Nr kat. IR060

FLEX
Monoclonal Rabbit
Anti-Human AMACR
Klon 13H4
Ready-to-Use
(Link)
Nr kat. IR060
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Przeciwciało FLEX Monoclonal Rabbit Anti-Human AMACR, klon 13H4, Ready-to-Use, (Link), jest przeznaczone
do stosowania w immunohistochemii w aparatach Autostainer Link. Przeciwciała te są przydatne w identyfikacji
gruczolakoraków gruczołu krokowego (1-9). Interpretacja kliniczna wystąpienia lub braku barwienia musi być
uzupełniona przez badania morfologiczne, z wykorzystaniem odpowiednich prób kontrolnych i powinna
być przeprowadzana przez doświadczonego patologa, z uwzględnieniem historii choroby pacjenta i innych
badań diagnostycznych.
Synonimy antygenu
Alpha methylacyl coenzyme A racemase, P504S (1, 2).
Podsumowanie
i wyjaśnienie
Monoklonalne królicze przeciwciała przeciwko AMACR (alpha methylacyl coenzyme A racemase) rozpoznają białko
złoŜone z 382 aminokwasów, zidentyfikowane z zastosowaniem biblioteki cDNA, metodą subtrakcyjną w połączeniu
z masowym badaniem w kierunku raka gruczołowego gruczołu krokowego przy uŜyciu mikromacierzy (1). Białko
AMACR, znane równieŜ jako P504S, jest enzymem uczestniczącym w biosyntezie kwasów Ŝółciowych i
β-oksydacji kwasów tłuszczowych o łańcuchach rozgałęzionych (10). Ekspresja AMACR występuje w komórkach
śródnabłonkowego raka gruczołu krokowego o duŜym stopniu złośliwości histologicznej (HGPIN) i raka
gruczołowego gruczołu krokowego, ale w mniejszych lub niewykrywalnych ilościach białko to obecne jest takŜe w
komórkach nabłonka gruczołowego prawidłowego gruczołu krokowego i łagodnych rozrostach tego gruczołu (1-9).
AMACR ulega ekspresji w normalnych komórkach nabłonka, innych niŜ gruczołu krokowego oraz rakach
wywodzących się spoza gruczołu krokowego (2, 11-23).
Patrz dokument
Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub
następujące części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały
niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie odczynu,
6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia metody.
Odczynnik
dostarczony
Gotowe do uŜycia królicze przeciwciała monoklonalne są dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym
białko stabilizujące i roztwór NaN3 o stęŜeniu 0,015 mol/l.
Klon: 13H4 (1-3)
Immunogen
Rekombinowane białko AMACR o pełnej długości (1).
Swoistość
Swoistość
monoklonalnych
przeciwciał
króliczych
przeciwko
AMACR
badano
metodami
immunocytochemicznymi i przy uŜyciu analizy Western blot. Przeciwciała przeciwko AMACR wiązały swoiście
utrwalane w formalinie komórki HEK293 z nadekspresją AMACR, ale nie reagowały z komórkami
transfekowanymi pustym plazmidem. W testach Western blot lizatów z preparatów pierwotnego raka gruczołu
krokowego, przeciwciało znakuje białko o masie 54 kD, która odpowiada przewidywanej masie cząsteczkowej
AMACR (3).
Środki ostroŜności
1.
Do stosowania przez wyszkolony personel.
2.
Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek
sodu, zastosowany w produkcie w stęŜeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, moŜe
reagować z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie
wybuchowych azydków metali. Po usunięciu spłukać duŜą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się
azydku metalu w kanalizacji.
3.
Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych, naleŜy stosować
właściwe procedury postępowania.
4.
W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą naleŜy nosić odpowiednie osobiste wyposaŜenie ochronne.
5.
Niewykorzystany roztwór utylizować zgodnie z lokalnymi, wojewódzkimi i krajowymi rozporządzeniami.
(115538-002)
307135PL_002 p. 1/4
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2–8 °C. Nie stosowa ć po upływie terminu waŜności podanym na fiolce. Jeśli
odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane powyŜej, uŜytkownik musi zweryfikować takie
warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na niestabilność produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem
próbek pochodzących od pacjenta, naleŜy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. W wypadku nieoczekiwanego
wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się
problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy Dako.
Przygotowanie próbek
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie.
Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o wymiarach około 4 µm.
Wymagane jest poddanie cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER) z uŜyciem Dako PT Link (nr kat.
PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja uŜytkownika aparatu PT Link. Optymalne wyniki
uzyskuje się w wyniku wstępnej obróbki tkanek przy uŜyciu roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution,
High pH (10x) (nr kat. K8000/K8004).
Skrawki zatapiane w parafinie: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecana jest procedura 3 w 1, z uŜyciem odczynnika Dako PT Link. Postępować według procedury
wstępnej obróbki tkanek, zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH
(10x) (nr kat. K8000/K8004). Uwaga: Po przeprowadzeniu barwienia, skrawki muszą być odwodnione,
oczyszczone i zakryte za pomocą środka do trwałego zatapiania.
Odparafinowane skrawki: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecane jest uŜycie odczynnika Dako PT Link i przeprowadzenie procedury opisane dla skrawków
parafinowych. Po zakończeniu barwienia szkiełka naleŜy zatopić w wodnym lub trwałym środku do zatapiania.
W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny
wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych, zaleca się stosowanie
szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020).
Procedura barwienia
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Zalecanym system wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH (Link) (nr kat. K8000). W systemie Autostainer
Link wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji. Zalecana objętość uŜytego odczynika to 1 x 200
µl lub 2 x 150 µl na preparat. Szczegółowe informacje dotyczące wkładania szkiełek mikroskopowych i
odczynników przedstawiono w Instrukcji uŜytkownika aparatu Autostainer Link. Jeśli protokoły nie są dostępne w
uŜywanym systemie Autostainer, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako.
Wszystkie procedury inkubacji naleŜy równieŜ przeprowadzać w temperaturze pokojowej.
Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału i sposobów jego przygotowania i
powinny być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. JeŜeli patolog oceniający preparat Ŝyczy sobie
wybarwienia o innym natęŜeniu, czasy inkubacji oraz uŜycie szablonów wizualizacji EnVision FLEX/EnVision
FLEX+ mogą zostać zmienione. W celu uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu,
naleŜy skontaktować się z działem obsługi/obsługą techniczną firmy Dako. NaleŜy upewnić się, Ŝe działanie
zmodyfikowanego protokołu jest prawidłowe — w tym celu naleŜy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w
części „Charakterystyka wydajnościowa.”
Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną za pomocą EnVision FLEX Hematoxylin (Link) (nr kat.
K8008). Zaleca się stosowanie niewodnego, trwałego środka do zatapiania.
Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować komórki nabłonka
gruczołu krokowego, natomiast we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać
odczyn reakcji taki, jak opisany dla tej tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecana kontrola
ujemna to FLEX Negative Control, Rabbit (Link (nr kat. IR600).
Interpretacja
wybarwienia
Charakterystyka
działania
Przeciwciała dają odczyn cytoplazmatyczny.
Tkanki normalne:
Rodzaj tkanki (liczba testowanych
przypadków) (2-5, 11-14)
Nadnercza (12)2
Pęcherz moczowy (7)2
Mózg (5)2
Gruczoły sutkowe (12)2
OkręŜnica (24)11,12
OkręŜnica, polip hiperplastyczny (28)12
Śluzówka macicy (17)2,11
Pęcherzyk Ŝółciowy (10)2
Serce (5)2
Nerki (12)2
Wątroba (31)2,13
Płuca (18)2,11
Węzły chłonne (7)2
Jajniki (14)2,11
Trzustka (15)2
Gruczoł krokowy, prawidłowy (34)2,11
Gruczoł krokowy, łagodne (156)3,4,5
(115538-002)
Składniki komórkowe dające dodatni odczyn
0/12
0/7
0/5
0/12
20/24 Nabłonek powierzchni jelita grubego,
zogniskowany i w obrębie kanalików
1/28
0/17
10/10 Komórki nabłonka
0/5
12/12 Komórki nabłonka kanalików
18/31 Hepatocyty
12/18 Komórki nabłonka oskrzeli
0/7
0/14
0/15
0/34
11/156
307135PL_002 p. 2/4
Ślinianki (7)2
Skóra (10)2,11
Jelito cienkie (18)2
Śledziona (12)2
śołądek (13)2
śółądek, nabłonek nienowotworowy (44)14
Jądra (5)2
Tarczyca (5)2
0/7
0/10
0/18
0/12
0/13
2/44
0/5
0/5
Tkanki patologiczne: Przeciwciała przeciwko AMACR wykazują immunoreaktywność z większością
przebadanych komórek raków gruczołu krokowego (2-8, 11).
