Monoclonal Mouse Anti-Human Hepatocyte Klon OCH1E5

Monoclonal Mouse
Anti-Human
Hepatocyte
Klon OCH1E5
Nr kat. M 7158
Wydanie 18.12.02
Przeznaczenie
Do diagnostyki in vitro.
Monoclonal Mouse Anti-Human Hepatocyte, Klon OCH1E5, jest przeznaczone do stosowania w
immunocytochemii. Przeciwciało znakuje hepatocyty i jest narzędziem pomocnym w diagnostyce różnicowej guzów
wątrobowokomórkowych wogóle (1), w różnicowaniu jasnokomórkowych raków wątrobowokomórkowych od innych
nowotworów jasnokomórkowych (2) oraz w odróżnieniu wątrobiaka zarodkowego, zwłaszcza typu embrionalnego,
od innych drobnokomórkowych nowotworów dziecięcych (3). Identyfikacja różnicowa dokonywana jest w oparciu o
wyniki uzyskane dla panelu przeciwciał. Interpretacja musi być dokonana przez wykwalifikowanego patologa w
kontekście historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych.
Odczynnik dostarczony
Monoklonalne mysie przeciwciało dostarczone w formie płynnej jako nadsącz hodowli komórkowej dializowanej
wobec 0.05 mol/L Tris/HCl, pH 7.2, zawierający 15 mmol/L NaN3.
Klon: OCH1E5 (4). Izotyp: IgG1, kappa.
Stężenie mysiej IgG : Patrz etykietka na fiolce.
Immunogen
Utrwalona formaliną ludzka wątroba niewykorzystana do dokonania alloprzeszczepu z powodu jej
mechanicznego uszkodzenia (4).
Swoistość
Przeciwciało znakuje antygen, który wydaje się być zlokalizowany w frakcji mitochondrialnej homogenatu
wątroby (4).
Środki ostrożności
1. Do stosowania przez osoby przygotowane zawodowo.
2. Produkt zawiera azydek sodowy (NaN3), odczynnik chemiczny silnie toksyczny w czystej postaci. W stężeniu
obecnym w produkcie, chociaż nie klasyfikowanym jako niebezpieczne, azydek sodowy może reagować z
elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, tworząc silnie wybuchowe pochodne lub azydki tych
metali. Przy usuwaniu odpadów przepłukać spływ dużą ilością wody, aby uniknąć tworzenia się azydków.
3. Jak w przypadku każdego materiału biologicznego należy stosować odpowiednie procedury.
Przechowywanie
Przechowywać w temp. 2-8oC. Nie używać po upływie daty ważności wskazanej na opakowaniu. Jeśli produkt
był przechowywany w warunkach innych niż wskazane, użytkownik musi sprawdzić jakość produktu. Brak jest
widocznych oznak wskazujących na niestabilność niniejszego odczynnika. Dlatego kontrola pozytywna i
negatywna powinna być wykonywana równocześnie z próbkami pacjentów. Jeżeli uzyskuje się nieoczekiwane
wyniki bez zmiany procedur laboratoryjnych i można podejrzewać, że dzieje się to z winy przeciwciała, należy
skontaktować się z serwisem technicznym firmy Dako.
Przygotowanie próbek
Skrawki parafinowe: Przeciwciało może być zastosowane do znakowania tkanki utrwalonej w formalinie i
zatopionej w parafinie. Wymagane jest wstępne opracowanie tkanki z epitopami indukowanymi termicznie.
Optymalne rezultaty są uzyskiwane przy użyciu Dako Target Retrieval Solution, High pH, nr kat. S 3308, 10
mmol/l buforu cytrynianowego, pH 6.0 lub 10 mmol/L buforu Tris, 1 mmol/L EDTA, pH 9.0. Mniej optymalne
rezultaty są uzyskiwane przy użyciu Dako Target Retrieval Solution, nr kat. S 1700. Wstępne traktowanie
tkanek proteinazą K okazało się nieefektywne. Skrawki tkankowe nie powinny wyschnąć podczas wstępnego
traktowania lub podczas następującej procedury barwienia.
Mrożone skrawki tkankowe i preparaty komórkowe: Przeciwciało może być wykorzystane do znakowania
utrwalanych acetonem, mrożonych skrawków tkankowych (4).
Procedura barwienia
Rozcieńczanie: Monoclonal Mouse Anti-Human Hepatycyte, nr kat. M 7158, może być rozcieńczane w zakresie
od 1:25 do 1:50 jeżeli jest stosowane wobec skrawków ludzkiej wątroby utrwalonych w formalinie i zatopionych
w parafinie, po 20 minutach termicznej indukcji epitopów w Dako Target Retrieval solution, High pH, nr kat. S
3308 i 30 minutach inkubacji w temperaturze pokojowej z pierwotnym przeciwciałem. Optymalne warunki
reakcji, zmienne w zależności od rodzaju preparatu i sposobu jego przygotowania, powinny być ustalone
niezależnie dla każdego laboratorium. Zalecaną kontrolą negatywną jest Dako Mouse IgG1, nr kat. X 0931,
rozcieńczone do uzyskania takiego samego stężenia mysiej IgG jakie wykazuje stosowane pierwotne
przeciwciało. Jeżeli stabilność rozcieńczonego przeciwciała i kontroli negatywnej nie została określona w
aktualnej procedurze barwienia, zaleca się rozcieńczanie tych odczynników bezpośrednio przed użyciem, lub
rozcieńczanie w Dako Antibody Diluent, nr kat. S 0809. Kontrola pozytywna i negatywna powinny być
wykonywane równocześnie z próbkami pacjentów.
