CONFIRM anti-S100 (Polyclonal) Primary Antibody

DOSTARCZANY ODCZYNNIK
CONFIRM anti-S100 (Polyclonal) Primary Antibody
760-2523
05267072001
50
PRZEZNACZENIE
CONFIRM anti-S100 (Polyclonal)
Primary Antibody firmy Ventana
Medical Systems, Inc. (Ventana)
zawiera surowicę przeciwciała
króliczego skierowaną przeciwko
epitopowi występującemu
w białku S100 i może wspomagać
identyfikację komórek
o prawidłowej i nieprawidłowej
linii neuronalnej
i neuroendokrynologicznej oraz
działać pomocniczo w
diagnozowaniu guzów
Rysunek 1. Przeciwciało CONFIRM anti-S100
anaplastycznych. Przeciwciała te
(Polyclonal) Primary wykazujące jądrowy
są przeznaczone do jakościowego
i cytoplazmatyczny schemat barwienia w
barwienia skrawków tkanek
tkance czerniaka.
utrwalonych w formalinie
i zatopionych w parafinie przy użyciu automatu do barwienia preparatów firmy VENTANA.
Wynik powinien zostać zinterpretowany przez wykwalifikowanego histopatologa w oparciu
o badania histopatologiczne, odpowiednie dane kliniczne i badania kontrolne. To
przeciwciało jest przeznaczone do stosowania w diagnostyce in vitro (IVD).
PODSUMOWANIE I OBJAŚNIENIA
S100 ulega ekspresji na szeregu rodzajów komórek pochodzenia mezodermalnego,
neuroektodermalnego i nabłonkowego, w tym komórkach glejowych i nerwowych,
komórkach Schwanna, melanocytach, komórkach tkanki chrzęstnej i tłuszczowej,
komórkach mięśniowo-nabłonkowych oraz komórkach Langerhansa.
S100 to mające masę 20 kD kwaśne białko wiążące wapń o nieznanej funkcji składające
się z dwóch podjednostek, z których każda może należeć do jednego z dwóch typów: alfa
albo beta. Te podjednostki ulegają ekspresji w różny sposób w wielu tkankach ludzkich1.
S100 to czuły marker czerniaka. Przeciwciała skierowane przeciwko białku S100 barwią
czerniaki bezbarwnikowe silniej niż nowotwory pigmentowane i umożliwiają wykrycie
czerniaków dających często odczyn negatywny w badaniu innymi markerami
melanocytów, np. czerniaków desmoplastycznych. Wzorzec barwienia jest
cytoplazmatyczny i jądrowy.
S100 ma bardzo wysoką czułość w przypadku czerniaków, ale wykazuje także pozytywne
wyniki w przypadku wielu guzów o charakterze innym niż melanocytyczny. S100 jest
zwykle obecny w komórkach nerwowych (komórkach glejowych i Schwanna) oraz
atakujących je komórkach rakowych1. Zaletą powszechnego występowania wysoce
immunoreaktywnego białka S100 w nerwach obwodowych obecnych w niemal każdej
tkance prawidłowej i chorobowej jest to, że charakteryzuje się kontrolą pozytywną
w barwieniu immunologicznym S1002.
ZASADY PRZEPROWADZANIA PROCEDURY
CONFIRM anti-S100 (Polyclonal) Primary Antibody to królicze przeciwciało poliklonalne
wytwarzane przeciw oczyszczonemu białku S100 mózgu bydlęcego. CONFIRM anti-S100
(Polyclonal) Primary Antibody wiąże się z białkiem S100 w zatopionych w parafinie
skrawkach tkanki i wykazuje schemat barwienia jądrowego i cytoplazmatycznego.
Przeciwciało można wykryć za pomocą zestawu do detekcji OptiView DAB IHC Detection
Kit (nr kat. 760-700/06396500001), zestawu do detekcji ultraView Universal DAB
Detection Kit (nr kat. 760-500/05269806001) lub zestawu do detekcji ultraView Universal
Alkaline Phosphatase Red Detection Kit (nr kat. 760-501/05269814001). Dodatkowe
informacje, patrz odpowiednie ulotki dołączone do opakowania.
2016-10-10
FT0700-410m
1/4
CONFIRM anti-S100 (Polyclonal) Primary Antibody zawiera odczynnik w ilości
wystarczającej na 50 testów.
Jeden dozownik 5 ml przeciwciała CONFIRM anti-S100 (Polyclonal) Primary Antibody
zawiera około 50 μg króliczego przeciwciała poliklonalnego.
