Dako AEC Substrate Chromogen Gotowy do uŜytku Nr

Dako
AEC Substrate Chromogen
Gotowy do uŜytku
Nr katalogowy K3464
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Niniejszy system substratu jest przeznaczony do uŜycia w immunohistochemicznych (IHC) metodach barwienia
opartych na peroksydazie oraz w metodach barwienia hybrydyzacji in situ (ISH). Po utlenieniu, AEC tworzy
produkt końcowy o czerwonym zabarwieniu w miejscu docelowego antygenu lub kwasu nukleinowego.
Informacje dotyczące (1) sposobu postępowania, (2) materiałów niezbędnych lecz nie dostarczonych,
(3) przechowywania, (4) przygotowania próbki, (5) procedury barwienia, (6) kontroli jakości, (7) rozwiązywania
problemów, (8) interpretacji wyniku barwienia i (9) ogólnych ograniczeń podano w rozdziale „General
Instructions for Immunohistochemical Staining” (Ogólne instrukcje dotyczące barwienia
immunohistochemicznego) lub w instrukcji systemu wykrywania
procedur IHC .
Odczynniki
dostarczane
Dołączono gotowy do uŜycia roztwór Substrate-Chromogen. Dostarczone objętości wystarczają do
wybarwienia, co najmniej 50 (15 mL) lub 500 (110 mL) skrawków tkankowych.
Ilość
1x15 mL
1x110 mL
10x11 mL
Opis
Do barwienia ręcznego
Do barwienia ręcznego
Zapakowane do uŜytku z urządzeniem Dako Autostainer.
Opis
Substrate-Chromogen: AEC Substrate-Chromogen zawiera 0,75 mg/mL 3-amino-9-etylokarbazolu w 2,5% N,Ndimetyloformamidzie i 0,05 mol/L buforu octanowego o pH 5,0, zawiera takŜe nadtlenek wodoru, środki
stabilizujące, wzmacniacze oraz środek przeciwbakteryjny.
Środki ostroŜności
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. W celu uniknięcia skaŜenia nigdy nie pipetować bezpośrednio z butelki. Wylewać Ŝądaną ilość do czystego
pojemnika i pipetować dopiero z niego. Nie wlewać z powrotem niewykorzystanego roztworu AEC do
oryginalnego pojemnika.
3. Nie przechowywać roztworu AEC, ani nie prowadzić barwienia w silnym oświetleniu, takim jak bezpośrednie
światło słoneczne.
4. W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą naleŜy nosić odpowiednie osobiste wyposaŜenie ochronne.
5. Niewykorzystany roztwór utylizować zgodnie z lokalnymi, wojewódzkimi i krajowymi rozporządzeniami.
6. Na Ŝądanie dostępne są karty charakterystyki bezpieczeństwa materiału.
Niebezpieczeństwo
AEC Substrate-Chromogen Ready-to-Use: 5-10% Polyethylene glycol, 1-5% N,N-Dimethylformamide
H360
MoŜe działać szkodliwie na płodność lub na dziecko w łonie matki.
H373
MoŜe powodować uszkodzenie narządów poprzez długotrwałe lub naraŜenie
powtarzane.
P201
Przed uŜyciem zapoznać się ze specjalnymi środkami ostroŜności.
P202
Nie uŜywać przed zapoznaniem się i zrozumieniem wszystkich środków
bezpieczeństwa.
P281
Stosować wymagane środki ochrony indywidualnej.
P260
Nie wdychać par.
P314
W przypadku złego samopoczucia zasięgnąć porady/zgłosić się pod opiekę lekarza.
P308 + P313
W PRZYPADKU naraŜenia lub styczności: Zwrócić się o pomoc lekarską.
P405
Przechowywać pod zamknięciem.
P501
Zawartość i pojemnik usuwać zgodnie z lokalnymi, regionalnymi, krajowymi i
międzynarodowymi przepisami.
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2–8°C. PRZECHOWYWANIE W TEMPERATURZE POWYśEJ 8°C WPŁYWA
NIEKORZYSTNIE NA TRWAŁOŚĆ PRODUKTU AEC SUBSTRATE-CHROMOGEN. DLA WYGODY,
SUBSTRAT AEC MOśE BYĆ UśYTY BEZPOŚREDNIO PO WYJĘCIU Z LODÓWKI I PRZED UśYCIEM NIE
MUSI BYĆ OGRZEWANY DO TEMPERATURY POKOJOWEJ. PO UśYCIU NALEśY DALEJ
PRZECHOWYWAĆ W TEMPERATURZE 2–8°C.
Brak oczywistych oznak wskazujących na niestabilność produktów. Dlatego teŜ naleŜy jednocześnie testować
kontrole dodatnie i ujemne podczas badania próbek pacjenta.
