Specsheet Template CE

Polyclonal Rabbit
Anti-Laminin
nr kat. Z 0097
Przeznaczenie
Do stosowania w diagnostyce in vitro.
Przeciwciała Polyclonal Rabbit Anti-Laminin przeznaczone są do stosowania w immunocytochemii.
Przeciwciało znakuje lamininę obecną w błonie podstawnej. Przeciwciało może być przydatne do
charakteryzacji zachowania błony podstawnej, np. w raku sutka (1, 2) i w gruczolakorakach płuc (3). Wyniki
panelu przeciwciał są pomocne w diagnostyce różnicowej. Interpretacji wyniku — z uwzględnieniem kontekstu
klinicznego oraz wyników innych metod diagnostycznych — powinien dokonać wykwalifikowany patolog.
Wprowadzenie
Lamininy stanowią dużą, heterotrimeryczną grupę glikoprotein błony podstawnej, składających się z łańcuchów
i Obecnie znanych jest 5 odmian łańcucha , 3 łańcucha  i 3 , tworzących razem przynajmniej 15 różnych
izoform (4). Izoformy laminin charakteryzują się różną lokalizacją, swoistą dla danej tkanki i danego etapu rozwoju.
Jak dotąd zidentyfikowano ponad 20 powierzchniowych receptorów komórkowych laminin, takich jak integryny,
proteoglikany, lektyny, gangliozydy, sulfatydy, amyloidowe białka prekursorowe i transferazy galaktozylowe (5, 6).
Zaobserwowano, że lamininy pobudzają adhezję i migrację komórek, aktywność proteaz, proliferację, wzrost
nowotworów, angiogenezę i powstawanie przerzutów.
Dostarczany odczynnik
Frakcja oczyszczonej immunoglobuliny króliczej surowicy odpornościowej w postaci ciekłej w 0,1 mol/L NaCl,
z dodatkiem 15 mmol/L NaN3.
Stężenie białka (g/L): patrz etykieta na fiolce.
Immunogen:
Laminina wyizolowana z linii komórkowej L2 szczurzego raka pęcherzyka żółtkowego.
Swoistość
Przeciwciało znakuje lamininę w błonach podstawnych. Ślady zanieczyszczeń przeciwciałami usunięto przez
absorpcję w fazie stałej z ludzkimi i szczurzymi białkami osoczowymi oraz immunoglobulinami szczurzymi.
W immunoelektroforezie krzyżowej przy zastosowaniu 12,5 µL przeciwciał na cm 2 powierzchni żelu na 2 µL
osocza ludzkiego, 2 µL osocza szczurzego lub 20µg immunoglobulin szczurzych, pojawia się wyłącznie
precypitat odpowiadający lamininie. Odczyn: Coomassie Brilliant Blue.
Jak wykazano w badaniach immunocytochemicznych, przeciwciało wykazuje reaktywność krzyżową z białkami
stanowiącymi odpowiedniki lamininy pochodzenia ludzkiego, mysiego (7) i szczurzego (8).
Środki ostrożności
1.
Odczynniki są przeznaczone dla przeszkolonych Użytkowników.
2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. Stężenie
NaN3 występujące w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN 3
z ołowiem lub miedzią, wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe
azydki metali. Przy usuwaniu resztek odczynnika używać dużych ilości wody do przepłukiwania, aby uniknąć
gromadzenia się azydków w instalacji kanalizacyjnej.
3. Podobnie jak w przypadku każdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, należy stosować
odpowiednie procedury postępowania.
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2–8 °C. Nie stosować po upływie terminu ważności podanego na opakowaniu.
Jeżeli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niż podane w ulotce dołączonej do opakowania,
Użytkownik powinien je zweryfikować. Nie ma jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności tego
produktu. Dlatego równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów należy wykonywać
dodatnie i ujemne próby kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie można wyjaśnić
różnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, należy się
skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy Dako.
Przygotowanie próbek
Skrawki parafinowe: Przeciwciało może być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków
zatapianych w parafinie. Zaleca się wstępną obróbkę próbek przy użyciu Dako Proteinase K, nr kat. S 3020.
Cieplne odmaskowanie antygenu przy użyciu Dako Target Retrieval Solution, pH 6, nr kat.
S 2369, Dako Target Retrieval Solution, nr kat. S 1700, Dako Target Retrieval Solution, pH 9, nr kat. S 2368,
lub Dako Target Retrieval Solution, High pH, nr kat. S 3308 okazało się nieskuteczne. W trakcie
przygotowywania i procedury znakowania immunocytochemicznego skrawki nie powinny wyschnąć.