Przeciwciało jest rozcieńczone w buforowanym fosforanem roztworze soli, zawierającym
białko nośnikowe i 0,05% ProClin 300 jako konserwant.
Całkowite stężenie białka w odczynniku wynosi około 3 mg/ml. Stężenie swoistego
przeciwciała wynosi około 10 μg/ml. Nie jest znana żadna nieswoista reaktywność
przeciwciał zawartych w tym produkcie.
CONFIRM anti-S100 (Polyclonal) Primary Antibody to królicze przeciwciało poliklonalne
wytwarzane przeciw materiałowi wodobrzusza.
Należy zapoznać się z treścią właściwej ulotki firmy VENTANA, dołączonej
do opakowania zestawu do detekcji, aby uzyskać szczegółowy opis następujących
kwestii: Zasady przeprowadzania procedury, Potrzebne materiały i odczynniki
niedołączone do zestawu, Pobranie próbki i przygotowanie do analizy, Procedury kontroli
jakości, Interpretacja wyników, Ogólne ograniczenia i Rozwiązywanie problemów.
MATERIAŁY WYMAGANE, ALE NIEDOSTARCZANE
Nie dołączono odczynników do barwienia, takich jak zestawy do detekcji firmy VENTANA,
ani elementów pomocniczych, takich jak pozytywne i negatywne kontrolne preparaty
tkankowe.
Nie wszystkie produkty przedstawione w ulotce dołączonej do opakowania są dostępne
we wszystkich rejonach geograficznych. Należy skonsultować się z lokalnym
przedstawicielem odpowiedzialnym za wsparcie techniczne.
PRZECHOWYWANIE
Po otrzymaniu preparat nieużywany przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie zamrażać.
W celu zapewnienia właściwego dozowania odczynnika i trwałości przeciwciała po
każdym użyciu należy założyć zatyczkę i niezwłocznie umieścić dozownik w lodówce
w pozycji pionowej.
Na każdym dozowniku przeciwciała podana jest data ważności. Prawidłowo
przechowywany odczynnik zachowuje trwałość do daty określonej na etykiecie. Nie należy
stosować odczynnika po upływie terminu ważności.
PRZYGOTOWANIE PRÓBKI
Do stosowania z tym przeciwciałem pierwszorzędowym nadają się rutynowo
przygotowane tkanki, utrwalone w formalinie i zatopione w parafinie, pod warunkiem
stosowania zestawów do detekcji firmy VENTANA i zautomatyzowanych urządzeń serii
VENTANA BenchMark IHC/ISH. Zalecanym środkiem do utrwalania tkanek jest 10%
obojętna, zbuforowana formalina3. Preparaty należy niezwłocznie wybarwić, ponieważ
antygenowość ciętych skrawków tkanek może z czasem ulegać osłabieniu.
Przy badaniu nieznanych preparatów zaleca się jednoczesne przeprowadzanie kontroli
pozytywnej i negatywnej.
OSTRZEŻENIA I ŚRODKI OSTROŻNOŚCI
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Do stosowania w diagnostyce in vitro (IVD).
Wyłącznie do zastosowania profesjonalnego.
W tym preparacie jako konserwant zastosowano ProClin 300. Został on uznany
za środek drażniący i jego kontakt ze skórą może powodować uczulenie. Podczas
pracy z produktem należy w uzasadnionym stopniu stosować środki ostrożności.
Unikać kontaktu odczynników z oczami, skórą i błonami śluzowymi. Stosować
odzież i rękawice ochronne.
Materiały pochodzenia ludzkiego lub zwierzęcego należy traktować jak materiały
niebezpieczne biologicznie i usuwać z zachowaniem właściwych środków
ostrożności.
Unikać kontaktu odczynników z oczami i błonami śluzowymi. W przypadku kontaktu
odczynników z wrażliwymi miejscami spłukiwać obfitą ilością wody.
Skażenie mikrobiologiczne odczynników może skutkować otrzymaniem
nieprawidłowych wyników.
W celu uzyskania informacji na temat zalecanej metody utylizacji produktu należy
skontaktować się z władzami lokalnymi i/lub krajowymi.
Dodatkowe informacje na temat bezpieczeństwa można znaleźć w Karcie
charakterystyki produktu oraz w Przewodniku po symbolach i zwrotach dotyczących
zagrożeń na stronie www.ventana.com.
