Rapid CARB Screen Kit 98021

Instrukcja użytkowania testu Rapid CARB Screen Kit
PRZEGLĄD:
DATA WYDANIA:
JĘZYK:
MK
06.2014
Polski
WYŁĄCZNIE DO STOSOWANIA W DIAGNOSTYCE IN VITRO
GRUPA PRODUKTÓW:
Zestawy do wykrywania mechanizmów oporności.
PRODUCENT:
ROSCO Diagnostica
Denmark.
PRZEZNACZENIE:
Tabletki stosowane są do szybkiego potwierdzania in vitro zdolności bakterii do
produkcji karbapenemaz. Metoda ta zalecana jest dla Enterobacteriaceae oraz
Pseudomonas aeruginosa.
GRUPA ODBIORCÓW:
Wyłącznie do użytku przez profesjonalnie przeszkolony personel.
A/S,
Taastrupgaardsvej
30,
DK-2630
Taastrup,
ZASADA DZIAŁANIA:
Bakterie potencjalnie produkujące karbapenemazy są obecnie wykrywane
głównie dzięki badaniu antybiotykooporności na leki z grupy karbapenemów
(Imipenem, Meropenem i Ertapenem). Zredukowane strefy zahamowania
wzrostu wokół krążków z tymi karbapenemami wskazują na produkcję
karbapenemaz. Szybka metoda opiera się na identyfikacji hydrolizy pierścienia
karbapenemu w obecności indykatora. Podążając za tą zasadą ROSCO
stworzyło nowy DIATAB; Imipenem + Indicator (CARB). Badanie jest
wykonywane szybko, a odczytu wyników można dokonać w czasie od 30 do 60
minut od momentu rozpoczęcia reakcji. Tak więc, korzystając z tego zestawu
w rutynowych badaniach wykrywania bakterii produkujących karbapenemazy,
można oszczędzić czas i nakład pracy w laboratorium. Główną ideą jest pomóc
laboratoriom w wykonaniu ich własnych badań przesiewowych w kierunku
karbapenemaz.
SZCZEGÓŁOWE INSTRUKCJE:
Szczegółowa instrukcja użytkowania tabletek DIATABS firmy ROSCO powinna
być dostępna w każdym laboratorium pracującym z produktami do diagnostyki
ROSCO.
Najnowsze wydanie instrukcji użytkowania można bezpłatnie pobrać
u lokalnego dystrybutora, ze strony internetowej firmy ROSCO (www.rosco.dk)
lub bezpośrednio z ROSCO Diagnostica A/S:
E-mail: [email protected]
Fax:
+ 45 43 52 73 74
ZAWARTOŚĆ ZESTAWU:
2 fiolki z tabletkami 6 mm; Imipenem + Indicator (CARB), o formule
zapewniającej maksymalną stabilność. Każda fiolka zawiera 25 tabletek, co
w rezultacie pozwala na wykonanie 50 testów. Jedna fiolka z tabletkami 6 mm:
Diatabs CARB Kontrola Negatywna, 50 tabletek.
PRZECHOWYWANIE/POSTĘPOWANIE:
Przechowywać w temperaturze 2-8OC w dostarczonym pudełku do daty
ważności podanej na etykiecie. Przed użyciem należy przez 30-60 minut
pozostawić tabletki w temperaturze pokojowej. Podana data ważności odnosi
się tylko do fiolek przechowywanych w odpowiedniej temperaturze. Trzymać
fiolki z dala od źródła światła i dużej wilgoci.
1
ŚRODKI OSTROŻNOŚCI:
Tylko do diagnostyki in vitro. Podczas pracy z materiałem potencjalnie
zakaźnym należy podjąć odpowiednie środki ostrożności oraz zachować
techniki pracy aseptycznej. Może być używany tylko przez odpowiednio
przeszkolony i wykwalifikowany personel laboratoryjny. Przed wyrzuceniem
należy wysterylizować wszystkie odpady zakaźne. Patrz Karta Charakterystyki.
MATERIAŁY WYMAGANE, ALE NIE ZAPEWNIONE:
Bufor B-PER II, Bacterial Protein Extraction Reagent.
