowe S2368/S2367).
Cieplne odmaskowanie antygenu (ang. Heat-induced epitope retrieval - HIER) polega na umieszczeniu
skrawków w ogrzanym uprzednio roztworze buforu i utrzymaniu temperatury w kąpieli wodnej (95-99 °C). Zaleca
się stosowanie protokołu ogrzewania HIER przez 20 minut w temperaturze 95–99 °C. Po zako ńczeniu
ogrzewania naleŜy odstawić pojemnik z buforem zawierającym preparaty do ostygnięcia, w temperaturze
pokojowej na 20 minut. Po zakończeniu HIER dokładnie przepłukać roztworem buforu lub wodą dejonizowaną. W
celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych zaleca się stosowanie szkiełek
Silanized Slides (nr kat. S3003).
Skrawki mroŜone i rozmazy komórkowe:
Opisywane przeciwciała są zalecane do stosowania na skrawkach utrwalonych w acetonie, skrawkach
mroŜonych lub utrwalonych rozmazach cytologicznych.
Procedura barwienia
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Rozcienczanie: Przeciwciała Monoclonal Rabbit Anti-Human AMACR, nr kat. M3616, mogą być uŜywane w
rozcieńczeniu 1:100 – 1:300 na poddanych wstępnej obróbce utrwalonych w formalinie skrawkach zatopionych w
parafinie, przy 30-minutowej inkubacji w temperaturze pokojowej. Zalecane jest rozcieńczanie przeciwciał w
odczynniku Dako Antibody Diluent (nr kat. S0809). Są to jednak wyłącznie wytyczne. Optymalne warunki mogą
się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału i sposobu jego przygotowania, i powinny być określone
indywidualnie w kaŜdym laboratorium. Zalecana kontrola ujemna to odczynnik Dako Negative Control, Rabbit
Immunoglobulin Fraction (Solid-Phase Absorbed) (nr kat. X0936) rozcieńczony do takiego samego stęŜenia
białek, co przeciwciało główne. O ile nie potwierdzono stabilności rozcieńczonych przeciwciał i kontroli ujemnej w
rzeczywistej procedurze wykonania odczynu, zaleca się rozcieńczenie tych odczynników bezpośrednio przed
uŜyciem. Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów, naleŜy wykonywać dodatnie i
ujemne próby kontrolne.
Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu.
Wizualizacja: Zaleca się stosowanie systemów Dako EnVision™+ System/HRP, Dual Link Rabbit/Mouse (nr kat.
K4061) lub Dako EnVision™+ System/HRP, Rabbit (nr. katalogowe K4002/K4003/K4010/K4011). Postępować
zgodnie z procedurą dostarczoną z systemem do wizualizacji.
Automatyzacja: Przeciwciała doskonale nadają się do wykonywania odczynów immunohistochemicznych w
systemach zautomatyzowanych, takich jak Dako Autostainer, Autostainer Plus oraz Autostainer Link.
Interpretacja
wybarwienia
Przeciwciała dają odczyn cytoplazmatyczny.
Charakterystyka
działania
Tkanki normalne:
Rodzaj tkanki (liczba testowanych
przypadków) (2-5,11-14)
Nadnercza (12)2
Pęcherz moczowy (7)2
Mózg (5)2
Gruczoły sutkowe (12)2
OkręŜnica (24)11,12
OkręŜnica, polip hiperplastyczny (28)12
Śluzówka macicy (17)2,11
Pęcherzyk Ŝółciowy (10)2
Serce (5)2
Nerki (12)2
Wątroba (31)2,13
Płuca (18)2,11
Węzły chłonne (7)2
Jajniki (14)2,11
Trzustka (15)2
Gruczoł krokowy, prawidłowy (34)2,11
Gruczoł krokowy, łagodne (156)3,4,5
Ślinianki (7)2
(108085-003)
Składniki komórkowe dające dodatni odczyn
0/12
0/7
0/5
0/12
20/24 Nabłonek powierzchni jelita grubego,
zogniskowany i w obrębie kanalików
1/28
0/17
10/10 Komórki nabłonka
0/5
12/12 Komórki nabłonka kanalików
18/31 Hepatocyty
12/18 Komórki nabłonka oskrzeli
0/7
0/14
0/15
0/34
11/156
0/7
305835PL_002 p. 2/4
Skóra (10)2,11
Jelito cienkie (18)2
Śledziona (12)2
śołądek (13)2
śółądek, nabłonek nienowotworowy (44)14
Jądra (5)2
Tarczyca (5)2
0/10
0/18
0/12
0/13
2/44
0/5
0/5
Tkanki patologiczne:
Przeciwciała przeciwko AMACR wykazują immunoreaktywność z większością przebadanych komórek raków
gruczołu krokowego (2-8,11).