18088PL Rev D
PROCEDURA BARWIENIA
Przeciwciała podstawowe firmy VENTANA zostały opracowane w celu stosowania
w urządzeniach VENTANA BenchMarkIHC/ISH razem z zestawami do detekcji
i akcesoriami firmy VENTANA. Zalecane protokoły barwienia zawiera Tabela 1, Tabela 2
i Tabela 3.
Te przeciwciała zostały zoptymalizowane do określonego czasu inkubacji, jednak
użytkownik jest zobowiązany do walidacji wyników uzyskanych z zastosowaniem tego
odczynnika.
Parametry procedur zautomatyzowanych mogą być wyświetlane, drukowane i edytowane
zgodnie z procedurą opisaną w Instrukcji obsługi urządzenia. Więcej informacji na temat
procedur barwienia immunohistochemicznego znajduje się w ulotce dołączonej
do opakowania odpowiedniego zestawu do detekcji firmy VENTANA.
Tabela 1. Zalecane protokoły barwienia dla odczynnika CONFIRM anti-S100 (Polyclonal)
Primary Antibody z użyciem zestawu do detekcji ultraView DAB IHC Detection Kit oraz
urządzeń BenchMark GX, Benchmark XT i BenchMark ULTRA.
Rodzaj procedury
Metoda
Odparafinowanie
Wybrana
Cell Conditioning
(odsłanianie antygenu)
Cell Conditioning 1
BenchMark GX i XT Mild (30 min)
Urządzenie BenchMark ULTRA 36 min (łagodnie)
Przeciwciało (pierwotne)
Urządzenie BenchMark GX
16 minut, 37°C
Urządzenie BenchMark XT
20 minut, 37°C
Urządzenie BenchMark ULTRA
24 minuty, 36°C
ultraBlock*
8 minut
Barwienie kontrastowe
Hematoxylin II, 4 minuty
Po barwieniu
kontrastowym
Bluing, 4 minuty
Tabela 3. Zalecane protokoły barwienia dla odczynnika CONFIRM anti-S100 (Polyclonal)
Primary Antibody z użyciem zestawu do detekcji OptiView DAB IHC Detection Kit oraz
urządzenia BenchMark GX instrument, Benchmark XT i BenchMark ULTRA.
Rodzaj procedury
Metoda
Odparafinowanie
Wybrana
Cell Conditioning
(odsłanianie antygenu)
Cell Conditioning 1
Urządzenia BenchMark GX, XT i ULTRA 16 min
Inhibitor peroksydazy
przed przeciwciałem
podstawowym
Wybrana
Przeciwciało (pierwotne)
Urządzenie BenchMark GX i XT
12 minut, 37°C
Urządzenie BenchMark ULTRA
12 minut, 36°C
Opcja 2*
8 minut
Barwienie kontrastowe
Hematoxylin II, 4 minuty
Po barwieniu
kontrastowym
Bluing, 4 minuty
* Odczynnik blokujący (P/N 760-219)
Ze względu na zmienność utrwalania i obróbki tkanek, jak również zmienność między
poszczególnymi urządzeniami i warunkami środowiska laboratoryjnego, konieczne może
być wydłużenie lub skrócenie czasu inkubacji przeciwciała pierwotnego i kondycjonowania
komórek (cell conditioning) lub ich wstępnej obróbki proteazą, zależnie od próbki,
zastosowanej metody detekcji i preferencji użytkownika. Więcej informacji na temat
zmiennych związanych z utrwalaniem można znaleźć w pracy „Immunohistochemistry
Principles and Advances” (Podstawy i postępy immunohistochemii)4.
TKANKA DO DODATNIEJ PRÓBY KONTROLNEJ
* Odczynnik blokujący (P/N 760-219)
Tabela 2. Zalecany protokół barwienia dla przeciwciała CONFIRM anti-S100 (Polyclonal)
Primary Antibody z użyciem zestawu do detekcji ultraView Universal Alkaline
Phosphatase Red Detection Kit oraz urządzeń BenchMark GX, Benchmark XT i
BenchMark ULTRA.
Zalecana pozytywna kontrola tkankowa to wyrostek. Komórki Schwanna we włóknach
nerwów obwodowych, zwojowe komórki satelitarne w warstwie mięśni i podśluzówce
powinny być silnie pozytywne podobnie jak adipocyty i komórki dendrytyczne oraz
makrofagi w blaszce właściwej. Komórki nabłonkowe powinny być negatywne.
INTERPRETACJA WYBARWIENIA / OCZEKIWANE WYNIKI
Wzór barwienia komórek dla przeciwciała CONFIRM anti-S100 (Polyclonal) jest jądrowy
i cytoplazmatyczny.