Standardowe wyposażenie mikrobiologiczne – ezy, podłoża
cieplarka itd., oraz odczynniki biochemiczne.
bakteriologiczne,
PROCEDURA:
Zawsze używać świeżych izolatów. W przeciwnym wypadku posiać/inkubować
izolat 2 razy przed badaniem.
Kolonie powinny być posiane na podłożu: Mueller-Hinton Agar, Blood Agar,
TSA.
Nie używać kolonii z podłoży selektywnych (Drigalskiego, MacConkey itp.).
Dodać inokulum badanego szczepu (odzyskanego z antybiogramu) do 100 µl
buforu lizującego Tris-HCl 20 mmol/l (B-PER II; Bacterial Protein Extraction
Reagent, Thermo Scientific). Można również użyć standardowego
zbuforowanego reagentu Bug Buster Tris o pH 7,5. Zawiesina powinna mieć
gęstość minimum 4 w skali McFarlanda.
Wymieszać dokładnie zawiesinę przez 1 minutę i pozostawić w temperaturze
pokojowej na 30 minut.
Dodać 50 µl zawiesiny bakterii do probówki z 100 µl soli fizjologicznej, a
następnie 1 tabletkę Imipenem + Indicator (CARB) i zamknąć probówkę.
Wymieszać przez 1-2 sekundy do całkowitego rozpadu tabletki.
Inkubować badaną probówkę w temperaturze 35-37OC przez 30 minut,
1 godzinę, 2 godziny.
Ten sam schemat postępowania powtórzyć dla Diatabs Kontroli Negatywnej
CARB.
Hodowla krwi:
Pobrać 5 ml hodowli krwi (pozytywna dla bakterii Gram(-)) i odwirować (3 min.;
1500 g). Odrzucić osad (czerwone krwinki). Odzyskany supernatant odwirować
(15 min.; 4000 g) w celu oddzielenia bakterii.
Zawiesić osad z bakterii w 150 µl Buforu lizującego Tris-HCl i postępować
zgodnie z opisaną wcześniej procedurą.
Próbki moczu:
Pobrać 10 ml moczu (pozytywnego dlabakterii Gram (-)) i odwirować. Zawiesić
osad z bakterii w 150 µl Buforu lizującego Tris-HCl i postępować zgodnie
z opisaną wcześniej procedurą.
INTERPRETACJA WYNIKÓW:
Zmiana koloru z czerwonej na żółtą oznacza reakcję pozytywną, wskazującą
na fakt, że badana bakteria wytwarza karbapenemazy.
Jeśli reakcja jest pozytywna po 30 minutach lub 1 godzinie nie jest konieczne
dalsze inkubowanie próbki. Próbka nie może być inkubowana dłużej niż
2 godziny, ponieważ może dać wynik fałszywie dodatni.
W niektórych przypadkach po inkubacji uzyskuje się kolor pomarańczowy lub
żółtawy. Należy powtórzyć badanie używając większego inokulum bakterii.
Jeśli Kontrola Negatywna CARB zabarwi się na kolor żółtawy, wyniki uznać
jako niejednoznaczne, niezależnie od wyniku uzyskanego dla próby testowej
Imipenem + Indicator (CARB).
Uwaga: Niektóre Enterobacteriaceae produkujące OXA-48 (lub podobne, dla
których MIC dla Imipenemu ≤ 0,5 µg/ml) mogą dawać reakcję ujemną dla
Rapid CARB Screen Kit.
2
Szczepy podejrzane o produkcję karbapenemaz OXA-48 wykazują wysoką
oporność na temocylinę (NeoSensitabs Temocillin, strefa < 12 mm).
KONTROLA JAKOŚCI:
DIATABS
Imipenem + Indicator (CARB)
Pozytywna
Klebsiella pneumoniae BAA 1705
Negatywna
Escherichia coli ATCC 25922
LITERATURA:
1. Nordmann P. et al. Rapid detection of carbapenemase producing Enterobacteriaceae. Emerg.
Infect. Dis. 18, 1503-1507, 2012.
2. Nordmann P. et al. Rapid detection of carbapenemase production in Pseudomonas. Presentation
CI-078, ICAAC, 2012.
3. Tijet N. et al.: „ Evaluation of the Carba NP. Test for rapid detection of carbapenemase-producing
Enterobacteriaceae and Ps aeruginosa.” Antimicr Ag. Chemother 57, 4578-4580, 2013.
Dystrybutor:
3