Wykonanie odczynu
Rozcieńczenie: Przeciwciała Polyclonal Rabbit Anti-Laminin, nr kat. Z 0097, należy rozcieńczać za pomocą
odczynnika Dako Antibody Diluent, nr kat. S 0809, i można ich używać w zakresie rozcieńczeń
1:25-1:50 w przypadku stosowania do utrwalanych formaliną, zatopionych w parafinie skrawków migdałków, po
5-minutowej obróbce wstępnej enzymem Dako Proteinase K, nr kat. S 3020, i 30-minutowej inkubacji z
pierwotnym przeciwciałem w temperaturze pokojowej. Optymalne warunki mogą się różnić
w zależności od rodzaju materiału i sposobu jego przygotowania i powinny być określone indywidualnie
w każdym laboratorium. Do kontroli ujemnej zaleca się stosowanie odczynnika Dako Rabbit Immunoglobulin
Fraction (Solid-Phase Absorbed), nr kat. X 0936, rozcieńczonego do takiego samego stężenia białka, jak
przeciwciało. Jeżeli nie ustalono przy użyciu procedury wykonania odczynu, że przeciwciało rozcieńczone i
kontrola ujemna są stabilne, zaleca się rozcieńczenie odczynników bezpośrednio przed użyciem lub
(110631-002)
Z 0097/PL/KLI/08.06.04 s. 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
rozcieńczenie w roztworze Dako Antibody Diluent, nr kat. S 0809. Równolegle z próbkami pobranymi od
pacjentów należy analizować kontrole dodatnie i ujemne.
Wizualizacja: Zaleca się stosowanie zestawu DAKO LSAB+/HRP kit, nr kat. K 0679, i DAKO
EnVision+/HRP kits, nr kat. K 4008 i K 4010. Postępować zgodnie z procedurą dostarczoną z zestawem.
Charakterystyka
wydajnościowa
Przestrzeń pozakomórkowa znakowana przeciwciałem wykazuje odczyn błony podstawnej.
Tkanki prawidłowe: Stwierdzono, że przeciwciało znakuje błony podstawne w ludzkich migdałkach i nerkach.
Tkanki nieprawidłowe: W badaniu 220 przypadków nieinwazyjnych zmian sutka z obecnością ER znakowanie
przeciwciałem w 20 przypadkach nie wykazało wyraźnej immunoreaktywności w otaczających naruszonych
warstwach komórek mięśniowo-nabłonkowych, co sugerowało naruszenie również błony podstawnej (1).
W badaniu 53 przypadków raka płuc odmiany gruczolaka mieszanego pęcherzyków oskrzelikowych,
znakowanie przeciwciałem nie dało wyników w regionach zapadniętych pęcherzyków (40/53 przypadki) i
regionach bliznowaceń (53/53 przypadki), wskazując na całkowite zniszczenie błony podstawnej w tych
rejonach (3).
Piśmiennictwo
1. Man Y-g, Tai L, Barner R, Vang R, Saenger JS, Shekitka KM, et al. Cell clusters overlying focally disrupted
mammary myoepithelial cell layers and adjacent cells within the same duct display different
immunohistochemical and genetic features: implications for tumor progression and invasion. Breast Cancer
Res 2003;5:R231-41.
2. Jing X, Kakudo K, Murakami M, Nakamura Y, Nakamura M, Yokoi T, et al. Intraductal spread of invasive
breast carcinomas has a positive correlation with c-erb B-2 overexpression and vascular invasion. Cancer
1999;86:439-48.
3. Goto K, Yokose T, Kodama T, Nagai K, Nishiwaki Y, Ando M, et al. Detection of early invasion on the basis
of basement membrane destruction in small adenocarcinomas of the lung and its clinical implications. Mod
Pathol 2001;14:1237-1245.
4. Kutleša S, Siler U, Speiser A, Wessels JT, Virtanen I, Rousselle P, et al. Developmentally regulated
interactions of human thymocytes with different laminin isoforms. Immunology 2002;105:407-418.
5. Engel J. Laminins and other strange proteins. Biochemistry 1992;31:10643-51.
6. Engbring JA, Kleinman HK. The basement membrane matrix in malignancy. J Pathol 2003;200:465-70.
7. Kamba T, Higashi S, Kamoto T, Shisa H, Yamada Y, Ogawa O, et al. Animal Model. Failure of ureteric bud
invation. A new model of renal agenesis in mice. Am J Pathol 2001;159:2347-52.
8. Paku S, Schnur J, Nagy P, Thorgeirsson SS. Origin and structural evolution of the early proliferating oval
cells in rat liver. Am J Pathol 2001;158:1313-23.
Objaśnienie symboli
(110631-002)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Numer serii
Sprawdzić w instukcji
stosowania
Zużyć przed
Producent
Z 0097/PL/KLI/08.06.04 s. 2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17