Rodzaj procedury
Metoda
SZCZEGÓLNE OGRANICZENIA
Odparafinowanie
Wybrana
Cell Conditioning
(odsłanianie antygenu)
Cell Conditioning 1
BenchMark GX i XT Mild (30 min)
Urządzenie BenchMark ULTRA 36 min (łagodnie)
Przeciwciało (pierwotne)
Urządzenie BenchMark GX
16 minut, 37°C
Urządzenie BenchMark XT
20 minut, 37°C
Urządzenie BenchMark ULTRA
24 minuty, 36°C
System detekcji OptiView jest ogólnie bardziej czuły niż inne systemy detekcji. Użytkownik
musi walidować wyniki uzyskane przy użyciu tego odczynnika oraz systemów detekcji.
Zaobserwowano, że tkanki prawidłowe i nowotworowe, które barwią się negatywnie pod
względem przeciwciała CONFIRM anti-S100 (Polyclonal) Primary Antibody przy użyciu
zestawu iView DAB Detection mogą barwić się pozytywnie przy użyciu systemów
detekcyjnych wymienionych w ulotce dołączonej do opakowania.
ultraBlock*
8 minut
Barwienie kontrastowe
Hematoxylin II, 4 minuty
Po barwieniu
kontrastowym
Bluing, 4 minuty
CHARAKTERYSTYKA ROBOCZA
Przeprowadzono badania barwienia preparatem pod kątem jego swoistości, czułości i
powtarzalności. Wyniki tych badań można znaleźć w Tabela 4 i Tabela 5 oraz rozdziale
Powtarzalność.
* Odczynnik blokujący (P/N 760-219)
2016-10-10
FT0700-410m
2/4
18088PL Rev D
Swoistość
Tabela 4. Swoistość przeciwciała CONFIRM anti-S100 (Polyclonal) Primary Antibody
oceniano na podstawie badania próbek tkanek zdrowych, po ich utrwaleniu w formalinie
i zatopieniu w parafinie.
Nowotwór
Liczba
pozytywnych/
wszystkich
przypadków
Tkanka
Liczba
pozytywnych/
wszystkich
przypadków
Mózg
3/3
Grasica
0/3
Móżdżek
3/3
Szpik kostny
0/3
Nadnerczea
2/3
Płuco
0/3
Jajnik
0/3
Mezotelium płuca
0/3
Trzustkab
2/3
Serce
0/3
Węzeł chłonny
0/3
Przełyk
0/3
Przytarczyce
0/3
Żołądek
0/3
Przysadka
0/3
Jelito cienkie
0/3
Jądroc
2/3
Okrężnica
0/3
Tarczyca
0/4
Wątroba
0/3
Sutekd
5/5
Ślinianka
0/3
Śledziona
0/3
Nerka
Migdałek
0/3
Endometrium
Mięśnie szkieletowe
Tkanka
Nerw obwodowy
Rak zarodkowy
0/1
Rak rdzeniowy tarczycy
1/1
Rak brodawkowaty tarczycy
0/1
Inwazyjny rak przewodowy
0/8
Niskozróżnicowany rak drobnokomórkowy płuca
0/1
Rak płaskonabłonkowy płuca
0/2
Gruczolakorak płuca
0/1
Gruczolakorak przełyku
0/1
Gruczolakorak śluzowy
0/1
Gruczolakorak jelita cienkiego
0/1
Złośliwy guz podścieliskowy jelita cienkiego
0/1
Gruczolakorak okrężnicy
0/1
Nowotwór z komórek śródmiąższowych okrężnicy
0/1
Gruczolakorak (odbytu)
0/1
0/3
Złośliwy guz podścieliskowy odbytu o umiarkowanej złośliwości
0/1
Gruczoł krokowy
0/3
Rak wątrobowokomórkowy
0/1
0/3
Szyjka macicy
0/3
Wątrobiak zarodkowy
0/1
0/3
Skóra
Rak jasnokomórkowy nerek
0/1
Gruczolakorak (punktacja Gleasona: 3+3) (gruczołu krokowego)
0/1
Gruczolakorak (punktacja Gleasona: 3+4) (gruczołu krokowego)
0/1
Mięśniak gładkokomórkowy macicy
0/1
Gruczolakorak macicy
0/1
Rak jasnokomórkowy macicy
0/1
Rak płaskonabłonkowy szyjki macicy
0/2
Mięśniakomięsak prążkowany zarodkowy
0/1
Czerniak złośliwy odbytnicy
1/1
Rak podstawnokomórkowy
0/1
Rak płaskonabłonkowy skóry
0/1
Nerwiakowłókniak
5/7
Nerwiak płodowy
0/1
Międzybłoniak złośliwy
0/1
Rak nabłonka dróg moczowych
0/1
Mięsak gładkokomórkowy o niskim stopniu złośliwości
0/1
Mięśniakomięsak z komórek wrzecionowatych
0/1
Mięsak gładkokomórkowy o umiarkowanym stopniu złośliwości
0/1
Chłoniak rozlany z limfocytów B wielkokomórkowy
0/3
11/11
Pęcherz moczowy
44/45
0/3
a Komórki koszyczkowe, b komórki wysepek, c komórki Sertoliego, d komórki mięśniowo-
nabłonkowe
Czułość
Tabela 5. Czułość przeciwciała CONFIRM anti-S100 (Polyclonal) Primary oceniano na
podstawie badania próbek tkanek nowotworowych, po ich utrwaleniu w formalinie
i zatopieniu w parafinie.