Rodzaj tkanki (liczba testowanych przypadków) 2,11 -23
Nowotwór kory nadnerczy (20)2
Rak podstawnokomórkowy skóry (20)2
Rak przewodów Ŝółciowych (14)2
Rak gruczołowy sutka (315)2,11,15
Rakowiaki płuc i przewodu pokarmowego (10)2
Raki jelita grubego (233)11,12,16,17
OkręŜnica (35)11,16
Dobrze zróŜnicowane (58)12
Umiarkowanie zróŜnicowane (88)12
Słabo zróŜnicowane (30)12
Przerzutowy (22)17
Rak endometrioidalny (10)2
Guzy zarodkowe (14)2
Rak z komórek wątrobowych (72)2,13
Rak płuc (300)2,11,18
Rak (28)11
Rak gruczołowy (151)2,18
Rak z komórek płaskonabłonkowych (121)18
Czerniak (41)2,11
Rak neuroendokrynny przewodu pokarmowego, płuc i
wątroby (167)2,18
Rak gruczołowy jajnika (76)2,11,17
Rak gruczołowy trzustki (13)2
Międzybłoniak opłucnej (16)2
Rak gruczołowy gruczołu krokowego (640)2-8,11
Guzy nerek (105)19,20
Rak jasnokomórkowy (77)19,20
Rak z komórek chromofobowych (24)19,20
Onkocytoma (29)19,20
Rak z komórek Bellini/nabłonka dróg
moczowych (5)19
Rak z komórek śluzowych i
wrzecionowatych (5)19
Rak z komórek brodawkowatych (96)19,20
Mięsakowaty (15)20
Nowotwory ślinianek (28)2
Rak drobnokomórkowy płuc i skóry (15)2
Mięsak nabłonkowaty tkanki miękkiej (12)2
Mięsak maziówkowy tkanki miękkiej (6)2
Rak płaskonabłonkowy skóry i błon śluzowych (25)2
Rak gruczołowy Ŝołądka (413)2,14,21,22
Grasiczak (8)2
Guzy tarczycy (54)2
Rak niezróŜnicowany (27)2
Rak z komórek nabłonka dróg moczowych (50)2,20,23
Rak z komórek nabłonka dróg
moczowych (17)20
Rak z komórek nabłonka przejściowego,
pęcharza (29)2
Gruczolakorak jasnokomórkowy (4)23
(108085-003)
Liczba preparatów z nowotworów
dających odczyn dodatni
1/20
0/20
2/14
54/315
0/10
16/35
45/58
66/88
11/30
7/22
0/10
0/14
59/72
4/28
75/151
27/121
2/41
95/167
2/76
1/13
0/16
587/640
17/77
1/24
4/29
0/5
5/5
96/96
0/15
1/28
0/15
1/12
0/6
0/25
262/413
0/8
0/54
0/27
2/17
9/29
4/4
305835PL_002 p. 3/4
Piśmiennictwo
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
19.
20.
21.
22.
23.
Xu J, Stolk JA, Zhang X, Silva SJ, Houghton RL, Matsumura M, Vedvick TS, Leslie KB, Badaro R, Reed
SG. Identification of differentially expressed genes in human prostate cancer using subtraction and
microarray. Canc Res. 2000; 60:1677
Jiang Z, Fanger GR, Woda BA, Banner BF, Algate P, Dresser K, Xu J, Chu PG. Expression of α-methylacylCoA racemase (P504S) in various malignant neoplasms and normal tissues: A study of 761 cases. Human
Pathology. 2003; 34(8):792
Jiang Z, Woda BA, Rock KL, Xu Y, Savas L, Khan A, Pihan G, Cai F, Babcook JS, Rathanaswami P, Reed
SG, Xu J, Fanger GR. P504S: a new molecular marker for the detection of prostate carcinoma. Am J Surg
Pathol. 2001; 25(11):1397
Jiang Z, Wu C, Woda BA, Dresser K, Xu J, Fanger GR, Yang XJ. P504S/α-methylacyl-CoA racemase: a
useful marker for diagnosis of small foci of prostatic carcinoma on needle biopsy. Am J Surg Path. 2002;
26(9):1169
Yang XJ, Wu C, Woda BA, Dresser K, Tretiakova M, Fanger GR, Jiang Z. Expression of α-methylacyl-CoA
racemase (P504S) in atypical adenomatous hyperplasia of the prostate. Am J Surg Path. 2002; 26(7):921
Zhou M, Jiang Z, Epstein JI. Expression and diagnostic utility of alpha-methylacyl-CoA-racemase (P504S) in
foamy gland and pseudohyperplastic prostate cancer. Am J Surg Path. 2003; 27(6):772
Beach R, Gown AM, de Peralta-Venturina MN, Folpe AL, Yaziji H, Salles PG, Grignon DJ, Fanger GR, Amin