(127901-001)
P04039PL_01_K3464/2015.07 s. 1/2
W razie wystąpienia nieoczekiwanego barwienia, którego nie moŜna wytłumaczyć róŜnicami w procedurach
laboratoryjnych i podejrzenia, Ŝe przyczyną mogą być komponenty zestawu, prosimy o kontakt z Działem
Wsparcia Technicznego firmy Dako.
Przygotowanie
odczynników
Gotowy do uŜytku
Postępowanie
W przypadku barwienia metodą IHC oraz ISH, po inkubacji z odczynnikiem HRP, próbki naleŜy umieścić w
łaźni wodnej. Strząsnąć nadmiar buforu ze szkiełka i ostroŜnie je wytrzeć dookoła próbki.
1. Pokryć próbkę gotowym do uŜycia roztworem AEC. Inkubować przez 5–30 minut. W razie potrzeby
inkubację z produktem AEC Substrate-Chromogen moŜna przeprowadzać w wyŜszej temperaturze niŜ
temperatura pokojowa.
2. Delikatnie opłukać wodą destylowaną.
3. W razie potrzeby wykonać barwienie negatywne.
4. Przykryć szkiełkami nakrywkowymi przy pomocy wodnych środków mocujących.
Przy korzystaniu z metody odstępu kapilary naleŜy wziąć pod uwagę następujące zalecenia:
1. Nie jest konieczne dodawanie detergentów w celu obniŜenia napięcia powierzchniowego.
2. Wyciągnąć AEC Substrat-Chromogen na 20–30 sekund i spryskać roztwór przynajmniej dwa razy przed
inkubacją 5–30 minut.
Wyniki
W wyniku procedur IHC oraz ISH, produkt AEC Substrate-Chromogen wytwarza produkt końcowy o
czerwonym zabarwieniu w miejscu docelowego antygenu lub kwasu nukleinowego.
W celu dokonania prawidłowej interpretacji naleŜy wykonywać kontrolę ujemną jak i dodatnią przy kaŜdym
barwieniu. Kontrola dodatnia słuŜy jako wskaźnik prawidłowego wykonania obróbki próbki i prawidłowego się z
nią obchodzenia. Kontrole ujemne są przydatne do oceny nieswoistego barwienia. Nieswoiste barwienie, jeŜeli
obecne, ma rozmyty charakter.
Ograniczenia
Endogenna aktywność peroksydazowa i pseudoperksydazowa wykazana dla hemoglobiny, mioglobiny,
cytochromu i katalazy oraz neutrofilów, monocytów i eozynofilów, moŜe dawać wyniki fałszywie dodatnie. 3,4 W
tkance utrwalonej formaliną aktywność ta moŜe zostać zahamowana poprzez inkubację tkanki w 3% nadtlenku
wodoru na pięć minut przed zastosowaniem pierwszego przeciwciała lub sondy. Rozmazy krwi i szpiku
kostnego mogą zostać poddane działaniu produktu Peroxidase Block (Nr katalogowy S2001). JednakŜe
postępowanie to, nie znosi czerwono-brązowego zabarwienia hemoprotein. MoŜna uŜyć takŜe roztworu
metanolu i nadtlenku wodoru. JednakŜe, w trakcie tej procedury niektóre antygeny mogą ulec denaturacji.
AEC tworzy produkt końcowy rozpuszczalny w związkach organicznych. Dlatego konieczne jest korzystanie z
niealkoholowych barwień negatywnych, takich jak hematoksylina Mayera, Gilla lub hematoksylina Mayera
(Modyfikacja Lillie) (Nr katalogowy S3309), i środek mocowania na bazie wody, takie jak Glycergel Mounting
Medium (Nr katalogowy C0563) lub Faramount (Nr katalogowy S3025).
Intensywność czerwonego zabarwienia produktu końcowego moŜe ulec zmniejszeniu po długotrwałym
przechowywaniu, co jest typowe dla AEC, szczególnie, jeśli jest wystawiony na działanie światła.
Piśmiennictwo
1. Bioassay of 3-amino-9-ethylcarbazole-HCl for possible carcinogenicity, CAS No. 132-32-1. Carcinogenesis
Technology Report Series 1980; 93
2. List of substances which may be candidates for further scientific review and possible identification.
Classification and regulation as potential carcinogens. Fed Reg 1980; 45:157
3. Escribano LM, et al. Endogenous peroxidase activity in human cutaneous and adenoidal mast cells. J
Histochem Cytochem 1987; 35:213
4. Elias JM. Immunopathology: A practical approach to diagnosis. Chicago: American Society of Clinical
Pathologists Press 1990; 46
Edition 07/15
(127901-001)
P04039PL_01_K3464/2015.07 s. 2/2