Nowotwór
Liczba
pozytywnych/
wszystkich
przypadków
Glejak
2/2
Oponiak
2/4
Wyściółczak złośliwy
2/2
Skąpodrzewiak
1/1
Surowiczy gruczolakorak jajnika
0/1
Gruczolakorak jajnika
0/1
Rak komórek wyspowych
0/1
Gruczolakorak trzustki
0/1
Nasieniak
0/1
2016-10-10
FT0700-410m
Liczba
pozytywnych/
wszystkich
przypadków
3/4
18088PL Rev D
Nowotwór
Liczba
pozytywnych/
wszystkich
przypadków
Ziarnica złośliwa
0/1
Chłoniak anaplastyczny wielkokomórkowy
0/1
Czerniak złośliwy
41/46
Hiperplazja sutka
5/5
Gruczolakowłókniak sutka
3/3
Inwazyjny rak zrazikowy
0/2
Choroba Pageta (sutek)
0/1
Tłuszczakomięsak
8/8
Skąpodrzewiakogwiaździak
1/1
Gwiaździak
1/2
Glejakomięsak
1/1
Chłoniak z limfocytów T
0/1
Złośliwy nerwiak
3/20
Niedojrzały guz neuroektodermalny
0/2
Nerwiak osłonkowy
Nerwiak zwojowy
DANE KONTAKTOWE
Ventana Medical Systems, Inc.
1910 E. Innovation Park Drive
Tucson, Arizona 85755
USA
+1 520 887 2155
+1 800 227 2155 (USA)
www.ventana.com
Roche Diagnostics GmbH
Sandhofer Strasse 116
D-68305 Mannheim
Germany
10/12
2/2
Powtarzalność
Przeprowadzono badania powtarzalności dla przeciwciała CONFIRM anti-S100
(Polyclonal) Primary Antibody w celu określenia:
•
odtwarzalności w obrębie jednej lub kilku serii na aparacie BenchMark ULTRA;
•
odtwarzalności wyników w obrębie platformy za pomocą urządzeń BenchMark GX,
BenchMark XT i BenchMark ULTRA;
•
odtwarzalności między platformami oraz między urządzeniami BenchMark GX,
BenchMark XT oraz BenchMark ULTRA.
Wyniki wszystkich badań mieściły się w zakresie dopuszczalnej normy.
PIŚMIENNICTWO
1.
2.
3.
4.
Taylor RT and Cote RJ. Immunomicroscopy: A Diagnostic Tool for the Surgical
Pathologist, 2nd Edition. Philadelphia: W.B. Saunders Company; 1994.
True L. Atlas of Diagnostic Immunohistopathology. Philadelphia: J.B. Lippincott
Company; 1990.
Carson F, Hladik C. Histotechnology: A Self Instructional Text, 3rd edition. Hong
Kong: American Society for Clinical Pathology Press; 2009.
Roche PC, Hsi ED. Immunohistochemistry-Principles and Advances. Manual of
Clinical Laboratory Immunology, 6th edition. In: NR Rose, ed. ASM Press; 2002.
WŁASNOŚĆ INTELEKTUALNA
BENCHMARK, CONFIRM, OPTIVIEW, ULTRAVIEW i VENTANA są znakami towarowymi
firmy Roche.
Wszystkie pozostałe znaki towarowe stanowią własność odpowiednich właścicieli.
© 2016 Ventana Medical Systems, Inc.
2016-10-10
FT0700-410m
4/4
18088PL Rev D