MG. P504S immunohistochemical detection in 405 prostatic specimens including 376 18-gauge needle
biopsies. Am J Surg Pathol. 2002; 26(12):158
Wu C-L, Yang XJ, Tretiakova M, Patton KT, Halpern EF, Woda BA, Young RH, Jiang Z. Analysis of αmethylacyl-coA racemase (P504S) expression in high-grade prostatic intraepithelial neoplasia. Hum Pathol
2004;35(8):1008-13
Jiang Z, Woda B, Wu C-L, Yang X. Discovery and clinical application of a novel prostate cancer marker. Am
J Clin Pathol 2004;122:275-89
Ferdinandusse S, Denis S, Ijst L, Dacremont G, Waterham HR, Wanders JA. Subcellular localization and
physiological role of α-methylacyl-CoA racemase. Journal of Lipid Research. 2000; 41:1890
Nassar A, Amin MB, Sexton DG, Cohen C. Utility of α-methylacyl coenzyme A racemase (P504S) antibody)
as a diagnostic immunohistochemical marker for cancer. Appl Immunohistochem Mol Morphol
2005;13(3):252-5
Jiang Z, Fanger GR, Banner BF, Woda BA, Algate P, Dresser K, Xu J, Reed SG, Rock KL, Chu PG. A
dietary enzyme: alpha-methylacyl-CoA racemase/P504S is overexpressed in colon carcinoma. Cancer
Detect Prev. 2003;27(6):422
Li W, Cagle PT, Botero RC, Liang JJ, Zhang Z, Tan D. Significance of overexpression of alpha methylacylcoenzyme A racemase in hepatocellular carcinoma. J Exp Clin Cancer Res 2008;27:21
Lee WA. α-methylacyl-CoA-racemase expression in adenocarcinoma, dysplasia and non-neoplastic
epithelium of the stomach. Oncology 2006;71:246-50
Witkiewicz AK, Varambally S, Shen R, Mehra R, Sabel MS, Ghosh D, Chinnaiyan AM, Rubin MA, Kleer CG.
α-methylacyl CoA racemase protein expression is associated with the degree of differentiation in breast
cancer using quantitative image analysis. Canc Epidemiol Biomarkers Prev 2005;14(6):1418-23
Osunkoya AO, Netto GJ, Epstein JI. Colorectal adenocarcinoma involving the prostate: report of 9 cases.
Human Pathol 2007;38:1836-41
Logani S, Oliva E, Arnell PM, Amin MB, Young RH. Use of novel immunohistochemical markers expressed
in colonic adenocarcinoma to distinguish primary ovarian tumors from metastatic colorectal carcinoma. Mod
Pathol 2005;18:19-25
Shilo K, Dracheva T, Mani H, Fukuoka J, Sesterhenn IA, Chu W-S, Shih JH, Travis WD, Franks TJ. αmethylacyl CoA racemase in pulmonary adenocarcinoma, squamous cell carcinoma, and neuroendocrine
tumors. Arch Pathol Lab Med 2007;131:1555-60
Molinié V, Balaton A, Rotman S, Mansouri D, de Pinieux I, Homsi T, Guillou L. Alpha-methyl CoA racemase
expression in renal cell carcinomas. Human Pathol 2006;37:698-703
Tretiakova MS, Sahoo S, Takahashi M, Turkyilmaz M, Vogelzang NJ, Lin F, Krausz T, Teh BT, Yang XJ.
Expression of alpha-methylacyl-coA racemase in papillary renal cell carcinoma. Am J Surg Pathol
2004;28(1):69-76
Truong CD, Li W, Feng W, Cagle P, Khoury T, Sadir A, Xie K, Yao J, Tan D. Alpha-methylacyl-CoA
racemase expression is upregulated in gastric adenocarcinoma: a study of 249 cases. Int J Clin Exp Path
2008;1:518-23
Cho EY, Kim K-M, Park CK, Kim JJ, Sohn TS, Kim DW. AMACR is highly expressed in gastric adenomas
and intestinal-type carcinomas. APMIS 2007;115:713-8
Sun K, Huan Y, Unger PD. Clear cell adenocarcinoma of urinary bladder and urethra: another urinary tract
lesion immunoreactive for P504S. Arch Pathol Lab Med 2008;132:1417-22
Wydanie 12/08
(108085-003)
305835PL_002 p. 4/4