Zestaw odczynnikowy do oznaczania aktywności dehydrogenazy

LDH
Zestaw odczynnikowy do oznaczania aktywności dehydrogenazy mleczanowej
Tylko do diagnostyki in vitro
Nr kat. 5019.1
3 x 20 ml
(Rl: 3 x 16 ml; R2: 1 x 12 ml)
ZASTOSOWANIE
Zestaw służy do oznaczania aktywności dehydrogenazy mleczanowej w
surowicy krwi.
ZASADA METODY
Metoda oparta na zaleceniach Niemieckiego Towarzystwa Chemii
Klinicznej (DGKC).
LDH
pirogronian + NADH + H+ ↔ mleczan + NAD+
LDH redukuje pirogronian w obecności NADH, w wyniku czego
powstaje mleczan i NAD. Szybkość zmian absorbancji, mierzona przy
długości fali 340 nm, jest proporcjonalna do aktywności dehydrogenazy
mleczanowej.
MATERIAŁ DO BADAŃ
Surowica lub osocze pobrane zgodnie ze standardowymi procedurami.
Nie stosować próbek ze śladami hemolizy.
Jako antykoagulant należy stosować heparynę.
Próbki można przechowywać do 24 godzin w temp. 2-8°C lub do 6
godzin w temp. pokojowej.
WARTOŚCI PRAWIDŁOWE
25°C
37°C
Dorośli
120-240 U/l
230-480 U/l
(2,0-4,0 µkat/l)
(3,8-8,0 µkat/l)
Podane wartości należy traktować jako orientacyjne. Zaleca się, aby
każde laboratorium określiło własne zakresy wartości prawidłowych.
SKŁAD ODCZYNNIKÓW
R1
Bufor fosforanowy pH 7,35
Pirogronian
Azydek sodu
R2
Bufor węglanowy pH 9,8
NADH
Azydek sodu
Niereaktywne detergenty i stabilizatory
62,5 mmol/l
0,94 mmol/l
< 13,9 mmol/l
7,2 mmol/l
1,1 mmol/l
< 13,9 mmol/l
PRZYGOTOWANIE ODCZYNNIKA ROBOCZEGO
Zmieszać odczynniki R1 i R2 w stosunku 4 + 1. Odczynnik roboczy jest
stabilny przez 5 dni w temp. 2-8°C lub 1 dzień w temp. 15-25°C.
PRZECHOWYWANIE ODCZYNNIKÓW
Przechowywać w temp. 2-8°C w oryginalnych, zamkniętych
opakowaniach. Chronić przed kontaminacją i bezpośrednim działaniem
światła. Nie zamrażać.
Po otwarciu odczynniki prawidłowo przechowywane i chronione przed
zanieczyszczeniem są stabilne do daty ważności podanej na
opakowaniu.
PARAMETRY UŻYTKOWE
Limit detekcji: 36,26 U/l (0,60 µkat/l)
Czułość: 0,06 ∆mA x l / U x min. (3,74 ∆mA x l / µkat x min.)
Powtarzalność (w serii oznaczeń):
poziom
I
II
20
20
n
308,3
530,6
średnia (U/l)
5,14
8,84
średnia (µkat/l)
< 3,50 %
< 3,00 %
% CV
Odtwarzalność (między seriami oznaczeń):
I
II
poziom
20
20
n
302,7
515,4
średnia (U/l)
5,04
8,59
średnia (µkat/l)
< 6,00 %
<4,50 %
% CV
KONTROLA POPRAWNOŚCI DZIAŁANIA
Do kontroli jakości oznaczeń stosować surowice kontrolne z
wartościami LDH zmetrykowanymi dla metody DGKC. Nie stosować
odczynników, jeżeli absorbancja odczynnika roboczego mierzona wobec
wody przy długości fali 340 nm jest niższa niż 0,900.
DODATKOWE MATERIAŁY I WYPOSAŻENIE
- Fotometr lub analizator automatyczny z termostatowanym gniazdem
pomiarowym umożliwiający pomiar absorbancji przy długości fali 340
nm.
- Standardowe wyposażenie laboratorium diagnostycznego.
WYKONANIE OZNACZENIA
Do kuwety napipetować:
Odczynnik roboczy:
1000 µl
Doprowadzić do temperatury oznaczenia (37°C lub 25°C), następnie
dodać:
Próbka:
10 µl (37°C) lub 20 µl (25°C)
Dokładnie wymieszać; po 1 min. inkubacji w temperaturze oznaczenia
odczytać absorbancję wobec powietrza lub wody przy dł. fali 340 nm.
Powtarzać odczyty absorbancji po dokładnie 1, 2 i 3 minutach.
Wyznaczyć średnią zmianę absorbancji na minutę (∆A/min.).
OBLICZENIA
Obliczenia prowadzone są w oparciu o następujący wzór:
Vt x 105
aktywność LDH [U/l] = ---------------- x ∆A/min.
ε x l x Vs
Vt - całkowita objętość mieszaniny reakcyjnej = 1,02 (1,01) ml
ε - molowy współczynnik absorbancji NADH przy długości fali 340 nm
= 6,3 x 102 m2/mol
l - długość drogi światła = 1 cm
Vs - objętość próbki = 0,02 (0,01) ml
(25°C)
aktywność LDH [U/l] = 8095 x AA/min.
aktywność LDH [µkat/1] = 134,9 x AA/min
(37°C)
aktywność LDH [U/l] = 16032 x AA/min.
aktywność LDH [µkat/1] = 267,2 x AA/min
Liniowość: 2000 U/l (33,3 µkat/l). Dla wyższych aktywności próbkę
należy rozcieńczyć 0,9 % roztworem NaCl w stosunku 1+1; wynik
oznaczenia pomnożyć przez 2.
19-12-2007
INFORMACJE DODATKOWE
1. Odczynniki zawierają azydek sodu. Przy pracy z odczynnikami
stosować środki ostrożności typowe dla rutynowych prac
laboratoryjnych.
2. Odpady utylizować zgodnie z obowiązującymi przepisami – przez
termiczne przekształcanie lub odpowiednimi metodami obróbki
fizyczno-chemicznej.
3. Aplikacje do analizatorów automatycznych dostarczamy na
życzenie.
REFERENCJE
1. Smith A. F.: The effect of temperature on lactate and
2-hydroxybu-tyrate dehydrogenase assay. Clin. Chim. Acta, 35,
498-501 (1971).
2. McQueen M. J., Garland I. W. C., Morgan H. G.: Effects of
tempe-rature and substrate concentration on the LDH/a-HBD ratio in
heart and liver disease. Clin. Chim. Acta, 43, 397-403 (1973).
3. Recommendations of the German Society for Clinical Chemistry. Z.
Klin. Chem. Biochem., 10, 281-291 (1972).
4. Young D. S.: Effects of drugs on clinical laboratory tests, AACC
Press, 4th ed. (1995).
STOSOWANE SYMBOLE GRAFICZNE - OBJAŚNIENIA:
CONT.
zawartość
numer katalogowy
przed użyciem zapoznać się z instrukcją
wyrób do diagnostyki in vitro
temperatura przechowywania
producent
numer serii
data ważności
19-12-2007