Wizualizacja: DAKO LSAB™+/HRP kit, nr kat. K 0679 oraz DAKO EnVision™+/HRP kits, nr kat. K 4004 i K
4006 są zalecane. Dla mrożonych skrawków tkankowych i preparatów komórkowych dobrą alternatywą jest
Dako APAAP kit, nr kat. K 0670 jeżeli nie ma znaczenia wybarwienie związane z endogenna peroksydazą.
Postępowanie zgodne z opisem procedury załączonym do wybranego zestawu wizualizacyjnergo.
Automatyzacja: Przeciwciało jest przystosowane do barwienia immunocytochemicznego przy użyciu
automatów.
(112020-002)
M 7158/PL/CE/18.12.02 s. 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
Charakterystyka wyników
Hepatocyty wyznakowane przeciwciałem wykazują zróżnicowany, ziarnisty cytoplazmatyczny model
wybarwienia, który czasami przypomina pierścień lub dyfuzyjny model wybarwienia całej cytoplazmy z
obecnością kanalikowego wzmożenia wybarwienia (4).
Prawidłowe tkanki: W obrębie wątroby przeciwciało znakuje hepatocyty. W prawidłowej wątrobie nie
zaobserwowano zróżnicowania nasilenia wybarwienia, ale w bezpośrednim sąsiedztwie guza można
zaobserwować osłabione wiązanie przeciwciała przez uciśnięte hepatocyty. Nie stwierdzono wiązania
przeciwciała w obrębie dróg żółciowych i przez komórki nie stanowiące miąższu wątroby. Podobnie skóra,
mięśnie gładkie i mięśnie szkieletowe, mezotelium, węzły chłonne, śledziona, płuca, sutek, przełyk, żołądek,
jelita, trzustka, drogi żółciowe, nerki, pęcherz moczowy, nadnercza, prostata, endometrium i jajnik są prawie
zawsze negatywne. Rzadkimi wyjątkami są ogniskowe, ale często silnie wiążące przeciwciało, obszary w
obrębie śluzówki jelita cienkiego występujące w mniejszości przypadków (4).
Patologiczne tkanki: Wśród pierwotnych raków wątrobowokomórkowych (HCC), 37/38 były pozytywne w reakcji
z przeciwciałem, z których 4 wykazywały tylko rzadkie wyznakowane komórki. Negatywnym przypadkiem był
stwardniający HCC. Wśród pozytywnych przypadków HCC zaobserwowano znaczne zróżnicowanie obrazu
analizowanych obszarów preparatów. Wśród analizowanych przerzutów HCC 4/5 były pozytywne (4). Panel 10
wcześniej zdiagnozowanych jasnokomórkowych raków wątrobowokomórkowych (HCC-CC) oraz 10
jasnokomórkowych raków nerki (RCC-CC) wykorzystano do testowania przeciwciała, które wykazało 100%
swoistość oraz 90% czułość odróżniania HCC-CC od RCC-CC (2). W kolejnych badaniach (1), obejmujących
65 guzów wątroby i 2 guzy pozawątrobowe u pacjentów z udokumentowanym nowotworem wątroby ,
przeciwciało wykazało 82% swoistości oraz 90% czułości w wykrywaniu nowotworów wątrobowokomórkowych
(1). 12/12 przypadków wątrobiaka zarodkowego było pozytywnych w reakcji z przeciwciałem, podczas gdy
26/26 wybranych nowotworów dziecięcych, włączając 5 guzów zarodkowych, 4 obwodowe guzy
neuroektodermalne/mięsaki Ewinga, 3 mięśniakomięsaki prążkowane, 5 nerwiaków niedojrzałych, 2 guzy
pałeczkowate, 3 chłoniaki i 4 guzy Wilmsa, były negatywne (3). Ogniska pozytywne w reakcji z przeciwciałem
zaobserwowano w 6/7 gruczolakorakach wątrobowych przewodu pokarmowego. Te rzadko występujące guzy
były także pozytywne co do alfa-1-fetoproteiny oraz CEA (5).
Literatura
1. Minervini MI, Demetris AJ, Lee RG, Carr BI, Madariaga J, Nalesnik MA. Utilization of hepatocyte-specific
antibody in the immunocytochemical evaluation of liver tumors. Mod Pathol 1997;10:686-92.
2. Murakata LA, Ishak KG, Nzeako UC. Clear cell carcinoma of the liver: a comparative immunohistochemical
study with renal clear cell carcinoma. Mod Pathol 2000;13:874-81.
3. Fasano M, Theise ND, Nalesnik M, Goswami S, Garcia de Davila MT, Finegold MJ, et al.
Immunohistochemical evaluation of hepatoblastomas with use of the hepatocyte-specific marker,
hepatocyte paraffin 1, and the polyclonal anti-carcinoembryonic antigen. Mod Pathol 1998;11:934-8.
4. Wennerberg AE, Nalesnik MA, Coleman WB. Hepatocyte paraffin 1: a monoclonal antibody that reacts with
hepatocytes and can be used for differential diagnosis of hepatic tumors. Am J Pathol 1993;143:1050-4.
5. Maitra A, Murakata LA, Albores-Saavedra J. Immunoreactivity for hepatocyte paraffin 1 antibody in
hepatoid adenocarcinomas of the gastrointestinal tract. Am J Clin Pathol 2001;115:689-94.
Objaśnienia symboli
(112020-002)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Numer serii
Sprawdź w instrukcji
stosowania
Zużyć przed
Producent
M 7158/PL/CE/18.12.02 s. 2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17