Rodzaj tkanki
(liczba testowanych przypadków) (2, 11-23)
Nowotwór kory nadnerczy (20)2
Rak podstawnokomórkowy skóry (20)2
Rak przewodów Ŝółciowych (14)2
Rak gruczołowy sutka (315)2,11,15
Rakowiaki płuc i przewodu pokarmowego (10)2
Raki jelita grubego (233)11,12,16,17
OkręŜnica (35)11,16
Dobrze zróŜnicowane (58)12
Umiarkowanie zróŜnicowane (88)12
Słabo zróŜnicowane (30)12
Przerzutowy (22)17
Rak endometrioidalny (10)2
Guzy zarodkowe (14)2
Rak z komórek wątrobowych (72)2,13
Rak płuc (300)2,11,18
Rak (28)11
Rak gruczołowy (151)2,18
Rak z komórek płaskonabłonkowych (121)18
Czerniak (41)2,11
Rak neuroendokrynny przewodu pokarmowego, płuc i
wątroby (167)2,18
Rak gruczołowy jajnika (76)2,11,17
Rak gruczołowy trzustki (13)2
Międzybłoniak opłucnej (16)2
Rak gruczołowy gruczołu krokowego (640)2-8,11
Guzy nerek (105)19,20
Rak jasnokomórkowy (77)19,20
Rak z komórek chromofobowych (24)19,20
Onkocytoma (29)19,20
Rak z komórek Bellini/nabłonka dróg
moczowych (5)19
Rak z komórek śluzowych i
wrzecionowatych (5)19
Rak z komórek brodawkowatych (96)19,20
Mięsakowaty (15)20
Nowotwory ślinianek (28)2
Rak drobnokomórkowy płuc i skóry (15)2
Mięsak nabłonkowaty tkanki miękkiej (12)2
Mięsak maziówkowy tkanki miękkiej (6)2
Rak płaskonabłonkowy skóry i błon śluzowych (25)2
Rak gruczołowy Ŝołądka (413)2,14,21,22
Rak niezróŜnicowany (27)2
Grasiczak (8)2
Guzy tarczycy (54)2
Rak z komórek nabłonka dróg moczowych (50)2,20,23
Rak z komórek nabłonka dróg
moczowych (17)20
Rak z komórek nabłonka przejściowego,
pęcharza (29)2
Gruczolakorak jasnokomórkowy (4)23
(115538-002)
Liczba preparatów z nowotworów
dających odczyn dodatni
1/20
0/20
2/14
54/315
0/10
16/35
45/58
66/88
11/30
7/22
0/10
0/14
59/72
4/28
75/151
27/121
2/41
95/167
2/76
1/13
0/16
587/640
17/77
1/24
4/29
0/5
5/5
96/96
0/15
1/28
0/15
1/12
0/6
0/25
262/413
0/27
0/8
0/54
2/17
9/29
4/4
307135PL_002 p. 3/4
Piśmiennictwo
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
19.
20.
21.
22.
23.
Xu J, Stolk JA, Zhang X, Silva SJ, Houghton RL, Matsumura M, Vedvick TS, Leslie KB, Badaro R, Reed
SG. Identification of differentially expressed genes in human prostate cancer using subtraction and
microarray. Canc Res. 2000; 60:1677
Jiang Z, Fanger GR, Woda BA, Banner BF, Algate P, Dresser K, Xu J, Chu PG. Expression of α-methylacylCoA racemase (P504S) in various malignant neoplasms and normal tissues: A study of 761 cases. Human
Pathology. 2003; 34(8):792
Jiang Z, Woda BA, Rock KL, Xu Y, Savas L, Khan A, Pihan G, Cai F, Babcook JS, Rathanaswami P, Reed
SG, Xu J, Fanger GR. P504S: a new molecular marker for the detection of prostate carcinoma. Am J Surg
Pathol. 2001; 25(11):1397
Jiang Z, Wu C, Woda BA, Dresser K, Xu J, Fanger GR, Yang XJ. P504S/α-methylacyl-CoA racemase:
a useful marker for diagnosis of small foci of prostatic carcinoma on needle biopsy. Am J Surg Path. 2002;
26(9):1169
Yang XJ, Wu C, Woda BA, Dresser K, Tretiakova M, Fanger GR, Jiang Z. Expression of α-methylacyl-CoA
racemase (P504S) in atypical adenomatous hyperplasia of the prostate. Am J Surg Path. 2002; 26(7):921
Zhou M, Jiang Z, Epstein JI. Expression and diagnostic utility of alpha-methylacyl-CoA-racemase (P504S) in
foamy gland and pseudohyperplastic prostate cancer. Am J Surg Path. 2003; 27(6):772
Beach R, Gown AM, de Peralta-Venturina MN, Folpe AL, Yaziji H, Salles PG, Grignon DJ, Fanger GR, Amin
MG. P504S immunohistochemical detection in 405 prostatic specimens including 376 18-gauge needle
biopsies. Am J Surg Pathol. 2002; 26(12):158
Wu C-L, Yang XJ, Tretiakova M, Patton KT, Halpern EF, Woda BA, Young RH, Jiang Z. Analysis of
α-methylacyl-coA racemase (P504S) expression in high-grade prostatic intraepithelial neoplasia. Hum
Pathol 2004;35(8):1008-13
Jiang Z, Woda B, Wu C-L, Yang X. Discovery and clinical application of a novel prostate cancer marker. Am
J Clin Pathol 2004;122:275-89
Ferdinandusse S, Denis S, Ijst L, Dacremont G, Waterham HR, Wanders JA. Subcellular localization and
physiological role of α-methylacyl-CoA racemase. Journal of Lipid Research. 2000; 41:1890
Nassar A, Amin MB, Sexton DG, Cohen C. Utility of α-methylacyl coenzyme A racemase (P504S) antibody)
as a diagnostic immunohistochemical marker for cancer. Appl Immunohistochem Mol Morphol
2005;13(3):252-5
Jiang Z, Fanger GR, Banner BF, Woda BA, Algate P, Dresser K, Xu J, Reed SG, Rock KL, Chu PG.
A dietary enzyme: alpha-methylacyl-CoA racemase/P504S is overexpressed in colon carcinoma. Cancer
Detect Prev. 2003;27(6):422
Li W, Cagle PT, Botero RC, Liang JJ, Zhang Z, Tan D. Significance of overexpression of alpha methylacylcoenzyme A racemase in hepatocellular carcinoma. J Exp Clin Cancer Res 2008;27:21
Lee WA. α-methylacyl-CoA-racemase expression in adenocarcinoma, dysplasia and non-neoplastic
epithelium of the stomach. Oncology 2006;71:246-50
Witkiewicz AK, Varambally S, Shen R, Mehra R, Sabel MS, Ghosh D, Chinnaiyan AM, Rubin MA, Kleer CG.
α-methylacyl CoA racemase protein expression is associated with the degree of differentiation in breast
cancer using quantitative image analysis. Canc Epidemiol Biomarkers Prev 2005;14(6):1418-23
Osunkoya AO, Netto GJ, Epstein JI. Colorectal adenocarcinoma involving the prostate: report of 9 cases.
Human Pathol 2007;38:1836-41
Logani S, Oliva E, Arnell PM, Amin MB, Young RH. Use of novel immunohistochemical markers expressed
in colonic adenocarcinoma to distinguish primary ovarian tumors from metastatic colorectal carcinoma. Mod
Pathol 2005;18:19-25
Shilo K, Dracheva T, Mani H, Fukuoka J, Sesterhenn IA, Chu W-S, Shih JH, Travis WD, Franks TJ.
α-methylacyl CoA racemase in pulmonary adenocarcinoma, squamous cell carcinoma, and neuroendocrine
tumors. Arch Pathol Lab Med 2007;131:1555-60
Molinié V, Balaton A, Rotman S, Mansouri D, de Pinieux I, Homsi T, Guillou L. Alpha-methyl CoA racemase
expression in renal cell carcinomas. Human Pathol 2006;37:698-703
Tretiakova MS, Sahoo S, Takahashi M, Turkyilmaz M, Vogelzang NJ, Lin F, Krausz T, Teh BT, Yang XJ.
Expression of alpha-methylacyl-coA racemase in papillary renal cell carcinoma. Am J Surg Pathol
2004;28(1):69-76
Truong CD, Li W, Feng W, Cagle P, Khoury T, Sadir A, Xie K, Yao J, Tan D. Alpha-methylacyl-CoA
racemase expression is upregulated in gastric adenocarcinoma: a study of 249 cases. Int J Clin Exp Path
2008;1:518-23
Cho EY, Kim K-M, Park CK, Kim JJ, Sohn TS, Kim DW. AMACR is highly expressed in gastric adenomas
and intestinal-type carcinomas. APMIS 2007;115:713-8
Sun K, Huan Y, Unger PD. Clear cell adenocarcinoma of urinary bladder and urethra: another urinary tract
lesion immunoreactive for P504S. Arch Pathol Lab Med 2008;132:1417-22
Wydanie 12/08
(115538-002)
307135PL_002 p. 4/4